Detectando a Síndrome de Lynch: Novas Abordagens para Teste

A Síndrome de Lynch (LS) é uma condição genética que aumenta o risco de certos tipos de câncer, principalmente câncer colorretal e de endométrio. Ela ocorre por causa de alterações, ou Mutações, em genes específicos que são responsáveis pela reparação do DNA. Essas mutações podem ser passadas de pais para filhos, por isso é chamada de síndrome hereditária. Embora a LS seja relativamente comum entre as condições de câncer hereditárias, afeta cerca de 1 em cada 279 pessoas.

#O que Acontece na Síndrome de Lynch?

Quem tem síndrome de Lynch tem uma chance maior de desenvolver vários tipos de câncer. Os cânceres mais comuns associados a essa síndrome incluem o câncer colorretal, que atinge o cólon ou reto, e o câncer de endométrio, que afeta o revestimento do útero. Também há ligações com cânceres do estômago, ovários, pâncreas, próstata, trato urinário, rins, intestino delgado, fígado, cérebro e pele. Embora alguns estudos sugiram uma possível conexão entre a LS e o câncer de mama, isso ainda não está claro.

#O Desafio de Detectar a Síndrome de Lynch

Um grande problema para diagnosticar a síndrome de Lynch é que muitos casos passam despercebidos. Isso pode acontecer porque existe uma ampla gama de cânceres ligados à LS, e não há diretrizes claras sobre quando testar para isso. Os critérios usados para identificar quem deve ser testado mudaram ao longo do tempo, à medida que os especialistas aprendem mais sobre a condição.

No passado, os testes Genéticos para a LS eram baseados em diretrizes específicas, conhecidas como critérios de Amsterdã ou diretrizes de Bethesda. No entanto, essas diretrizes muitas vezes perdem muitos casos. Alguns estudos estimam que critérios desatualizados poderiam ignorar de 23 a 50% das pessoas com a síndrome. Os especialistas perceberam que nenhum conjunto atual de critérios clínicos consegue identificar todos os casos de LS, especialmente quando se depende apenas de uma abordagem ou modelo.

#Como a Síndrome de Lynch é Diagnosticada?

Para diagnosticar a síndrome de Lynch, os médicos geralmente usam dois testes principais: análise de instabilidade de microssatélites (MSI) e teste para proteínas específicas no tumor (imuno-histoquímica). Para confirmar o diagnóstico, os médicos procuram mutações nos genes de reparo do DNA. Atualmente, a melhor prática é examinar os tumores usando esses testes, mas o teste de MSI sozinho não é perfeito. Ele detecta mutações em cerca de 20-25% dos casos, o que significa que algumas pessoas podem ter a síndrome sem que isso seja identificado.

Outros métodos avançados, como sequenciamento de nova geração (NGS), estão sendo pesquisados para melhorar a precisão dos testes. O NGS pode analisar vários genes de uma vez e pode ser mais eficiente do que os métodos tradicionais, potencialmente reduzindo custos a longo prazo.

#Objetivo do Nosso Estudo

Nossa pesquisa teve como objetivo desenvolver uma maneira econômica de detectar mutações nos genes ligados à síndrome de Lynch. Para testar este método, pegamos uma amostra de um paciente com LS conhecido e misturamos com Amostras de indivíduos saudáveis. O objetivo era ver se conseguíamos identificar a mutação específica e medir quanto dela estava presente na amostra misturada.

#Misturando Amostras para Melhor Detecção

Para encontrar a melhor forma de misturar amostras, tentamos várias abordagens. Primeiro, misturamos as amostras de sangue inteiras de indivíduos antes de isolar o DNA. Depois, misturamos as amostras de sangue após o isolamento do DNA. Também usamos amostras de camada leucocitária, que são as células brancas do sangue separadas das células vermelhas, de diferentes maneiras - antes e depois da isolação, e depois que o DNA foi amplificado.

Ao testar esses vários métodos de mistura, buscamos encontrar a estratégia mais eficaz para detectar mutações em amostras misturadas. Queríamos garantir que nossas descobertas pudessem potencialmente beneficiar o rastreamento de pacientes, especialmente aqueles que podem ter síndrome de Lynch, mas que atualmente são perdidos pelos testes tradicionais.

#Manuseio e Processo de Teste das Amostras

Coletamos amostras de sangue usando tubos especiais e isolamos a camada leucocitária centrifugando o sangue. O DNA foi extraído usando um kit confiável, e garantimos que a concentração de DNA fosse adequada para testes posteriores.

Usando um kit comercial projetado para detecção da síndrome de Lynch, preparamos bibliotecas de DNA para sequenciamento de nova geração. Ajustando as quantidades de reagentes usados e o número de ciclos no processo de amplificação do DNA, buscamos otimizar nossos resultados.

Uma vez que as amostras foram sequenciadas, usamos ferramentas de bioinformática para analisar os dados. Isso envolveu verificar a qualidade das sequências e alinhá-las com um genoma de referência para procurar mutações.

#Analisando os Resultados

Após o sequenciamento, revisamos o número de leituras que continham mutações nos genes específicos associados à síndrome de Lynch. Nossos achados mostraram que a quantidade média dessa mutação específica em amostras misturadas era de cerca de 5%. Os diferentes métodos de mistura deram resultados variados, com algumas abordagens apresentando melhores taxas de detecção.

Por exemplo, o método em que misturamos sangue inteiro antes de isolar o DNA apresentou resultados mais baixos em comparação com os métodos que usaram amostras de camada leucocitária. As médias mais altas na detecção de mutações vieram da mistura de amostras de camada leucocitária antes da isolação.

#Implicações dos Nossos Achados

Nosso estudo indica que misturar amostras pode ser uma estratégia útil para identificar a síndrome de Lynch. Ao combinar amostras de vários pacientes, poderíamos realizar um único teste que rastreia muitos indivíduos de uma vez. Isso poderia economizar tempo e recursos, tornando o processo de rastreamento mais eficiente.

Considerando que a síndrome de Lynch é mais rara entre certos tipos de câncer, um método que permite testar mais pacientes a um custo menor poderia impactar significativamente as estratégias de prevenção e tratamento do câncer.

#Limitações e Direções Futuras

Embora nossos achados sejam encorajadores, existem algumas limitações a serem consideradas. O tamanho da amostra em nosso estudo pode não representar totalmente a diversidade dos casos de síndrome de Lynch na população geral. Embora nossos métodos de teste tenham se mostrado eficazes, em alguns casos, os níveis de mutação detectados ainda estavam abaixo do que seria ideal para um diagnóstico confiável.

É também importante reconhecer que, embora nosso método proposto mostre potencial, mais pesquisas são necessárias para validar esses resultados em grupos maiores de pacientes. Além disso, devemos avaliar a praticidade de implementar esse método em ambientes clínicos reais.

#Conclusão

A síndrome de Lynch é uma condição hereditária significativa que causa um aumento do risco de vários cânceres. A detecção precoce é fundamental, e os avanços nos métodos de teste podem aprimorar os esforços de rastreamento. Nosso estudo sugere que usar amostras misturadas pode ajudar a identificar mutações associadas à síndrome de Lynch de forma mais eficaz, potencialmente levando a melhores resultados para os pacientes. A pesquisa contínua é essencial para aprimorar essas técnicas e garantir que sejam amplamente aplicáveis em diversos contextos de saúde.