Fortschritte bei der schnellen UTI-Diagnose
Neue Methoden zur schnelleren Erkennung von Harnwegsinfektionen könnten die Patientenversorgung verbessern.
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Inhaltsverzeichnis
Harnwegsinfektionen, oder UTIs, sind verbreitete Infektionen, die viele Menschen weltweit betreffen. Sie gehören zu den zweithäufigsten Infektionen, weshalb viele Leute deswegen zum Arzt gehen. UTIs werden oft mit Antibiotika behandelt und können zu ernsthaften Gesundheitsproblemen führen, wenn man sie nicht richtig behandelt.
In den letzten Jahren hat die Anzahl der UTI-Fälle zugenommen, was zu mehr Todesfällen im Zusammenhang mit diesen Infektionen geführt hat. Schwangere Frauen und Menschen mit geschwächtem Immunsystem sind besonders gefährdet. Wenn eine UTI nicht behandelt wird, kann sie sich zu einer schwereren Niereninfektion entwickeln, die als Pyelonephritis bekannt ist, und das kann zu ernsthaften Komplikationen wie Sepsis führen.
Ursachen und häufige Erreger
Die meisten UTIs werden durch Bakterien verursacht, die normalerweise im Darm leben. Die häufigsten Bakterien, die für UTIs verantwortlich sind, sind Escherichia Coli (E. coli), Klebsiella pneumoniae und Proteus mirabilis. Pilzinfektionen können auftreten, sind aber viel seltener.
Um eine UTI zu diagnostizieren, schauen Ärzte oft nach einem bestimmten Bakterienlevel im Urin. Generell deutet eine Anzahl von 100.000 Bakterien pro Milliliter (CFU/mL) auf eine UTI hin. Allerdings können auch niedrigere Werte je nach Situation signifikant sein.
Aktuelle Diagnosetechniken
Aktuell erfordert die Diagnose einer UTI in der Regel, eine Urinprobe ins Labor zu schicken, wo es ein oder zwei Tage dauern kann, um die Bakterien zu identifizieren und herauszufinden, welche Antibiotika am besten gegen sie wirken. Häufige Diagnosetechniken beinhalten das Wachsen der Bakterien im Labor, was zeitaufwendig sein kann.
Es gibt fortschrittliche Techniken wie Massenspektrometrie und Nukleinsäuretests, die den Identifikationsprozess beschleunigen können. Allerdings haben diese Methoden ihre eigenen Einschränkungen, wie z.B. dass die Bakterien vorher wachsen müssen.
Neue Techniken: Metagenomische Sequenzierung
Eine vielversprechende Methode zur Diagnose von UTIs ist die metagenomische Next-Generation-Sequenzierung (mNGS). Diese Methode ermöglicht die schnelle Identifizierung von Bakterien in einer Probe, ohne dass sie vorher kultiviert werden müssen. Durch die direkte Analyse der DNA aus der Urinprobe kann mNGS Krankheitserreger und deren Gene identifizieren, einschliesslich derjenigen, die Antibiotikaresistenz verleihen.
Ein spezielles Gerät namens MinION, das tragbar ist und über USB verbunden wird, wird für diese Art von Schnelltests in Betracht gezogen. Es kann Ergebnisse viel schneller liefern als traditionelle Methoden, potenziell innerhalb von Stunden.
DNA-Extraktion
Ein wichtiger Schritt bei der Verwendung von mNGS ist die Extraktion von DNA aus Urinproben. Dieser Prozess kann jedoch herausfordernd sein, da die Mengen an Bakterien im Urin im Vergleich zu anderen Probenarten wie Blut oder Stuhl gering sind. Bestimmte Produkte können helfen, die DNA effektiver zu extrahieren.
In jüngsten Tests wurden drei beliebte DNA-Extraktionskits evaluiert. Unter ihnen erwies sich das DNeasy Blood & Tissue Kit als das beste zur Gewinnung von hochwertiger DNA aus Urinproben.
Studienübersicht
Eine aktuelle Studie hatte zum Ziel, eine schnelle und effiziente Methode zur Erkennung von Bakterien aus versetzten Urinproben zu entwickeln. Die Forscher simulierten UTI-Bedingungen, indem sie bekannte Bakterien zu Urinproben hinzufügten. Danach bewerteten sie verschiedene DNA-Extraktionskits, um das beste für ihre Bedürfnisse zu finden.
Mit MinION für die Sequenzierung wollten sie herausfinden, ob sie schnell Pathogene und deren zugehörige Antibiotikaresistenzgene identifizieren konnten. Die Forscher konzentrierten sich auf zwei Bakterienkonzentrationen: 100.000 CFU/mL und 1.000 CFU/mL.
Schritte in der Studie
Probenvorbereitung
Die Studie begann mit der Vorbereitung von Urinproben. Die Forscher fügten spezifische Bakterien hinzu, um die Arten von Infektionen zu imitieren, die in klinischen Umgebungen zu sehen sind. Durch die Überwachung des Bakterienwachstums konnten sie feststellen, wie viele Bakterien in den Proben waren.
Testen von DNA-Extraktionskits
Als nächstes testeten sie drei verschiedene DNA-Extraktionskits, indem sie DNA aus den versetzten Urinproben extrahierten. Sie schauten, wie viel DNA sie aus jedem Kit gewinnen konnten, sowie wie schnell sie Ergebnisse erhielten und die Gesamtkosten des Extraktionsprozesses.
Das DNeasy Blood & Tissue Kit übertraf die anderen Kits und wurde zur bevorzugten Wahl für ihre Studie.
