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# 生物学# 分子生物学

油を生産する酵母はサステイナブルな代替品

研究者たちは持続可能な方法でヤスを使ってパーム油を置き換えようとしている。

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酵母油の生産革新酵母油の生産革新に期待できそうだ。工学的に改良された酵母が持続可能なオイル
目次

植物由来のオイル、例えばパーム油は、食品や化粧品、パーソナルケア製品などの多くの製品でよく使われてるんだ。これらの製品の質感や味、保存期間を良くしてくれるけど、パーム油の需要が増えたことで大きな環境問題が起きてる。アジア、南アメリカ、アフリカの多くの森林がパーム油のプランテーションに置き換わっていて、この変化は地元環境やその森林に依存している人々に悪影響を及ぼして、森林伐採や気候変動といった問題に繋がってる。

この問題に対処するために、研究者たちはパーム油の持続可能な代替品を探してるんだ。 promisingな選択肢の一つは、オイルを生産する酵母の一種を使うこと。これらの酵母はオイルを生産する能力があって、伝統的な植物由来のオイルの良い代わりになるかもしれない。

オイル生産酵母

特に、Cutaneotrichosporon oleaginosusというタイプのオイル生産酵母は、非常に大きな可能性があることがわかってる。この酵母は特殊な条件下で、その体重の40%以上をオイルとして蓄積することができる。これは、特定の栄養素、特に窒素を制限すると、酵母が過剰な糖分を脂質や脂肪に変換するからなんだ。

C. oleaginosusは、他の産業の廃棄物など、さまざまな糖源で育つことができるから、持続可能なオイル生産には魅力的な選択肢なんだ。これらの廃棄物を利用することで、オイルを生産しながら廃棄物を減らせて、環境にも優しいプロセスになるね。

経済的実現可能性

C. oleaginosusの可能性にもかかわらず、大規模なオイル生産に使うのはまだ経済的に実現可能じゃない。研究によれば、経済的に成り立つためには、酵母のオイル生産量を増やす方法を見つける必要があるんだ。一部の科学者は、酵母の全細胞を使用して生産し、プロセスを最適化することを勧めてる。

オイル生産を改善するために、研究者たちは酵母の代謝や成長条件を改良するための先進的な技術を使い始めている。成長媒体中の炭素と窒素の比率や温度など、さまざまな要因がC. oleaginosusのオイル生産にどのように影響するかを研究してるんだ。

代謝工学

最近の研究では、特定の遺伝子改変が酵母のオイル生産能力を高めることができることがわかってきた。例えば、研究者たちは特定の代謝経路を操作することによって脂肪酸の生産を増やすことができた。CRISPRのような最先端のツールを使うことで、酵母の遺伝子を正確に変更してその性能を改善できるんだ。

ただ、C. oleaginosusをオイル生産のために最適にエンジニアリングする方法についてまだ多くのギャップがある。新しい技術やモデルが研究者たちが酵母の代謝経路を理解し、最適化するのを助けてるよ。

研究アプローチ

この研究では、Design-Build-Test-Learn (DBTL)というシステマティックな方法を使用した。この方法は、C. oleaginosusを使ってより効果的なオイル生産プラットフォームを開発するために、4つの主要なステップを繰り返すことを含んでる。

設計フェーズ

まず、設計フェーズでは、酵母の遺伝子発現パターンを調べて、オイル生産中に活発な遺伝子を特定したんだ。その後、これらの遺伝子を代謝経路にマッピングして、オイル生産が高い時にどのプロセスが影響を受けるかを見つけた。この分析は、さらなる研究のための重要な遺伝子を特定するのに役立ったよ。

構築フェーズ

構築フェーズでは、酵母を遺伝子的に改変することを目指した。新しい遺伝子を酵母に導入して、これらの変化がオイル生産能力にどのように影響するかを観察したんだ。このプロセスには、オイル生産を高められる遺伝子と共に酵母を共同変換することが含まれてる。

