微生物の共培養を精密にコントロールする
研究は、生産性を向上させるための微生物共培養の安定化方法を明らかにしている。
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微生物の共培養って、2種類以上の微生物を一緒に育てる方法だよ。この方法は、単一の微生物を育てる単一培養に比べていくつかの利点があるんだ。例えば、共培養は異なる種がそれぞれの役割に特化できるから、生産性が向上することがあるんだ。他にも、価値のある化合物を生成したり、汚染に対して強くなったり、特別な能力を持った異なる株を組み合わせることで安価な栄養源を利用したりできるんだ。
でも、共培養を使う上での大きな課題は、どんな種類の微生物がどれだけいるかをコントロールすることなんだ。異なる種が限られた資源を巡って競争する場合、成長の早い種が他の種を圧倒して、結局は単一培養に戻っちゃうことが多いんだ。だから、共培養の組成をコントロールして安定させる方法を見つけることが重要なんだ。
共培養のコントロール方法
この問題を解決するために、共培養の望ましい組成を維持するさまざまな方法が開発されてきたんだ。いくつかのアプローチでは遺伝子工学を使って、微生物に特定の特性を導入するんだ。たとえば、異なる栄養素を必要とする株を作成して、協力を促進することができるんだ。ほかの戦略では、細胞間の自然なコミュニケーション信号を使って行動を調整することがあるよ。
これらの方法は場合によっては効果的だけど、課題も多いんだ。遺伝子改変は特に多様なコミュニティで複雑になりがちだし、未改変の生物がいる場合は規制の問題も出てくるかもしれない。また、遺伝子成分に依存すると、微生物のエネルギーが成長や生産からコントロールメカニズムの維持に向かってしまうことがあるんだ。これが変異を引き起こして、期待したコントロールが乱れることもあるんだ。
これらの障害を乗り越えるために、一部の研究者はコンピュータ制御システムに目を向けたんだ。このシステムは共培養の組成を追跡して、微生物の行動を測定に基づいてリアルタイムで調整するんだ。こういうアプローチだと、科学者は不確実性や変化する条件に効果的に対応できるんだ。
コンピュータ制御システムの使用
このコンピュータ制御システムでは、文化からの測定値、例えば光学密度や蛍光を取得して、共培養の組成の洞察を提供するんだ。コンピュータはこれらの測定値を望ましい値と比較して、文化をターゲット組成に向けて調整するための適切なアクションを計算するんだ。この方法は時間の経過に応じて変動に適応できるし、環境の変化にもうまく対処できるんだ。
このアプローチの強みの一つは、測定のノイズや不確実性を拒否できることなんだ。条件を継続的に監視して調整することで、研究者はエンジニアリングされたコンポーネントに依存することなく、微生物の成長を最適化できるんだ。
P. putida と E. coli の共培養の研究
この研究では、特定の2つの細菌、Pseudomonas putida と Escherichia coli の共培養をコントロールすることに焦点を当てたんだ。この作業は、これら2つの種の望ましい組成を長期間維持できる安定したダイナミックコントロールシステムを作ることを目指していたんだ。
研究者たちは最初に、さまざまな条件下でこれらの細菌がどのように成長するかを理解することから始めたよ。具体的には、それぞれの種の成長率が温度によって異なることを特定したんだ。この違いを利用して、温度を調整して一方の種を有利にすることができるんだ。
まずは各株を孤立させて、温度変化に対する反応を調べたんだ。それから、両方の種を共培養に組み合わせて、温度を変えることで望ましい比率を維持できるかテストしたんだ。
共培養の組成の測定
共培養の組成を効果的に監視するために、科学者は信頼できる指標を見つける必要があったんだ。P. putida と E. coli の自然な特性を探る中で、P. putida がピオベルジンという蛍光化合物を生成することを突き止めたんだ。これによって、蛍光の測定を使って共培養内の P. putida の豊富さを推定することができたんだ。
培養の光学密度(OD)を測ることで、全細胞数を把握することもできたけど、これだけでは組成を理解するには不十分だったんだ。研究者たちは、共培養の全体の成長率を測りながらピオベルジンの蛍光を追跡する方法を開発したんだ。この二重アプローチは、混合培養のダイナミクスに関する重要な洞察を提供したんだ。
共培養の組成を変化させる
組成を測定する方法を確立した後、次のステップはそれを調整するコントロール方法を作ることだったんだ。科学者たちは成長率に影響を与えるために温度を操作することに焦点を当てたんだ。温度を上げたり下げたりすることで、一方の種の成長を促し、もう一方を抑制することができるんだ。
慎重に構成された実験を通じて、各種に有利な異なる温度設定をテストしたんだ。彼らは、温度の小さな変化が P. putida と E. coli の成長ダイナミクスに大きな影響を与えることを見出し、相対的な豊富さを効果的にコントロールすることができるようになったんだ。
コントロール方法のテストと改良
研究者たちはコントロール方法を洗練させ、その効果をテストするために多数の実験を行ったんだ。最初は P. putida 株 KT2440 を使っていたけど、持続的なバイオフィルムの形成が測定を複雑にするため、後にバイオフィルム形成能力がない変異株 OUS82 に切り替えたんだ。
彼らはまた、バイオフィルムが実験に与える影響を減らせるかどうかを見極めるために、さまざまな抗バイオフィルム対策を導入したんだ。いくつかの処置は有望だったけど、バイオフィルムの持続的な形成は研究を通じての課題のままだったんだ。
進むにつれて、チームはリアルタイムのオンライン測定とオフラインの検証技術を組み合わせるようになったんだ。これによって、共培養の組成の推定を相互確認できて、コントロール方法の正確さを確保できたんだ。
共培養組成のダイナミックコントロール
研究の成功は、望ましい P. putida と E. coli の組成を長期間維持する包括的なコントロールシステムの実装に culminated したんだ。OD や蛍光を含む測定の組み合わせを利用し、うまく調整した温度コントロールシステムを使うことで、共培養のダイナミックコントロールを実現したんだ。
