マイクロバイオーム研究の進展:エタノール対メタノール抽出
新しい研究で、95%エタノールがマイクロバイオームの研究に効果的な代替手段だってわかったよ。
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目次
すべての人間は体内や体の表面に微生物を持って生まれてくるんだ。これらの小さな生き物は、バクテリア、真菌、ウイルスを含む微生物コミュニティを作ってて、これをマイクロバイオータって呼ぶんだ。彼らは私たちの健康や幸福に重要な役割を果たしていて、私たちの体の機能にも影響を与えるよ。特に研究が進んでるのは腸内マイクロバイオータで、これが脳の発達に影響したり、特定の癌に寄与したりすることも分かってきてる。だから、これらの微生物コミュニティの働きを理解することってすごく大事なんだ。
微生物や彼らが生産する化学物質を研究するために、科学者たちはしばしば質量分析に基づくターゲットなしのメタボロミクスっていう技術を使うんだ。この方法では、特定の化合物を狙わなくても幅広い化合物を分析できるんだ。
マイクロバイオーム研究の課題
マイクロバイオータに関する研究を行うとき、特に時間をかけてさまざまな個人からサンプルを集めるときに研究者は課題に直面することが多いんだ。サンプルは迅速に処理して、ちゃんと保存しないといけなくて、その状態を維持するためには液体窒素で即座に冷凍して、非常に低温で保管するのが標準的な方法なんだけど、これって難しくて高くつくこともあるんだ。
この問題に対処するために、研究者たちは95%エタノールの溶液に便のサンプルを保存することで、微生物群を最大8週間安定させることができると見つけたんだ。この方法は管理が簡単だし、95%エタノールは他のサンプル保存用の化学物質よりも安全なんだ。
サンプル収集と分析の新しい方法
エタノールをサンプル保存に使うアイデアを基にして、研究者たちはマトリックス法って呼ばれる方法を開発したんだ。この革新的なアプローチでは、95%エタノールが入ったサンプル収集管と自動ロボットを使ってサンプルを処理するんだ。この方法はプロセスを簡略化して、時間を節約し、コストを削減し、サンプル間の汚染を最小限に抑えることができる。さらに、同じサンプルから異なる化合物を抽出することもできて、分析がより効率的になるんだ。
エタノールを使ったメタボライトの抽出は以前に効果が確認されているけど、50%メタノールを使った別の一般的な方法との徹底した比較はされていないんだ。メタノールは有毒な物質で、扱うには特別な機器が必要なんだ。
エタノールとメタノールの抽出の比較
この研究は、95%エタノールを使うことで便のサンプルの50%メタノール抽出法と似た結果が得られることを示すことを目指しているんだ。研究者たちは、同意したボランティアから便のサンプルを集めて、これを分析のために3つの異なるサイズに分けたんだ。
集めたサンプルは、エタノールとメタノールの抽出法を使ってテストのために準備された。いくつかのサンプルはすぐに処理されたけど、他のサンプルは分析の前に1日または1週間エタノールに保存して、メタボライトが時間とともに安定しているかどうかを調べたんだ。
抽出比較の結果
2つの抽出方法の結果を比較したところ、科学者たちはどちらも似たような代謝化合物のプロファイルを生成したことがわかったんだ。実際、多くの化合物が2つの方法で検出されたし、エタノールの方法ではメタノールよりもさらにユニークな化合物が発見されたってこともあったから、便のサンプル内のメタボライトについてより包括的な洞察を提供するかもしれないって示唆してるんだ。
統計的手法を用いたさらなる調査では、異なる個人からのサンプルの代謝プロファイルが明確に区別されたことがわかって、エタノールやメタノールのどちらで処理されても同様だったんだ。つまり、どちらの方法も個々のユニークな微生物プロファイルに基づいて個人を特定するのに効果的なんだ。
エタノール中の便メタボロームの安定性
この研究からのもう一つの重要な発見は、95%エタノールで室温保存された便のサンプルが最大1週間安定していたことなんだ。これは、研究者がオフサイトでサンプルを収集しても、これらのサンプルに存在する微生物コミュニティに関する貴重な情報を失うことがないってことを示してるんだ。サンプルは必ずしもすぐに処理されるわけじゃないし、輸送条件も異なるから特に有益なんだ。
研究では、エタノールでの1週間の保存後にも代謝プロファイルは大きく変わらなかったことが示されたんだ。これは、さまざまな場所からサンプルを収集して後で分析する必要がある研究者にとって大きな利点なんだ。
データ分析でサンプリングの課題に対処する
マイクロバイオーム研究での一般的な課題の一つは、サンプル収集のばらつきなんだ。人によって便の水分量が異なるから、結果を正確に比較するのが難しいんだ。サンプルを手動で重さを量る代わりに、研究者たちはロバストセンター対数比変換っていう技術を使ってデータを分析したんだ。この方法は、サンプルの重さの違いを補正して、データをより信頼性のあるものにするんだ。
この技術を両方の抽出方法のデータに適用することで、研究者たちはサンプルの重さが結果に影響しないことを確認できたから、サンプル間の代謝プロファイルを公平に比較することができたんだ。
結論と今後の研究への影響
この研究は、95%エタノールを使ったマトリックス法が従来の50%メタノール抽出法の有効な代替手段であることを示しているんだ。この新しい方法は安全なだけじゃなく、サンプルの収集や分析の際の取り扱いも簡単にするんだ。研究者は、室温で最大1週間まで微生物コミュニティを効果的に保存し分析できることが示唆されていて、研究デザインの柔軟性を提供するんだ。
さらに、ロバストセンター対数比変換の使用は、不均一なサンプル収集によるバイアスを排除する助けになってるんだ。これによって、マイクロバイオーム研究の統合がより良くなり、微生物コミュニティが人間の健康にどのように影響するかを理解するために重要なんだ。
要するに、便メタボロームの研究における95%エタノール抽出の利用は、研究者にとって実用的で効率的、かつ安全なアプローチを提供するってことなんだ。これらの有望な結果は、私たちの体の微生物住人や健康に対する影響を理解することの重要性を強調しているよ。この分野の研究が進むにつれて、こうした方法は人間のマイクロバイオータやその健康や病気における役割を解明しようとする科学者にとって貴重なツールになっていくはずなんだ。
タイトル: Human untargeted metabolomics in the gut microbiome era: ethanol vs methanol
概要: Untargeted metabolomics is frequently performed on human fecal samples in conjunction with sequencing to unravel gut microbiome functionality. As sample collection efforts rapidly expand, with individuals often collecting specimens at home, metabolomics experiments should adapt to accommodate the safety and needs of bulk off-site collections. Here, we show that a 95% ethanol, safe to be shipped and handled, extraction pipeline recovers comparable amounts of metabolites as a validated 50% methanol extraction, preserving metabolic profiles differences between subjects. Additionally, the fecal metabolome remains relatively stable when stored in 95% ethanol for up to a week at room temperature. Finally, we suggest a metabolomics data analysis workflow using robust centered log ratio transformation, which removes variance introduced by different sample weights, allowing for reliable and integration-ready untargeted metabolomics experiments in gut microbiome studies.
著者: Simone Zuffa, V. Charron-Lamoureux, C. Brennan, A. Ambre, R. Knight, P. C. Dorrestein
最終更新: 2024-09-23 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.23.614605
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.23.614605.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。