ストレスの多い状況下でのE. coliの生存戦略
研究がE.コリが低pHや他のストレスにどう対抗するかを明らかにした。
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毎年、たくさんの人が汚染された食べ物を食べて病気になるんだ。その中でも大きな原因の一つが、腸内細菌のEscherichia coli、通称E. coliだよ。特定のタイプのE. coliは深刻な健康問題を引き起こすことがあって、2010年にはこのバイ菌に関係する病気で35,000人以上が亡くなったんだ。主な問題は、作物が成長する過程や加工中に動物の排泄物で汚染されることから起こるんだ。これは野菜やサラダでよくある問題だよ。
E. coliは、低pHなど厳しい状況でも生き延びることができるんだ。植物の環境ではよく見られる低pHは、温度変化や干ばつなどいろんなストレスから来ることがある。だから、E. coliがこういうストレスにどう耐えるかを学ぶのが大事なんだ。
E. coliとその防御策
E. coliは低pHから自分を守るための方法をいくつか発展させてきたんだ。その一つは、ポリサッカライドと呼ばれる物質で表面を覆うこと。これにはO抗原やK抗原とか、コラニン酸という別のポリサッカライドが含まれている。コラニン酸は、E. coliがストレスを受けるときに多く作られるんだ。これは、コラニン酸がE. coliのさまざまな厳しい条件での生存を助けることを示唆しているよ。たとえば、EHECという特定のE. coliの株は、コラニン酸を作る遺伝子の変化でダメージを受けることがあるんだ。
E. coliの表面には、腸内細菌共通抗原(ECA)と呼ばれる別のポリサッカライドもある。ECAにはいろんな形があって細胞のさまざまな部分に存在するけど、バイ菌の生存を助ける役割は完全にはわかってないんだ。
最近の研究で、ECAを作るのが苦手なE. coli株が低pHにどう反応するかを調べたんだ。そこで、ECA合成に必要なwzxE遺伝子が欠けている株は、低pHのときに成長が難しいことがわかった。この遺伝子は、ECAの一形態を細胞膜を越えて移動させる役割を持ってるんだ。wzxE遺伝子が正しく機能しないと、細胞内にECAの一形態がたまり、有害になることがある。でも、wzxEがノックアウトされた株は、コラニン酸に関わる他のプロセスによってこの有毒な蓄積を避けることができたんだ。
E. coliの成長実験
この研究では、さまざまなE. coliをいろんなpH条件でテストして、どんな成長を見せるかを調べたんだ。通常のE. coli(野生型株)とwzxEノックアウト株を比べたよ。pH 5.5の低pHでは、wzxEノックアウト株の成長が野生型に比べてよくなかったけど、pH 7.0や8.5の中性やアルカリ性の環境では、wzxEノックアウト株も野生型と同じくらい成長したんだ。
さらに、V8という植物由来の酸性の培地でノックアウト株をテストしたけど、この培地でもwzxEノックアウト株は野生型に比べて成長が落ちた。wzxE遺伝子を含む遺伝子片をノックアウト株に戻したら、低pH条件でも同じ成長の問題が出なかったんだ。
低pHと野菜の感受性
研究者たちは、wzxEノックアウト株が実際の野菜に対して敏感かどうかも調べたんだ。いろんな野菜から抽出物を用意して、ノックアウト株は野生型株に比べてこれらの野菜抽出物にさらされたときに生き残ったバイ菌が少なかったことがわかった。結果は、wzxEノックアウト株が実世界の野菜、特に低pHのチェリートマトみたいなものにおいてより苦しんでいることを示していたよ。
この研究は、wzxEノックアウト株の低pHに対する感受性が合成培地だけでなく、自然な野菜条件にも当てはまることを示したんだ。
リピッドIII ECAの役割
特定のECAの一形態、特にリピッドIII ECAの蓄積が、wzxEノックアウト株が低pHに敏感である理由で重要な役割を果たしているんだ。wzxE遺伝子がノックアウトされると、リピッドIII ECAがバイ菌内に蓄積されることがあって、これは有害なんだ。これを確認するために、研究者たちはwecF遺伝子も欠けているダブルノックアウト株を作った。この遺伝子はリピッドIII ECA合成に重要なんだ。ダブルノックアウト株は、低pH条件下でwzxEノックアウト株よりも成長が良いことがわかって、リピッドIII ECAが低pH感受性に関連していることが示されたんだ。
細胞死の検査
実験の中で、研究者たちは低pH条件下でE. coli細胞に何が起こるかを調べたんだ。野生型株とwzxEノックアウト株の両方に低pH状況を模した溶液をかけたんだけど、驚くべきことに、細菌を低pHにだけさらしたときは、両株間の細胞生存率に大きな違いはなかったんだ。でも、成長に適した条件で育てると、wzxEノックアウト株は野生型に比べてかなり多くの死細胞を示したよ。
この発見は、wzxEノックアウト株が有害な物質を蓄積し、特に細菌が成長できる低pH条件において細胞死を引き起こす原因になっていることを示唆しているんだ。
コラニン酸の影響
研究者たちは、コラニン酸合成を阻害すると低pH感受性にどう影響するかも見たんだ。彼らは、wzxEとコラニン酸を作る遺伝子の両方が欠けているダブルノックアウト株を作ったんだけど、この株はwzxEノックアウト株と同じ感受性を示さなかったんだ。これは、コラニン酸合成がwzxEノックアウト変異体の低pH感受性に関与していることを示しているよ。
この研究は、wzxEノックアウト株が低pHストレスを受けるとコラニン酸の生産が増えることを明らかにしたんだ。でも、この増加はリピッドIII ECAを移動させるタンパク質を占有しちゃうから、細胞内にこの物質が毒性を持って蓄積されることになるんだ。
他のストレス
低pH以外にも、研究者たちはwzxEノックアウト株が高塩分や低温といった他のストレス条件にどう反応するかもテストしたんだ。結果は、ノックアウト株もこれらのストレスに敏感であることを示していて、変異体の感受性のメカニズムがさまざまな挑戦において一貫していることを裏付けているよ。
特に低温のとき、wzxEノックアウト株は野生型株よりも多くの死んだバイ菌が見られた。高塩分条件でも同じことが言える。再び、これらの感受性はコラニン酸の生産に依存していたんだ。
結論
この研究は、wzxE遺伝子がE. coliが低pH、低温、高浸透圧に耐える能力に重要であることを示した。wzxEノックアウト変異体はこれらの条件に対してかなり脆弱だったんだ。コラニン酸やリピッドIII ECAに関連するプロセスへの依存性は、E. coliに関連する食中毒を管理する新しいアプローチが考えられることを示唆してるよ。
