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# 生物学# 合成生物学

pABAの細菌生産の進展

研究は遺伝子改変を使ってp-アミノ安息香酸の細菌生産を向上させる。

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バクテリアがpABA生産をバクテリアがpABA生産を増加させる向上するんだ。遺伝子改変で細菌のpABA生成量が大幅に
目次

産業バイオテクノロジーは、石油系化学物質に頼る代わりに、バクテリアみたいな小さな生き物を使って役立つ製品を作るんだ。これは化学産業が大量の温室効果ガスを生み出して環境に悪影響を与えるから、すごく重要なんだ。一部の生物学的プロセスには、シキミ酸経路っていうのがあって、これがアミノ酸や食品成分、薬、さらには燃料みたいな貴重なアイテムを作るのに役立つんだ。

シキミ酸経路は、簡単な分子が一連のステップを通じて大きなものに結合するところから始まるんだ。例えば、コリスマートみたいな化合物を作って、それをフェニルアラニンやチロシン、トリプトファンみたいな芳香族アミノ酸に変えることができるんだ。これらのアミノ酸は、いろんな製品やプロセスにとって大事なんだけど、大量に作るのは簡単じゃないんだ。スタート材料の入手やプロセスの制御、そして一部の製品がバクテリアにとって有害になるっていう課題があるんだ。

科学者たちは、特定の遺伝子の活動を変えることで、これらの貴重な製品の出力を増やそうとすることがよくあるんだ。特定の遺伝子をオンにしたりオフにしたりしたり、活動を増やしたりすることで、それを実現するんだ。でも、どの遺伝子を変える必要があるかにはまだ不確実性があるんだ。研究者たちは、特定のアイテムを異なるタイプのバクテリアで生産するために、ある遺伝子の組み合わせが他よりも効果的であることに気づいてるんだ。

ケーススタディ:p-アミノベンzo酸 (pABA) の生産

科学者たちが興味を持っている製品の一つが、p-アミノベンzo酸、つまりpABAなんだ。この化合物は、ビタミンの葉酸を作るのに使われて、製薬業界でも応用があるから重要なんだ。Pseudomonas putidaみたいなバクテリアでpABAを作るには、シンプルなビルディングブロックから始まる一連の反応に関与するいくつかの遺伝子が協力する必要があるんだ。

pABAの生産を制限する遺伝子を特定するために、研究者たちは統計的実験デザイン(DoE)っていう方法を使うことにしたんだ。このアプローチは、同時に複数の要因の影響を研究するのに役立って、必要な実験の数を減らせるんだ。一つ一つの遺伝子をテストする代わりに、多くの遺伝子を同時に調べることができるんだ。この戦略は、生産を高めるためにどの遺伝子が最も重要かを見つけるのに役立つんだ。

研究者たちはpABAの生産に関与する一連の遺伝子を選び、これらの遺伝子を使って異なる株のバクテリアを設計したんだ。遺伝子の活動を増やしたり減らしたりできるDNAの特定の部分を使ったんだ。これらの新しいバクテリア株を構築した後、各株がどれだけpABAを生産したかを測定したんだ。

実験の結果

計画された実験の中で、大部分の新しいバクテリア株がうまく作成されたんだ。pABAの生産は、異なる株の間で大きく異なったんだ。中にはちょっとしか生産しない株もあれば、もっと生産的な株もあったんだ。

これらの実験から集めたデータは、pABAの生産に正の影響を与える遺伝子や負の影響を与える遺伝子を理解するのに役立ったんだ。生産を良くするために高い活動が必要な遺伝子には、pabABやaroBが含まれてたんだ。それとは対照的に、過剰に活性化された一部の遺伝子は、実際にはpABAの生産量を減らしちゃったんだ。

特に、最も成果を上げた株は、遺伝子発現のレベルとpABAの生成量の間に強い関係があることを示してたんだ。これは、遺伝子の活動を注意深く調整することが生産を最大化するために重要だってことを示してるんだ。

pABA生産のさらなる最適化

異なる遺伝子活動の影響を特定した後、次のステップはpABAの生産をさらに最適化することだったんだ。研究者たちは遺伝子の活動を増やすだけでなく、一部の遺伝子を元のレベルに戻す可能性も考えたんだ。新しいテクニックを使って、役立つ遺伝子の発現をさらに強化したんだ。

これらの新しいテストでは、重要な遺伝子の軽い過剰発現がpABAの生産を改善することにつながることが分かったんだ。さらに、aroBの発現がpABAの出力に特に影響を与えることがわかったんだ。戦略的に遺伝子発現を調整することで、生産の限界をさらに押し上げることができたんだ。

研究の重要性と今後の方向性

この研究は、化学製品をより持続可能に生産する方法を開発するために重要なんだ。生き物を使うことで、化石燃料への依存を減らせるからね。バクテリアの中で遺伝子活動を微調整する能力は、貴重な化合物をより効率的に生産するための多くの可能性を開くんだ。

進展があったとはいえ、課題も残ってるんだ。遺伝子発現の最適化は複雑な作業なんだ。遺伝子の活動を調整することに加えて、他の要因も役割を果たすんだ。スタート材料の入手やバクテリアが成長する条件も含まれてるんだ。今後の研究では、これらの側面を探求して、生産をさらに向上させる必要があるんだ。

研究者たちは、有用な化合物を生産するために設計されたバクテリアの性能を向上させるために、さまざまな戦略を統合しようと目指してるんだ。その中には、他の生物からより良い遺伝子を使ったり、バクテリアが成長する環境を管理したり、pABA生産から資源を奪う競合プロセスを取り除く可能性もあるんだ。

結論として、この研究から得られた戦略や洞察は、バクテリアを使ってpABAのような重要な化学物質を持続可能に生産する可能性を強調してるんだ。バイオテクノロジーが進化し続ける中で、これらの設計された微生物が将来の化学生産で重要な役割を果たすことを願ってるよ。環境に優しくて効率的な代替品を提供できることが期待されてるんだ。

オリジナルソース

タイトル: Combinatorial engineering reveals shikimate pathway bottlenecks in para-aminobenzoic acid production in Pseudomonas putida

概要: Combinatorial approaches in metabolic engineering enable the optimization of multigene pathways, thereby improving product titers. However, the optimization of complex metabolic pathways is hindered by their multiple interactions. Testing all possible combinations of suitable genetic parts is often prevented by the large number of possible variants. A valuable alternative to this is to use statistical design of experiments and linear modeling to collect important information for optimization without testing every possible combination. The shikimate pathway is an example of a complex metabolic pathway involved in the production of aromatic compounds, which are prevalent in industry. In this study, we explore the impact of the modulation of the expression levels of all the genes in the shikimate and para-aminobenzoic acid (pABA) biosynthesis pathways for pABA production (a widely used industrial intermediate) in Pseudomonas putida. We used this approach to select 14 representative strains from a total of 512 possible combinations. We obtained a range of product titers from 2 to 186.2 mg/l. This information was used to guide a second round of strain construction to further increase the production to 232.1 mg/l. Using this strategy, we demonstrate that aroB expression, encoding 3-dehydroquinate synthase, is a significant limiting factor in the production of pABA.

著者: Maria Suarez-Diez, M. A. Campos-Magana, S. Moreno-Paz, V. A. P. Martins dos Santos, L. Garcia-Morales

最終更新: 2024-06-18 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.17.599342

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.17.599342.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

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