Sequenzierung der DNA
Nach der DNA-Extraktion sequenzierten die Forscher diese mit dem MinION-Gerät. Damit konnten sie die Bakterien identifizieren, die in den Proben vorhanden waren, und alle Antibiotikaresistenzgene, die mit den Erregern assoziiert sind. Sie wollten dies schnell tun, idealerweise Ergebnisse innerhalb weniger Stunden finden.
Ergebnisse der Studie
Die Studie zeigte vielversprechende Ergebnisse. Mit dem MinION-Gerät konnten sie die Erreger in Urinproben mit 100.000 CFU/mL viel schneller identifizieren als mit traditionellen Methoden. Sie fanden heraus, dass sie die Identifikation innerhalb von nur 10 Minuten nach Beginn des Sequenzierungsprozesses erreichen konnten.
Allerdings war es schwieriger, Bakterien bei niedrigeren Konzentrationen, wie 1.000 CFU/mL, zu identifizieren. Sie konnten nur einige Bakterien effektiv in dieser niedrigeren Konzentration identifizieren.
Bedeutung der schnellen Diagnose
Die Fähigkeit, Pathogene schnell und genau zu identifizieren, ist entscheidend für die effektive Behandlung von UTIs. Verzögerungen bei der Identifizierung der richtigen Bakterien können dazu führen, dass die falschen Antibiotika verwendet werden, was zu einem Behandlungsversagen und erhöhten Komplikationen für den Patienten führen kann.
Mit dem zunehmenden Problem der Antibiotikaresistenz könnte eine schnelle und zuverlässige Methode zur Diagnose von UTIs die Patientenergebnisse erheblich verbessern. Sie könnte auch helfen, dass Gesundheitsdienstleister schneller die effektivsten Behandlungsoptionen auswählen, was die Ausbreitung resistenter Bakterien verringern würde.
Einschränkungen der Studie
Obwohl die Studie zeigte, dass die Verwendung von MinION für eine schnelle Diagnose möglich ist, gab es Einschränkungen. Zum Beispiel verwendeten sie ein grösseres Urinvolumen als das, was in realen klinischen Situationen möglich sein könnte. Genug Urin von Patienten zu bekommen, insbesondere von sehr kranken, könnte eine Herausforderung darstellen.
Ausserdem erwies sich das Extrahieren von genug DNA von bestimmten Bakterien wie E. faecalis als schwierig für eine effektive Analyse, was darauf hinweist, dass weitere Verbesserungen im Extraktionsprozess für bestimmte Erreger erforderlich sind.
Fazit
Zusammenfassend hat die Studie erfolgreich einen neuen Ansatz zur Diagnose von UTIs mithilfe von versetzten Urinproben und schneller Sequenzierungstechnologie demonstriert. Die Forscher zeigten, dass es möglich ist, Pathogene und deren Resistenzgene viel schneller zu identifizieren als mit traditionellen Methoden.
Diese Innovation könnte erhebliche Änderungen in der Diagnose und Behandlung von UTIs nach sich ziehen, die letztlich die Patientenversorgung und die Gesundheitsergebnisse verbessern.
Während das Gesundheitswesen sich weiterentwickelt, könnten schnelle Diagnosetechniken wie diese eine entscheidende Rolle bei der Bekämpfung von Infektionen und der zunehmenden Bedrohung durch Antibiotikaresistenz spielen.
Mit weiterer Forschung und Entwicklung könnten diese Methoden bald zur gängigen Praxis in klinischen Einrichtungen werden und sicherstellen, dass Patienten rechtzeitig und angemessen behandelt werden.
Titel: Detection of pathogens and antimicrobial resistant genes from urine within 5 hours using Nanopore sequencing
Zusammenfassung: PurposeUrinary Tract Infection (UTI) is a prevalent global health concern accounting for 1-3% of primary healthcare visits. The current methods for UTI diagnosis have a high turnaround time of 3-5 days for pathogen identification and susceptibility testing. This work is a proof-of-concept study aimed at determining the detection limit by establishing a culture and amplification-free DNA extraction methodology from spiked urine samples followed by real-time Nanopore sequencing and data analysis. MethodsThis study first establishes an optical density culture-based method for spiking healthy urine samples with the six most prevalent uropathogens. Pathogens were spiked at two clinically significant concentrations of 103 and 105 CFU/ml. Three commercial DNA extraction kits were investigated based on the quantity of isolated DNA, average processing time, elution volume and the average cost incurred per extraction. The outperforming kit was used for direct DNA extraction and subsequent sequencing on MinION and Flongle flowcells. ResultsThe Blood and Tissue kit outperformed the other kits. All pathogens were identified at a concentration of 105 CFU/ml within ten minutes, and the corresponding AMR genes were detected within three hours of the sequencing start. The overall turnaround time including the DNA extraction and sequencing steps was five hours. Moreover, we also demonstrate that the identification of some pathogens and antibiotic-resistance genes was possible at a spike concentration of 103 CFU/mL. ConclusionThis study shows great promise toward reducing the time required for making an informed antibiotic administration from approximately 48 hours to five hours thereby reducing the number of empirical doses and saving lives.
Autoren: Rafi Ahmad, A. B. Bellankimath, C. Chapagain, S. Branders, J. Ali, R. C. Wilson, T. E. B. Johansen
Letzte Aktualisierung: 2024-03-04 00:00:00
Sprache: English
Quell-URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.04.582689
Quell-PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.04.582689.full.pdf
Lizenz: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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