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# Biologie# Biophysik

Neue Methoden zum Studieren von Membranproteinen

Forschung zeigt verbesserte Techniken zum Extrahieren von Membranproteinen in natürlichen Umgebungen.

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Membranproteine sind super wichtige Bestandteile in unseren Zellen. Sie spielen eine Rolle in verschiedenen biologischen Funktionen, wie Signalübertragung, Transport von Stoffen und dem Erhalt der Zellstruktur. Die Umgebung der Proteine in der Membran beeinflusst ihre Funktion und ihr Verhalten. Es ist wichtig, diese Proteine in ihrem natürlichen Umfeld zu studieren, um zu verstehen, wie sie funktionieren.

Aktuelle Forschungspraktiken

Früher haben Forscher Membranproteine mit Detergenzien untersucht, die die Membranstruktur stören. Obwohl Detergenzien Proteine extrahieren können, bewahren sie nicht den wichtigen Kontext der Membran. Das kann zu missverständlichen Schlussfolgerungen führen, wie die Proteine arbeiten. Jüngste Bemühungen zielen darauf ab, bessere Wege zu finden, diese Proteine zu untersuchen, ohne ihre Umgebung zu entfernen.

Neue Ansätze mit Polymeren

Eine vielversprechende Alternative zu Detergenzien ist die Verwendung von speziellen Polymeren, wie Styrol-Maleinsäure-Copolymere. Diese Polymere können Membranproteine in ihrer natürlichen Lipidumgebung einfangen, was es Wissenschaftlern ermöglicht, sie genauer zu untersuchen. Das Ziel ist es, kleine Strukturen namens Nanodiscs zu bilden, die die ursprüngliche Membran nachahmen und den nativen Kontext der Proteine bewahren.

Herausforderungen mit aktuellen Polymertechniken

Trotz der möglichen Vorteile der Polymere gibt es Herausforderungen. Die Effizienz, mit der Proteine mit Polymeren extrahiert werden, ist oft geringer als bei Detergenzien. Diese Einschränkung macht es für Forscher schwierig, diese neuen Methoden in grösserem Massstab zu verwenden. Viele Studien verlassen sich immer noch auf Detergenzien, weil sie bessere Ergebnisse bei der Extraktion einer Vielzahl von Proteinen liefern.

Bedarf an verbesserten Methoden

Um diese Herausforderungen zu bewältigen, brauchen Forscher neue Protokolle und Werkzeuge, um Membranproteine effizient zu extrahieren und dabei ihre nativen Umgebungen zu erhalten. Eine Plattform zu schaffen, die eine Hochdurchsatz-Extraktion von Proteinen direkt aus Zellmembranen ermöglicht, würde die Nutzbarkeit der Technologie erweitern. Das würde auch helfen, weniger häufig vorkommende Proteine zu untersuchen, sodass Wissenschaftler eine vielfältige Palette an Membranproteinen analysieren können.

Entwicklung einer umfassenden Datenbank

Um Forschern zu helfen, wurde eine umfassende Datenbank erstellt. Diese Datenbank enthält Informationen zu den optimalen Extraktionsbedingungen für über 2.000 einzigartige Membranproteine. Durch die Integration von Polymer-Extraktionsmethoden mit fortschrittlichen Techniken in der Proteinanalytik können Forscher besser verstehen, wie man Proteine effektiv extrahiert.

Hochdurchsatz-Assays

Ein wichtiger Teil dieser Forschung bestand darin, Hochdurchsatz-Assays zu entwickeln, die den Prozess des Testens verschiedener Polymere vereinfachen. Diese Assays bewerten, wie gut verschiedene Polymere Membranproteine aus lebenden Zellen extrahieren können. Durch die Verwendung fluoreszierender Marker können Forscher quantifizieren, wie viel von dem Protein extrahiert wird, was ihnen hilft herauszufinden, welche Polymere am besten für bestimmte Proteine funktionieren.

Analyse von Membranproteinen

In einer Reihe von Experimenten testeten Forscher verschiedene Polymere an verschiedenen Zelltypen. Sie stellten fest, dass einige Polymere besser funktionierten als andere bei der Extraktion von Membranproteinen. Diese Informationen wurden in einer Datenbank gesammelt, auf die Forscher zugreifen können, um die besten Bedingungen für die Extraktion bestimmter Proteine zu finden.

Validierung der Methoden

Um die Genauigkeit der neuen Methoden sicherzustellen, validierten Forscher ihren Ansatz mit fluoreszierenden Liposomen als Modelle. Durch den Vergleich der Ergebnisse mit etablierten Methoden bestätigten sie, dass die neuen Polymertechniken zuverlässige Daten liefern. Das schafft Vertrauen in die Verwendung dieser Methoden für das Studium verschiedener Membranproteine.

Umfassende Extraktionsdatenbank

Die neu entwickelte Datenbank ist eine wertvolle Ressource für Wissenschaftler, die Membranproteine untersuchen. Sie ermöglicht es den Forschern, schnell die besten Extraktionsbedingungen für ihre Proteine von Interesse zu finden. Durch die Nutzung eines gross angelegten quantitativen Proteomikansatzes wurde die Datenbank entwickelt, um Einblicke zu geben, wie man Proteine effizient und mit hoher Genauigkeit extrahiert.

