細胞の動きについてリアルタイムでの洞察
ライブイメージングで人間の組織内の細胞のダイナミックな活動が見えるようになる。
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目次
ライブイメージングは、科学者たちが組織内で細胞がどう動くかをリアルタイムで観察するための技術だよ。この方法のおかげで、研究者は細胞がどのように分裂したり、成長しながら形を変え、新しい構造を形成するかを見られるんだ。特別な光るタンパク質を使うことで、科学者たちは人間の組織モデル内で細胞の内部で何が起こっているかを詳しく見ることができるんだ。
ライブイメージングを行うために、研究者たちは特定のDNAの断片を人間の細胞に導入することができるんだ。効果的な方法の一つがピギーバック転移因子システムだよ。このシステムは、特に生きた細胞を使った研究では他の方法よりいくつかの利点があるんだ。予測不可能なウイルス方法とは違って、ピギーバックシステムは遺伝物質のより制御された、安心な統合を可能にするんだ。これにより、研究者は光るタンパク質を正確に細胞に挿入できるので、細胞の動きを視覚化する際にとても役立つよ。
DNAエンジニアリングの背景
人間の細胞にDNAを追加する方法はいくつかあるけど、ピギーバックシステムはその一つなんだ。これは生成が簡単で、ウイルス方法ほど細胞の通常の機能を妨げないからよく使われるんだ。ウイルスを使うと、DNAが細胞内のどこに挿入されるかがバラバラになって、遺伝子の発現に望ましくない変化をもたらすことがあるんだけど、ピギーバックシステムは特定の場所にDNAを挿入するから、より一貫した結果が得られるんだ。
他にもTALENやCRISPR/Cas9のようなDNA挿入方法もあって、これらも正確な遺伝子ターゲティングに使われるんだ。でも、ピギーバックシステムのユニークな点は、光るタグの複数のコピーを一度に挿入できることだよ。これは長期的なイメージングに特に便利で、コピーが多いほど光が明るくなって、顕微鏡で細胞が見やすくなるんだ。
ライブイメージングを使って細胞の動きを理解する
人間の組織で細胞がどう動くかを理解するために、研究者たちは蛍光タンパク質を発現する特別な幹細胞の系統を作ったんだ。このタンパク質は細胞の膜や核、細胞骨格などの異なる部分を視覚化するのを助けるんだ。これらの細胞が特定のタイプのニューロンに発展する様子を観察することで、科学者たちは細胞の動的な様子をモニタリングできるんだ。
この研究の重要な焦点の一つは、脊髄や脳の発達中に細胞がどう動き変化するかを見ることなんだ。異なる蛍光タンパク質を導入することで、研究者たちは個々の細胞が時間とともにどのように形を変え、機能するかを追跡できるんだ。これにより、細胞がどう移動し、互いにどう相互作用して複雑な構造を形成するかを見ることができるんだ。
蛍光レポータ系統の生成
細胞の動きを分析するために、一連の蛍光レポータ系統が開発されたんだ。これらの系統は、細胞の形や動きなどのさまざまな側面を視覚化するのを可能にするんだ。異なるタンパク質にeGFPやmKate2など、さまざまな蛍光マーカーがタグ付けされているんだ。一部の系統は細胞膜に存在するタンパク質を発現し、他の系統は核や細胞骨格に位置しているんだ。
特定のプロトコルを使うことで、研究者たちは幹細胞が神経前駆細胞に発展し、ロゼットと呼ばれる構造を形成する様子をモニターすることができたんだ。このロゼットは、胎児の発達中に見られる初期の神経構造を模倣しているから重要なんだ。
神経発達の観察
人間の神経前駆細胞の研究は、幹細胞を特定の細胞タイプに分化させることを含むんだ。この過程で神経ロゼットが形成されて、ニューロンがどのように発達するかを研究するユニークなモデルを提供するんだ。細胞がさまざまな段階を進むにつれて、明確な層を形成し、形や機能が変わっていくよ。
実験室の環境では、研究者たちはこれらの細胞を操作し、モニターすることができるんだ。細胞の形や動きが時間とともにどう変化するかを追跡することで、人間の脳の全体的な発達についての洞察を得ることができるよ。この理解は重要で、特に発達障害や脳機能に影響を与える疾患を研究する際に役立つんだ。
ライブイメージングの技術
ライブイメージングは、発達中の組織で起こる動的プロセスを観察する窓を提供してくれるんだ。脊髄ロゼットに焦点を当てることで、研究者たちは細胞の動きを時間とともに分析できるんだ。これには、細胞がどう移動し、分裂し、専門の細胞タイプに分化するかを研究することが含まれるよ。
使用されるイメージング技術は、個々の細胞や細胞のグループを連続的にモニタリングできるようにしているんだ。研究者たちは、これらのプロセスをリアルタイムで記録して、細胞が発達中にどのようにコミュニケーションを取り、自己組織化するのかに関する貴重な情報を提供しているんだ。
細胞の動態を測定する
この研究の重要な側面の一つは、特定のプロセスがどのくらいの時間を要するかを測定することなんだ。例えば、細胞がロゼットの底から上に移動して分裂するのにかかる時間は重要な測定なんだ。細胞の発達の異なる段階でこれらの時間を分析することで、細胞の動きが成熟するにつれてどう変化するかを見ることができるんだ。
さらに、細胞分裂の方向性を理解することは、組織構造がどう維持されるかを理解する上で重要だよ。細胞が対称的または非対称にどのくらいの頻度で分裂するかを観察することで、研究者たちは細胞の発達の軌跡を推測し、機能的な神経ネットワークを作るのに重要なんだ。
アクチンの役割を調査する
アクチンは細胞の構造の重要な構成要素で、多くの細胞プロセスで重要な役割を果たしているんだ。特定の蛍光マーカーを使うことで、研究者たちは発達中のニューロン内のアクチンの動態を視覚化できるようになったんだ。これにより、細胞がどう移動し、互いにくっつき、分化の過程で形を変えるかを理解するのに役立つんだ。
ライブイメージングの研究では、アクチンの局在が細胞周期のステージによって変わることが示されているんだ。例えば、細胞分裂の異なる時間にアクチンは細胞膜や細胞質内に見られることがあって、移動や分裂のプロセスに関与していることを示しているんだ。