各実験では、環境条件が変わっても目標とする微生物の比率を効果的に維持するシステムの能力が示されたんだ。結果は、このアプローチが共培養の組成を1週間以上安定させられることを示していて、長期的な微生物のダイナミクスに関する重要な洞察を提供しているんだ。
より広い影響と今後の方向性
この研究の結果は、似たようなアプローチが他の微生物システムにも適用できるかもしれないことを示唆しているんだ。異なる種の特性や相互作用を理解することで、さまざまなバイオテクノロジー応用のためのコントロールシステムを設計できるんだ。これには、バイオ燃料や製薬、または他の価値のある化合物の生産が含まれるかもしれない。
この研究はかなりの成功を収めたけど、改善の余地もまだあるんだ。今後の研究は、測定技術のさらなる洗練やコンピュータモデリングの強化、あるいはもっと複雑な微生物コミュニティのダイナミクスを探ることに焦点を当てることができるんだ。
微生物の共培養を引き続き探求することは、バイオテクノロジーの進展や生態系のダイナミクスの理解に貢献する可能性があって、科学者たちがこういうシステムの独自の利点を活用できるように努力しているんだ。
タイトル: Cybernetic control of a natural microbial co-culture
概要: A key obstacle in the widespread application of microbial co-cultures in bioprocesses is their compositional instability, as faster-growing species outcompete and dominate the culture. While several synthetic biology approaches have demonstrated control over co-culture composition, there has been an increased interest in computer-based cybernetic control approaches that can offload burdensome genetic control circuitry to computers and enable dynamic control and real-time noise rejection. This work extends that approach, demonstrating a cybernetic control method that is not reliant on any genetic engineering, instead interfacing cells with computers by exploiting their natural characteristics to measure and actuate the composition. We apply this to a Pseudomonas putida (P. putida) and Escherichia coli (E. coli) co-culture grown in Chi.Bio bioreactors, first showing how composition estimates calculated from different bioreactor measurements can be combined with a system model using an extended Kalman filter to generate accurate estimates of a noisy system. We also demonstrate that because the species have different optimal temperature niches, adjusting the temperature of the culture can drive the composition in either direction. By using a proportional-integral control algorithm to calculate the temperature that would bring the measured composition towards the desired composition, we are able to track dynamic references and stabilised the co-culture for 7 days ([~]250 generations), with the experiment ending before the cells could adapt out of the control. This cybernetic framework is broadly applicable, with different microbes unique features and specific growth niches enabling robust control over diverse co-cultures.
著者: Harrison Steel, T. A. Lee, J. Morlock, J. Allan
最終更新: 2024-07-06 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.04.602068
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.04.602068.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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