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# Biologie # Immunologie

Die Rolle von PMNs in der Immunabwehr

Lern, wie polymorphkernige Leukozyten uns vor Infektionen schützen.

Evan R. Lamb, Ian J. Glomski, Taylor A. Harper, Michael D. Solga, Alison K. Criss

― 7 min Lesedauer


PMNs: Frontline PMNs: Frontline Verteidiger Kampf gegen Infektionen. Entdecke die wichtige Rolle von PMNs im
Inhaltsverzeichnis

Polymorphonukleäre Leukozyten, oft PMNS genannt, sind eine Art von weissen Blutkörperchen, die eine entscheidende Rolle im Abwehrsystem unseres Körpers spielen. Denk an sie wie an die Frontsoldaten, die bereit sind, gegen eindringende Keime oder Entzündungen zu kämpfen. Unter dieser Gruppe sind Neutrophile die häufigste Art, und die haben beeindruckende Fähigkeiten, um Infektionen zu bekämpfen. Diese Fähigkeiten umfassen das Fressen von Keimen, das Bewegen zu den Problemstellen im Körper, das Freisetzen von antimikrobiellen Substanzen und das Erzeugen von reaktiven Sauerstoffspezies, die wie chemische Bomben sind, die eindringende Mikroben zerstören können.

Wie PMNs auf Infektionen reagieren

Wenn der Körper eine Infektion oder Entzündung wahrnimmt, nehmen PMNs schnell Botschaften aus der Umgebung auf. Sie reagieren auf Signale sowohl vom Körper als auch von den Angreifern und bereiten sich darauf vor, schnell zu handeln. Die Aktivierung von PMNs umfasst mehrere Schritte. Sie bereiten sich vor, indem sie spezielle Proteine an ihre Oberfläche bringen, damit sie aus dem Blutstrom zum Ort des Problems entkommen können. Gleichzeitig könnten sie andere Proteine loswerden, die im Moment nicht gebraucht werden. Die Tatsache, dass PMNs auf verschiedene Weisen reagieren können, zeigt, wie anpassungsfähig sie im Umgang mit unterschiedlichen Bedrohungen sind.

PMN-Aktivität messen

Um zu studieren, wie gut PMNs arbeiten, verwenden Wissenschaftler oft eine Methode namens Durchflusszytometrie. Diese Technik ermöglicht es den Forschern, viele Aspekte von PMNs gleichzeitig zu betrachten, einschliesslich wie sie aktiviert werden. Es ist ein bisschen so, als würde man einen fancy Scanner benutzen, um alle Details eines Autos zu sehen, während es die Strasse entlang rast. Leider hat die traditionelle Durchflusszytometrie einige Einschränkungen. Sie kann nur eine begrenzte Anzahl von Markern in einer einzigen Probe analysieren. Das bedeutet, dass viele Studien sich nur auf einige wenige Merkmale von PMNs konzentrieren, anstatt das vollständige Bild zu betrachten.

Um das zu umgehen, wurden neuere Technologien entwickelt. Eine solche Methode nennt sich Zyto-Metrie nach Flugzeit (CyTOF). Damit können zahlreiche Marker in einer Probe untersucht werden. Allerdings kann es teuer sein und zerstört die Probe während des Tests. Eine weitere fortschrittliche Technik ist die spektrale Durchflusszytometrie. Diese ermöglicht es den Wissenschaftlern, ein vollständiges Spektrum an Informationen über die fluoreszierenden Marker auf PMNs zu sammeln, ohne die Probe zu zerstören. Sie kann viel mehr Marker auf einmal analysieren als traditionelle Methoden.

Entwicklung eines neuen PMN-Studienpanels

Die Forscher wollten ein Durchflusszytometrie-Panel erstellen, das die PMN-Aktivität im Detail messen kann. Ihre Ziele waren einfach: reife PMNs analysieren, hochdimensionale Analysen ermöglichen, die Proben intakt für die weitere Nutzung halten und sich sowohl darauf konzentrieren, wie PMNs arbeiten als auch auf ihre Aktivierung. Sie wollten etwas bauen, das verwendet werden kann, um verschiedene Fragen zu PMNs in Gesundheit und Krankheit zu beantworten.