神経新生を理解する
研究者たちが神経前駆細胞の動きをモニターすることで、これらの細胞が新しいニューロンを生成する方法がわかるんだ。これには、細胞が分裂するタイミング、分化するタイミング、移動するタイミングを理解することが含まれるんだ。得られた洞察は、脳の発達中に起こる基本的なプロセスを明らかにし、特定の神経障害で問題が起こるメカニズムを浮き彫りにすることができるんだ。
これらの細胞のライブの動きを観察することで、科学者たちは神経新生のモデルを検証し、発達障害の治療や予防に有益な介入が行える重要な期間を特定できるかもしれないんだ。
疾患研究への影響
細胞をリアルタイムで観察する能力は、さまざまな疾患を理解するための新しい道を開いてくれるんだ。研究者たちは、神経発達に影響を与える疾患、例えば自閉症や統合失調症のモデルを作成するためにこれらの技術を使用することができるんだ。これらのモデルで細胞がどう動くかを観察することで、発達中に何が間違っているのかを突き止めることができ、新しい治療オプションにつながるかもしれないんだ。
さらに、研究者たちは、毒素や異常な細胞条件のような環境要因が細胞の動きにどう影響するかを探ることもできるんだ。これにより、特定の曝露がどのように発達の問題や神経障害につながるかに関する洞察が得られるかもしれないんだ。
結論
ライブイメージングと遺伝子工学された幹細胞の利用は、ヒトの細胞の動きをリアルタイムで研究するための強力なツールを提供してくれるんだ。蛍光レポータ系統を作成して細胞の動態を観察することで、研究者は発達や疾患における重要なプロセスに関する貴重な洞察を得ているんだ。これらの技術は、人間の生物学のより深い理解につながり、再生医療や神経障害の治療の未来に期待が持てるんだ。
今後の研究を通じて、科学者たちは細胞の動きや相互作用の複雑さを解明して、発達障害や人間の神経系に影響を与える他の病気を研究するにあたっての革新的なアプローチを切り開くことを目指しているんだ。
タイトル: Engineering fluorescent reporters in human pluripotent cells and strategies for live imaging human neurogenesis
概要: Investigation of cell behaviour and cell biological processes in human embryonic tissues is facilitated by creation of fluorescent reporters in human pluripotent stem cell lines, which can be differentiated into cell types of choice. Here we report use of a piggyBac transposon-mediated stable integration strategy to engineer human pluripotent stem cell reporter lines. These express a plasma membrane (pm) localised protein tagged with the fluorescent protein eGFP or mKate2, the photoconvertible nuclear marker H2B-mEos3.2, with or without pm-mKate2, and the cytoskeletal protein F-tractin tagged with mKate2. Focussing on neural development some of these lines were used to live image and quantify cell behaviours, including cell cycle progression and cell division orientation in spinal cord rosettes. Further, lipofection-mediated introduction of piggyBac constructs into human neural progenitors labelled single cells and small cell groups within rosettes, allowed monitoring of individual cell behaviours including neuronal delamination. Finally, using the F-tractin-mKate2 hiPSC line, actin dynamics were captured during proliferation in cortical neural rosettes. This study presents new tools and techniques with which to interrogate human cell behaviour and cell biology using live imaging approaches.
著者: Kate G Storey, A. Dady, L. Davidson, N. Loyer, T. Sanders, J. Januschke
最終更新: 2024-05-01 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.01.591467
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.01.591467.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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