Vorteile der neuen Extraktionsmethoden

Die neuen Methoden zeigen mehrere wichtige Vorteile:

  • Sie ermöglichen die Extraktion von Membranproteinen, während ihre natürlichen Umgebungen erhalten bleiben.
  • Forscher können detaillierte Informationen über die Extraktionseffizienz verschiedener Polymere für unterschiedliche Proteine abrufen.
  • Der Ansatz kann skaliert werden, um komplexe Proteininteraktionen zu studieren, was es erleichtert zu verstehen, wie Proteine in Zellfunktionen zusammenarbeiten.

Anwendungen in der Praxis

Mit der erfolgreichen Umsetzung dieser Methoden und der begleitenden Datenbank können Wissenschaftler Membranproteine jetzt effektiver extrahieren und reinigen als je zuvor. Das wird ein tieferes Verständnis dafür ermöglichen, wie Proteine in ihren natürlichen Umgebungen funktionieren.

Erforschung komplexer Interaktionen

Die Fähigkeit, Proteine in kleinen Nanodiscs zu extrahieren, eröffnet die Möglichkeit, komplexe Interaktionen zwischen Proteinen zu untersuchen. Zum Beispiel können Forscher untersuchen, wie Multi-Protein-Komplexe sich in der Membran verhalten, ohne ihren nativen Kontext zu verlieren. Das könnte zu neuen Entdeckungen über Protein-Funktionen und -interaktionen führen, die kritisch für die Zellgesundheit sind.

Zukünftige Richtungen

Die Forschung hört hier nicht auf. Es gibt das Engagement, die Datenbank weiter auszubauen und zusätzliche Zelltypen und Membranproteine zu integrieren. Das Ziel ist es, diese Ressource so umfassend wie möglich zu gestalten und verschiedene Szenarien abzudecken, die Forscher in ihren Studien antreffen könnten.

Fazit

Zusammenfassend stellen die Fortschritte bei der Extraktion von Membranproteinen einen bedeutenden Schritt vorwärts beim Studium dieser essentiellen Moleküle dar. Durch die Verwendung von Polymeren, um die nativen Umgebungen der Proteine zu bewahren, können Forscher wertvolle Einblicke in ihre Funktionen und Interaktionen gewinnen. Die Entwicklung einer umfassenden Datenbank ermächtigt Wissenschaftler weiter, die Membranbiologie zu erkunden und die Geheimnisse der Zellmembranen zu entschlüsseln.

Originalquelle

Titel: A proteome-wide quantitative platform for nanoscale spatially resolved extraction of membrane proteins into native nanodiscs

Zusammenfassung: The intricate molecular environment of the native membrane profoundly influences every aspect of membrane protein (MP) biology. Despite this, the most prevalent method of studying MPs uses detergent-like molecules that disrupt and remove this vital local membrane context. This severely impedes our ability to quantitatively decipher the local molecular context and comprehend its regulatory role in the structure, function, and biogenesis of MPs. Using a library of membrane-active polymers we have developed a platform for the high-throughput analysis of the membrane proteome. The platform enables near-complete spatially resolved extraction of target MPs directly from their endogenous membranes into native nanodiscs that maintain the local membrane context. We accompany this advancement with an open-access database that quantifies the polymer-specific extraction variability for 2065 unique mammalian MPs and provides the most optimized condition for each of them. Our method enables rapid and near-complete extraction and purification of target MPs directly from their endogenous organellar membranes at physiological expression levels while maintaining the nanoscale local membrane environment. Going beyond the plasma membrane proteome, our platform enables extraction from any target organellar membrane including the endoplasmic reticulum, mitochondria, lysosome, Golgi, and even transient organelles such as the autophagosome. To further validate this platform, we took several independent MPs and demonstrated how our resource can enable rapid extraction and purification of target MPs from different organellar membranes with high efficiency and purity. Further, taking two synaptic vesicle MPs, we show how the database can be extended to capture multiprotein complexes between overexpressed MPs. We expect these publicly available resources to empower researchers across disciplines to efficiently capture membrane nano-scoops containing a target MP and interface with structural, functional, and other bioanalytical approaches. We demonstrate an example of this by combining our extraction platform with single-molecule TIRF imaging to demonstrate how it can enable rapid determination of homo-oligomeric states of target MPs in native cell membranes.

Autoren: Kallol Gupta, C. Brown, S. Ghosh, R. McAllister, M. Kumar, G. Walker, E. Sun, T. Aman, A. Panda, S. Kumar, W. V. Li, J. Coleman, Y. Liu, J. E. Rothman, M. Bhattacharyya

Letzte Aktualisierung: 2024-08-04 00:00:00

Sprache: English

Quell-URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.10.579775

Quell-PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.10.579775.full.pdf

Lizenz: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Änderungen: Diese Zusammenfassung wurde mit Unterstützung von AI erstellt und kann Ungenauigkeiten enthalten. Genaue Informationen entnehmen Sie bitte den hier verlinkten Originaldokumenten.

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