Das Endergebnis war ein 22-Farben spektrales Durchflusszytometrie-Panel, das entwickelt wurde, um die PMN-Aktivierung als Reaktion auf verschiedene Herausforderungen zu profilieren. Das Panel betrachtete verschiedene Marker, die mit den Funktionen von PMNs zusammenhängen, wie ihre Fähigkeit, Krankheitserreger zu verschlingen, zu degranulieren (Keim bekämpfende Granula freizusetzen), sich zu den Problemstellen zu bewegen und auf bestimmte Signale im Körper zu reagieren.

Wie PMNs für Studien isoliert werden

Um menschliche PMNs zu studieren, sammelten die Forscher Blutproben von gesunden Freiwilligen. Spezielle Techniken wurden eingesetzt, um PMNs vom Blut zu trennen. Das geschieht durch einen Prozess, der dem Sieben von Mehl ähnelt, um grössere Partikel zu trennen. Nach der Isolation verwendeten sie eine andere Methode, um sicherzustellen, dass sie nur die PMNs hatten, die sie für ihre Experimente benötigten.

Testen mit Neisseria gonorrhoeae

Einer der Krankheitserreger, die mit dem neuen Panel getestet wurden, war Neisseria gonorrhoeae, das Bakterium, das für Gonorrhö verantwortlich ist. Dieses spezielle Bakterium hat einige Tricks entwickelt, um PMN-Angriffe zu entkommen. Die Forscher wollten sehen, wie PMNs auf dieses Bakterium in verschiedenen Situationen reagierten, zum Beispiel, wenn PMNs stimuliert oder unbehandelt gelassen wurden.

Um reale Bedingungen zu simulieren, wurden PMNs unterschiedlichen Verhältnissen von markierten N. gonorrhoeae ausgesetzt. Durch die Verwendung fluoreszierender Labels konnten die Forscher verfolgen, wie viele Bakterien mit jedem PMN interagierten. Das half ihnen zu beobachten, wie PMNs auf unterschiedliche Mengen von Bakterien reagierten, was wichtig ist, um zu verstehen, wie sich Infektionen entwickeln.

Die Ergebnisse der PMN-Aktivierung

Nachdem PMNs Neisseria gonorrhoeae ausgesetzt waren, fanden die Forscher heraus, dass sich mehrere PMN-Oberflächenmarker veränderten. Einige Marker nahmen als Reaktion auf die Infektion zu, während andere abnahmen. Interessanterweise hing das Ausmass dieser Veränderungen von der Anzahl der Bakterien ab, die jeder PMN begegnete.

Zum Beispiel, wenn PMNs mit einer geringeren Anzahl von Bakterien konfrontiert waren, gab es mehr Variationen in der Art und Weise, wie sie verschiedene Marker ausdruckten. Wenn sie jedoch stark infiziert waren, zeigten PMNs tendenziell konsistente Reaktionen über das gesamte Spektrum. Die Studie beleuchtet, wie PMNs unterschiedlich reagieren, basierend auf ihrer Exposition gegenüber Krankheitserregern, und hilft, ein klareres Bild ihrer Rolle während Infektionen zu zeichnen.

PMN-Funktionen und ihre Bedeutung

PMNs haben viele wichtige Rollen in unserem Immunsystem und spielen eine grosse Rolle im Kampf gegen Infektionen, beim Entfernen abgestorbener Zellen und der Reparatur von Geweben. Indem sie PMNs untersuchen, können Forscher herausfinden, wie diese Zellen unter verschiedenen Bedingungen reagieren, auch wenn Infektionen auftreten.

Das neue Durchflusszytometrie-Panel ermöglicht eine schnelle und detaillierte Analyse der PMN-Reaktionen. Es hilft Wissenschaftlern zu verfolgen, wie diese Zellen unter verschiedenen Umständen arbeiten, was zu unserem Verständnis von Entzündungen, Infektionen und Heilung beiträgt.

Herausforderungen in der PMN-Forschung

Während PMNs faszinierend und wichtig sind, ist das Studium von ihnen nicht ohne Herausforderungen. Zum einen sind sie empfindlich gegenüber Aktivierung, und ihr Zustand könnte sich während der Isolation ändern. Wenn sie vom Blut isoliert werden, können PMNs in ihrer Bereitschaft, auf Angriffe zu reagieren, anders sein als in ihrem natürlichen Zustand im Blutstrom.

