mbPE法で細菌遺伝学を進める
新しい技術がバイオテクノロジーでの遺伝子編集を強化して、いろんな用途に使えるようになったよ。
Jan-Willem Veening, M. Rengifo-Gonzalez, M.-V. Mazzuoli, A. B. Janssen, A.-S. Rueff, X. Liu
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目次
バイ菌ってめっちゃ小さな生き物で、どこにでもいるんだよね。いいことも悪いことも、私たちの生活に大きな役割を果たしてる。中には消化を助けてくれるバイ菌もいれば、病気にさせるバイ菌もいる。科学者たちはバイ菌の遺伝子を変えて、もっと理解しやすくして、薬を作ったり、ゴミを分解したりするいい目的で使おうとしてるんだ。バイ菌のDNAを変えるために開発されたワクワクする方法の一つがCRISPR/Cas9ってやつ。
CRISPR/Cas9とは
CRISPR/Cas9は、科学者が遺伝子を編集するために使う道具なんだ。特定の場所でDNAを切るハサミみたいに働く。DNAが切られると、バイ菌は自分で修復するか、科学者が新しいDNAの断片を入れて遺伝子コードを変えることができる。この方法は役に立つけど、特に変えにくいバイ菌のタイプでは遅くて複雑になることもあるんだ。
特定のバイ菌の課題
スタフィロコッカス・アウレウスやクロストリジウムのようなバイ菌は、普通の方法では変えるのが難しいんだ。科学者たちは、望ましい変化を得るためにたくさんのステップを経なきゃいけなくて、時間がかかることが多い。もっと良い方法があるかもしれないけど、作業が難しいバイ菌にはまだ試されてないんだ。
プライムエディティング:新しい方法
最近、プライムエディティングって呼ばれる新しい方法が開発されたんだ。CRISPR/Cas9がDNAの両方の鎖を切るのに対して、プライムエディティングは違ったアプローチを取る。1つの切れ目を作ることで、DNAが自分を修復するときに起こる間違いを避けるのを助けるんだ。この方法は植物や動物などの他の生物で可能性を示してるけど、研究者たちはバイ菌にも役立つか見てみたいと思ってる。
メイク・オア・ブレイクプライムエディティング (mbPE)の紹介
この研究では、ヒトに感染症を引き起こす可能性のあるバイ菌ストレプトコッカス・ニューモニエを対象にした新しい方法「メイク・オア・ブレイクプライムエディティング(mbPE)」が紹介された。この方法は、CRISPRの切断能力とプライムエディティングの利点を組み合わせて、遺伝子の変更をより効率的に行えるようにしたんだ。mbPEを使って、科学者たちはバイ菌の遺伝子を迅速かつ正確に変えようとしたんだ。
mbPEの仕組み
mbPEは、DNAを切る特別な酵素を使ってて、別の部分に新しい遺伝情報を挿入するのを助けるんだ。この方法でDNAが切られると、バイ菌は新しい情報を取り入れて自分を変えることができる。面白いのは、この方法で研究者たちはどのバイ菌が成功裏に変更されたか選べるってこと。うまく変わったバイ菌は生き残るけど、他のはDNAの切れ目を修復できないから死んじゃう。
バイ菌におけるmbPEの効率
研究者たちはmbPEをS.ニューモニエに試した。小さな変化(単一の点変異)を効率よく加えたり削ったりできた。適切な道具を使ったときに、約93%の変更されたバイ菌が望んだ変化を持っていることがわかった。
適切な道具の設計
mbPEをうまく機能させるために、研究者たちはpegRNAと呼ばれる特定の道具を設計する必要があった。pegRNAは編集プロセスをガイドして、DNAの正しい場所をターゲットにするのを助ける。これらのpegRNAの長さと構造は、編集の成功にとって重要なんだ。研究者たちは、pegRNAの最適な長さを見つけ、編集の効率を向上させた。
複数の変更のテスト
mbPEのもう一つのワクワクする可能性は、科学者がバイ菌のDNAに同時に複数の変更を加える手助けができることだ。研究者たちは、自分たちの方法で異なるタイプの変更(点変異、挿入、削除など)を一度に導入できるか見たんだ。彼らは、自分たちの方法を使えば、確かにこれらの複数の変更を効果的に行えることがわかった。
実世界での応用
mbPEがこんなに効率的だから、科学者たちはたくさんの潜在的な応用を見てる。例えば、バイ菌の異なる遺伝子の機能を研究したり、バイ菌が抗生物質にどう反応するかを調べたり、役に立つ化合物を作るバイ菌株を作ったりすることができるかもしれない。
遺伝子工学のための道具
mbPEのような遺伝子工学の道具は、バイ菌との作業の仕方を変えることができる。正確な変更を加える能力は、環境汚染物質を分解したり、バイオ燃料を生産したり、ワクチンを作ったりするのに役立つバイ菌を作るのに役立つんだ。
遺伝子相互作用の探求
別の応用としては、異なるバイ菌が互いに、またはヒトの細胞とどんなふうに相互作用するかを研究することも含まれるかも。たとえば、研究者たちは特定の遺伝子にマーカーを付けて、バイ菌の細胞内でどこに行って何をするかを追跡できるようにすることができる。このことは、バイ菌の機能や制御方法について大事な情報を明らかにするかもしれない。
mbPEの未来の展望
mbPEの柔軟性と効率性は、S.ニューモニエだけでなく、他のバイ菌にも応用できることを示唆してる。研究者たちは、この方法をより扱いづらいバイ菌やヒトの健康や病気において重要な役割を持つバイ菌に広めることを目指しているんだ。
結論
まとめると、メイク・オア・ブレイクプライムエディティング(mbPE)の開発は、バイ菌における遺伝子工学のワクワクする可能性を開いている。プロセスを速く、より効率的にすることで、研究者たちはバイ菌の機能をより深く理解し、最終的には医療、バイオテクノロジー、環境科学において役立つ応用にこの知見を生かしたいと考えているんだ。
科学者たちがmbPEや関連する道具をさらに洗練させて改善し続けることで、バイ菌の遺伝子における革新的なブレイクスルーとその応用の可能性はますます広がっていくんだ。
オリジナルソース
タイトル: Make-or-break prime editing for bacterial genome engineering
概要: CRISPR-Cas9 has revolutionized genome engineering by allowing precise introductions of DNA double-strand breaks (DSBs). However, genome engineering in bacteria is still a complex, multi-step process requiring a donor DNA template for repair of DSBs. Prime editing circumvents this need as the repair template is indirectly provided within the prime editing guide RNA (pegRNA). Here, we developed make-or-break Prime Editing (mbPE) that allows for precise and effective genetic engineering in the opportunistic human pathogen Streptococcus pneumoniae. In contrast to traditional prime editing in which a nicking Cas9 is employed, mbPE harnesses wild type Cas9 in combination with a pegRNA that destroys the seed region or protospacer adjacent motif. Since most bacteria poorly perform template-independent end joining, correctly genome-edited clones are selectively enriched during mbPE. We show that mbPE is RecA-independent and can be used to introduce point mutations, deletions and targeted insertions, including protein tags such as a split luciferase, at selection efficiencies of over 93%. mbPE enables sequential genome editing, is scalable, and can be used to generate pools of mutants in a high-throughput manner. The mbPE system and pegRNA design guidelines described here will ameliorate future bacterial genome editing endeavors.
著者: Jan-Willem Veening, M. Rengifo-Gonzalez, M.-V. Mazzuoli, A. B. Janssen, A.-S. Rueff, X. Liu
最終更新: 2024-12-13 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.27.601116
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.27.601116.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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