E. coliがストレス下でどう生き残るかを理解することは、特にこのバイ菌が繁殖する植物環境で食べ物の汚染を防ぐための方法を提供する手助けになるんだ。発見は、さまざまな条件におけるE. coliの適応力と回復力の重要性を指摘していて、食中毒を防ぐための効果的な戦略を開発するために不可欠なんだよ。
タイトル: Escherichia coli growth under low pH, low temperature, and high osmotic stress conditions requires the wzxE flippase for the enterobacterial common antigen intermediate
概要: Colanic acid and enterobacterial common antigen (ECA) are cell surface polysaccharides that are produced by many E. coli isolates. Colanic acid is induced under low pH, low temperature, and hyperosmotic conditions and is important in E. coli resistance to these stresses; however, the role of the ECA is unclear. In this study, we observed that knockout of the flippase wzxE, which converts ECA intermediates from the cytoplasmic side of the inner membrane to the periplasmic side, resulted in low pH sensitivity in E. coli. The wzxE-knockout mutant showed reduced growth potential and viable counts in the extracts of several vegetables (cherry tomatoes, carrots, celery, lettuce, and spinach), which are known to be low pH environments. A double knockout strain of wzxE and wecF, which encodes an enzyme that synthesizes an ECA intermediate, did not show sensitivity to low pH, nor did a double knockout mutant of wzxE and wcaJ, which encodes a colanic acid synthase. The wzxE-knockout mutant was sensitive to low temperature or hyperosmotic conditions, which induced colanic acid synthesis, and these sensitivities were abolished by the additional knockout of wcaJ. These results suggest that ECA intermediates cause E. coli susceptibility to low pH, low temperature, and high osmotic pressure in a colanic acid-dependent manner, and that wzxE suppresses this negative effect. ImportancePolysaccharides covering bacterial cell surfaces, such as colanic acid, confer resistance to various stresses, such as low pH. However, the role of enterobacterial common antigens, carbohydrate antigens that are conserved throughout enterobacteria, in stress resistance is unclear. Our results suggest that lipid III enterobacterial common antigen, a substrate of flippase, causes sensitivity of Escherichia coli to low pH, low temperature, and high osmolarity in dependence on colanic acid synthesis, while wzxE inhibits this negative effect. The wzxE-knockout mutant was sensitive to crude vegetable extracts, suggesting that the creation of WzxE inhibitors could lead to new food poisoning prevention agents.
著者: Chikara Kaito, S. Yamaguchi, K. Ishikawa, K. Furuta
最終更新: 2024-10-11 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.10.617665
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.10.617665.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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