テストフェーズ

酵母が改変されたら、次はどれくらい効果があるかをテストするステップ。研究者たちは、改変された酵母と野生型(非改変)の株を異なる栄養条件で育てて、どの条件が高いオイル収量に繋がるかを見てる。彼らは、自分たちの改変の効果を確認するために制御実験を行った。

学習フェーズ

最後のフェーズでは、結果を分析した。研究者たちは、改変された株のオイル生産レベルを野生型と比較して、改善点を特定したんだ。彼らは、遺伝子改変によって酵母の成長とオイル生産にどのように影響したかを評価するために統計ツールを使用したよ。

遺伝子発現分析

研究者たちは、C. oleaginosusの3つの株を調べて、異なる栄養条件への反応に特に注意を払った。栄養が欠乏した条件で酵母を育てると、より多くのオイル蓄積が見られた。遺伝子発現を分析することで、ある株では高脂質条件下で806の遺伝子がアップレギュレーション(より活発)され、816の遺伝子がダウンレギュレーション(あまり活発でない)されていることがわかった。

この分析は、脂質(脂肪)生産に重要な遺伝子を特定するのに役立った。研究者たちはエネルギー生産と脂肪合成に関与する代謝経路を詳しく調べて、オイル生産を高める方法をよりよく理解しようとしているんだ。

経路分析

彼らはC. oleaginosusのエネルギー生産とオイル合成に関連する主要な経路を視覚化するための代謝マップを構築した。この分析では、脂質生産中により活発である特定の酵素がこの経路内に存在することが明らかになった。これには、糖を脂肪酸や脂質に変換する酵素が含まれている。

調査結果は、脂質合成に重要な分子であるNADPHを十分に供給することがオイル生産を高めるために必要だと示している。だから、この分子の供給を改善する戦略を考えることは、脂質の収量を増やすのに役立つかもしれない。

遺伝子オントロジー分析

研究者たちは、遺伝子オントロジー分析も行って、発現が異なる遺伝子を分類し、それが関与する生物学的プロセスを特定した。炭水化物代謝、脂質生合成、ビタミン生成に関連する遺伝子が脂質蓄積中にアップレギュレーションされた遺伝子の中で顕著に表れていることがわかった。

これらの結果は、オイル生産を高めるための成長媒体の改善のための重要な領域を浮き彫りにした。研究結果から、成長媒体に特定のビタミンやアミノ酸を補充することが提案されたよ。

フラックスサンプリング分析

研究者たちは、C. oleaginosusの計算モデルを使って、成長や脂質生産の最大化といった異なる代謝シナリオをシミュレーションした。このモデリングは、オイル収量に最も影響を与える代謝反応を特定するのに役立ったんだ。

分析の結果、遺伝子改変のターゲットリストが生成されて、オイル生産を高めるために過剰発現させるべき特定の酵素が強調された。このターゲットアプローチにより、研究者たちは最も有望な遺伝子改変に集中することができたよ。

実験的検証

潜在的な遺伝子ターゲットや成長媒体の補充を特定した後、研究者たちは予測を検証するための実験を行った。特定の栄養素、例えばビタミンやアミノ酸を成長媒体に追加した場合の、脂質生産への影響をテストしたんだ。

結果は、ビオチンとスレオニンを追加すると、酵母の脂質含量が大幅に増加したことを示した。これらの発見は、オイル生産を高めるために特定の栄養素が重要であることの強い証拠を提供したよ。

エンジニアリング株の特性評価

次に、研究者たちは改変された株を特性評価して、異なる栄養条件下でのパフォーマンスを評価した。エンジニアリング株がさまざまな環境でどのように反応するかを評価することで、脂質蓄積に最適な条件を特定できたんだ。

結果は、特定の改変がより高い脂質含量だけでなく、酵母の成長も改善することが示された。これは、遺伝子改変されたC. oleaginosusを工業的オイル生産に使う潜在性を強調してるね。