Forscher müssen vorsichtig mit den Techniken sein, die sie zur Isolation und Analyse von PMNs verwenden, da kleine Variationen im Prozess zu erheblichen Änderungen der Ergebnisse führen können. Es ist ein bisschen so, als würde man versuchen, einen glitschigen Fisch zu fangen: Ein falscher Schritt und er könnte verschwunden sein!

Zukünftige Richtungen in der PMN-Forschung

Das neu entwickelte Panel eröffnet eine Welt voller Möglichkeiten für zukünftige Forschungen. Wissenschaftler können es anpassen, um andere Aspekte der PMN-Aktivität zu hinterfragen, wie ihre Fähigkeit, reaktive Sauerstoffspezies zu produzieren, Fallen zu setzen, um Krankheitserreger zu fangen, oder sogar ihre Methoden zu sterben, wenn ihre Arbeit erledigt ist.

Mit der Verfügbarkeit fortschrittlicherer Technologien wird das Verständnis von PMNs vertieft. Damit werden wir neue Einblicke gewinnen, wie sie zur Gesundheit und Krankheit beitragen. Wer weiss, vielleicht entdecken wir eines Tages die Geheimnisse, warum sie manchmal nicht so funktionieren, wie erwartet, wenn Infektionen auftreten!

Fazit

Polymorphonukleäre Leukozyten sind lebenswichtige Komponenten des Immunsystems, die als Ersthelfer bei Infektionen und Entzündungen agieren. Die Entwicklung eines hochdimensionalen spektroskopischen Durchflusszytometrie-Panels bietet ein мощное Werkzeug, um diese Zellen im Detail zu studieren. Indem wir verstehen, wie PMNs arbeiten, können Forscher zur medizinischen Erkenntnis beitragen und potenziell Behandlungen für verschiedene Krankheiten verbessern.

Also beim nächsten Mal, wenn du von weissen Blutkörperchen hörst, denk dran: Hinter ihrem unscheinbaren Namen sind sie wie winzige Superhelden, die kämpfen, um unsere Körper sicher zu halten. Es ist ein harter Job, aber jemand muss es tun!

Originalquelle

Titel: High-dimensional spectral flow cytometry of activation and phagocytosis by peripheral human polymorphonuclear leukocytes

Zusammenfassung: Polymorphonuclear lymphocytes (PMNs) are terminally differentiated phagocytes with pivotal roles in infection, inflammation, tissue injury, and resolution. PMNs can display a breadth of responses to diverse endogenous and exogenous stimuli, making understanding of these innate immune responders vital yet challenging to achieve. Here, we report a 22-color spectral flow cytometry panel to profile primary human PMNs on population and single cell levels for surface marker expression of activation, degranulation, phagocytosis, migration, chemotaxis, and interaction with fluorescently labeled cargo. We demonstrate the surface protein response of PMNs to phorbol ester stimulation compared to untreated controls in an adherent PMN model with additional analysis of intra- and inter-subject variability. PMNs challenged with the Gram-negative bacterial pathogen Neisseria gonorrhoeae revealed infectious dose-dependent changes in surface marker expression in bulk, population-level analysis. Imaging flow cytometry complemented spectral cytometry, demonstrating that fluorescence signal from labeled bacteria corresponded with bacterial burden on a per-cell basis. Spectral flow cytometry subsequently identified surface markers which varied with direct PMN-bacterium association as well as those which varied in the presence of bacteria but without phagocytosis. This spectral panel protocol highlights best practices for efficient customization and is compatible with downstream approaches such as spectral cell sorting and single-cell RNA-sequencing for applicability to diverse research questions in the field of PMN biology. Summary SentenceHere we report a 22-color spectral flow cytometry panel to profile primary human PMNs for markers of activation, degranulation, phagocytosis, migration, and chemotaxis using phorbol ester stimulation and bacterial challenge as proofs-of-concept.

Autoren: Evan R. Lamb, Ian J. Glomski, Taylor A. Harper, Michael D. Solga, Alison K. Criss

Letzte Aktualisierung: 2024-12-05 00:00:00

Sprache: English

Quell-URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.01.626241

Quell-PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.01.626241.full.pdf

Lizenz: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Änderungen: Diese Zusammenfassung wurde mit Unterstützung von AI erstellt und kann Ungenauigkeiten enthalten. Genaue Informationen entnehmen Sie bitte den hier verlinkten Originaldokumenten.

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