薬剤耐性大腸菌の検出を改善する
研究が、医療における耐性大腸菌をよりよく検出する新しい方法を明らかにした。
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抗菌薬耐性(AMR)は、世界中で深刻な問題になってるんだ。バイ菌が変化して、殺すために使われる薬に反応しなくなることが原因だよ。特に心配なのは、拡張スペクトラムβ-ラクタマーゼ(ESBL)を生成する大腸菌(E. coli)なんだ。このバイ菌は、感染症を治療するために使われる一般的な抗生物質に抵抗性を持ってるんだ。こういう抵抗性のあるバイ菌による感染は、入院期間が長くなったり、死のリスクが高まったりすることがあるんだ。
感染を治療するよりも、予防する方が良いから、そのためにはバイ菌がどう広がるかを知ることが重要だよ。でも、E. coliは健康な人間にもよく見られるから、病気を引き起こすこともあって、調べるのは難しいんだ。普通、ある人の便にはいくつかの種類のE. coliが含まれていて、時にはもっとたくさんの種類がいることもある。年を取るにつれて、抵抗性を持つE. coliの株が増えてくることもあるんだ。だから、科学者たちはE. coliのさまざまなタイプを区別するために、すごく詳しい方法を使う必要があるんだ。
医療現場でこれらのバイ菌がどうやって移るかを学ぶために、研究者たちはE. coliの株間の違いを正確に測定する方法を必要としているんだ。今、ESBLを生成するE. coliを調べるための一般的な方法は、特別なプレートでバイ菌を育てて、その抵抗性を確認するテストを使うことなんだ。この方法はバイ菌を特定するのに役立つけど、バイ菌が人から人へどう広がるかを示すには不十分なんだ。
いくつかの研究では、検出率を改善するためにラボで追加のステップを導入しようとしているよ。これは、選択的な寒天プレートに植える前に、特別なブロスでバイ菌を育てるという方法なんだ。この二段階の方法は、もっと多くの抵抗性バイ菌を見つけるのに役立つんだ。でも、どの方法が最適かについてはまだ議論が続いていて、最良の結果を得るために必要な条件についての合意はあまりないんだ。
異なる方法のテスト
これらの抵抗性バイ菌の検出を改善するために、研究者たちはさまざまなブロスの種類を調べて、どれが一番成長が良いかを見たよ。彼らは、四つの異なるブロスで参照となるE. coliの株をテストしたんだ。24時間ごとに10分おきに成長を測定したんだ。目標は、それぞれのブロスでバイ菌がどれくらい早く成長するかを調べることだったんだ。
研究者たちはまた、健康なボランティアからの便サンプルも調べたよ。彼らはその便を特定の溶液で混ぜて沈殿させ、上清をテストしたんだ。どのブロスがどれくらいインキュベートすれば、これらのサンプルからESBL生成のE. coliを回収できるかを見つけようとしてたんだ。
研究のもう一つの側面は、異なる選択的寒天プレートが事前濃縮の後にバイ菌をどれだけ回収できるかをテストすることだったんだ。彼らは、異なる時間や条件が抵抗性バイ菌の検出数に影響を与えることを見つけたんだ。
直接植え付けと事前濃縮の比較
事前濃縮がどれだけ効果的かを確認するために、研究者たちはそれを寒天プレートへの直接植え付けと比較したんだ。少量の抵抗性バイ菌を便に混ぜることで、両方の方法を使って回収率をテストできたんだ。事前濃縮がバイ菌の検出限界を大幅に改善したことがわかったんだ。
DNA抽出方法の比較
バイ菌を回収した後は、さらなる分析のためにDNAを抽出する必要があるんだ。研究者たちは、E. coliの株からDNAを抽出する異なる方法を比較して、収量、質、コストを評価したんだ。市販のキットや簡単な煮沸法を試したんだ。煮沸法は収量が良かったけど、詳細な分析に必要な質は提供できないかもしれないことがわかったんだ。
DNAの質は、さらなるテストやこれらのバイ菌の耐性パターンを理解するために重要なんだ。高品質のDNAが必要で、それによってバイ菌の遺伝子コード中の小さな変化、つまり一塩基変異(SNVs)を特定できるんだ。この変異を使って、科学者たちはこれらのバイ菌がどう広がり進化するかをより良く理解できるんだ。
ワークフローの検証
自分たちの方法が効果的に機能していることを確認するために、研究者たちは既知の株を使って便サンプルをスパイクして最適化したワークフローをテストしたんだ。また、すでにESBL生成のE. coliを持っていることが確認された患者からのサンプルも分析したんだ。どのケースでも、方法はバイ菌を正確に特定することができたんだ。
各サンプルから複数のコロニーを分析することで、株間の違いを明らかにすることができたんだ。これは、最適化された方法が伝達パターンを示す変異を信頼性高く検出できることを示す重要なステップだったんだ。
医療への影響
この研究の結果は、医療現場にとって重要なんだ。抵抗性バイ菌を正確に検出し特定するための方法を確立することで、病院はアウトブレイクをよりうまく管理できるんだ。これは、抵抗性バイ菌による感染の広がりを防ぐために重要なんだ。
現在、E. coliは人間の腸内の全体のバイ菌の中で小さな割合を占めているんだ。これが、従来の検査方法では抵抗性株を検出するのが難しい理由なんだ。でも、この研究はテストの前にサンプルを事前濃縮することが、検出率を大幅に改善できることを示したんだ。
この研究はまた、効率的なワークフローの重要性を強調しているよ。速い方法は結果を迅速に得ることができ、感染の広がりを防ぐための早期介入につながるんだ。
薬剤耐性の感染が世界中で増えている中で、これらのバイ菌がどう広がるかを理解することは不可欠なんだ。この知識は、伝播を遮断するためのターゲットを絞った予防戦略を作るのに役立つんだ。
全体として、結果は抵抗性バイ菌の効果的な検出と監視の必要性を強調しているんだ。今後の研究はこれらの結果を基にさらに方法を洗練させて、E. coliだけでなく臨床サンプルに存在する他の抵抗性バイ菌にも適用できるようにしていくことができるんだ。
タイトル: Optimised methods for the targeted surveillance of extended-spectrum beta-lactamase producing Escherichia coli in human stool
概要: Understanding transmission pathways of important opportunistic, drug resistant pathogens, such as extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) producing Escherichia coli, is essential to implementing targeted prevention strategies to interrupt transmission and reduce the number of infections. To link transmission of ESBL-producing E. coli (ESBL-EC) between two sources, single nucleotide resolution of E. coli strains as well as E. coli diversity within and between samples is required. However, the microbiological methods to best track these pathogens are unclear. Here we compared different steps in the microbiological workflow to determine the impact different pre-enrichment broths, pre-enrichment incubation times, selection in pre-enrichment, selective plating, and DNA extraction methods had on recovering ESBL-EC from human stool samples, with the aim to acquire high quality DNA for sequencing and genomic epidemiology. We demonstrate that using a 4-hour pre-enrichment in Buffered Peptone Water, plating on cefotaxime supplemented MacConkey agar and extracting DNA using Lucigen MasterPure DNA Purification kit improves the recovery of ESBL-EC from human stool and produced high-quality DNA for whole genome sequencing. We conclude that our optimised workflow can be applied for single nucleotide variant analysis of an ESBL-EC from stool.
著者: Fabrice E Graf, S. Gallichan, S. Forrest, E. Picton-Barlow, C. McKeown, M. Moore, E. Heinz, N. A. Feasey, J. M. Lewis
最終更新: 2024-04-12 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.04.02.24305201
ソースPDF: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.04.02.24305201.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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