結論

この研究は、C. oleaginosusのオイル生産能力を改善するためのシステマティックなアプローチを成功裏に実施した。遺伝子発現を分析し、計算モデルを利用することによって、研究者たちは脂質生産を高めるための重要な遺伝子や栄養素を特定したんだ。

この発見は、C. oleaginosusのようなオイル生産酵母がパーム油の持続可能な代替品として大きな可能性を秘めていることを示唆している。遺伝子工学や代謝モデリングの進展が続けば、微生物由来のオイル生産をもっと経済的に実現可能で環境にも優しいものにする取り組みが強化されるだろう。

世界がより持続可能なオイルの選択肢を求める中で、こうした研究は産業と環境の両方に利益をもたらす解決策を見つけるための重要なステップとなるんだ。

オリジナルソース

タイトル: Model-driven engineering of Cutaneotrichosporon oleaginosus ATCC 20509 for improved microbial oil production

概要: Consumption of plant-based oils, especially palm oil, is increasing at an alarming rate. This boosted demand for palm oil has drastic effects on the ecosystem as its production is not sustainable. C. oleaginosus is an oleaginous yeast with great potential as a source for microbial-based oil production which is a sustainable alternative to palm oil. However, microbial processes are not yet economically feasible to replace palm oil, unto a large extent due to limited lipid accumulation in the microbe, which limits titers and productivity. Therefore, obtaining enhanced lipid accumulation is essential to render this process commercially viable. Herein we deployed a systematic, iterative Design-Build-Test-Learn (DBTL) approach to establish C. oleaginosus as an efficient fatty acid production platform. In the design step, we identified genes and medium supplements that improved lipid content. To this end, we compared its transcriptional landscape in conditions with high and low amounts of lipid production. A metabolic map was reconstructed and integrated with the expression data. Finally, the genome-scale metabolic model of C. oleaginosus was used to explore metabolism under maximal growth and maximal production conditions. The combination of these four analyses led to the selection of four overexpression targets (ATP-citrate lyase (ACL1), acetyl-CoA carboxylase (ACC), threonine synthase (TS), and hydroxymethylglutaryl-CoA synthase (HMGS)) and five media supplements (biotin, thiamine, threonine, serine, and aspartate). We established an electroporation-based co-transformation method to implement selected genetic interventions. These findings were experimentally validated in the build and test steps of the DBTL approach by adding supplements into the medium and overexpressing the identified genes. Characterization of ACL, ACC, and TS at various C/N ratios, and the addition of medium supplements provided up to 56% (w/w) lipid content, and a 2.5-fold increase in total lipid in the glycerol and urea-based defined medium. In the learn step, quadratic models identified the optimum C/N ratios shifted towards around C/N240. These results firmly confirm C. oleaginous as a sustainable alternative to replace palm as an oil source. HighlightsO_LITranscriptional profile and metabolic model analyzed, predicting genetic targets and medium supplements. C_LIO_LIGenetic targets and medium supplements for improved oil production. C_LIO_LIThe genetic toolbox for C. oleaginosus was expanded (co-transformation method, promoters, genes, and terminators). C_LIO_LIExperimental validations showed that biotin, and threonine increased lipid content. C_LIO_LIOverexpression of ACL1, ACC, and TS in C. oleaginosus provided higher oil content. C_LI Graphical Abstract O_FIG O_LINKSMALLFIG WIDTH=200 HEIGHT=76 SRC="FIGDIR/small/585731v1_ufig1.gif" ALT="Figure 1"> View larger version (21K): [email protected]@65d016org.highwire.dtl.DTLVardef@40952eorg.highwire.dtl.DTLVardef@22724_HPS_FORMAT_FIGEXP M_FIG C_FIG

著者: Maria Suarez-Diez, Z. E. Duman-Özdamar, M. K. Julsing, J. A. C. Verbokkem, E. Wolbert, V. A. P. Martins dos Santos, J. Hugenholtz

最終更新: 2024-03-19 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.19.585731

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.19.585731.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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