Avanzamenti nella microscopia STED con modelli di macchie
I ricercatori usano modelli di puntini per migliorare la microscopia STED e ottenere immagini più chiare.
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Indice
La microscopia è uno strumento potente che gli scienziati usano per vedere cose molto piccole, come cellule e molecole. Un tipo avanzato di microscopia si chiama microscopia a deplezione di emissione stimolata (STED). Questa tecnica consente ai ricercatori di osservare dettagli fini all'interno di campioni vivi. STED è speciale perché supera i limiti usuali della luce, aiutando a immaginare strutture minuscole che i microscopi normali non possono vedere chiaramente.
Come funziona il STED
La microscopia STED funziona usando due raggi laser. Un raggio eccita le Molecole fluorescenti nel campione, facendole brillare. Il secondo raggio è a forma di ciambella e serve a spegnere le molecole luminose al di fuori di un'area piccola, permettendo una visione più chiara dell'area obiettivo. Questa capacità consente agli scienziati di vedere dettagli più piccoli dei normali limiti della luce.
Nonostante la sua efficacia, la microscopia STED affronta alcune sfide. Quando si immaginano campioni più grandi, il tempo necessario può essere lungo e la luce utilizzata può danneggiare il campione, un problema noto come photo-bleaching.
Un nuovo approccio: Microscopia STED a puntini complementari
Per affrontare alcune di queste sfide, i ricercatori stanno esplorando un nuovo approccio che utilizza qualcosa chiamato modelli di puntini. I puntini si riferiscono al modello di luce che si verifica quando la luce viene dispersa su una superficie rugosa, creando un arrangiamento casuale di punti luminosi e scuri. Questi modelli possono essere utilizzati per l'imaging tridimensionale e sono particolarmente utili quando si cerca di catturare immagini rapidamente.
In questo nuovo metodo, vengono creati due modelli di puntini: uno per eccitare le molecole fluorescenti e l'altro per depletarle. Controllando attentamente i modelli di puntini, gli scienziati possono migliorare la qualità delle immagini e ridurre la quantità di luce che potrebbe danneggiare i campioni.
I vantaggi dell'uso dei puntini
I modelli di puntini hanno diversi vantaggi. Possono catturare la luce in modo efficace e creare un'illuminazione casuale ma strutturata. Questo significa che quando gli scienziati usano i modelli di puntini, possono raccogliere più informazioni e migliorare la qualità delle immagini. Inoltre, i puntini possono aiutare a limitare l'esposizione alla luce per i campioni, riducendo il rischio di danni.
La combinazione di questi puntini con la microscopia STED può portare a immagini migliori con maggiore dettaglio e contrasto. Questa tecnica può anche consentire ai ricercatori di vedere di più del campione tutto in una volta, rendendo più facile studiare aree più ampie senza perdere qualità.
Come funziona il nuovo microscopio
Il nuovo design del microscopio coinvolge alcuni componenti importanti. Prima di tutto, un dispositivo speciale chiamato Modulatore di luce spaziale (SLM) genera i modelli di puntini. L'SLM può essere regolato per creare diversi modelli di luce, che poi vengono combinati con luce laser.
Poi, si usa un dispositivo ottico unico chiamato q-plate. Questo dispositivo aiuta a cambiare la luce nella forma giusta per abbinarsi ai due diversi modelli di puntini che vengono utilizzati. Questa configurazione consente un'imaging efficiente dei campioni biologici.
Per esaminare il campione, degli specchi dirigono i raggi laser mentre i segnali fluorescenti vengono catturati attraverso la stessa lente usata per l'imaging. Questa configurazione aiuta a mantenere il sistema efficiente, catturando quanta più luce possibile per immagini migliori.
Risultati sperimentali
Negli esperimenti, gli scienziati hanno testato questo nuovo approccio usando minuscole perle multicolore e campioni biologici, come cellule. Hanno scoperto che l'uso dei modelli di puntini ha migliorato significativamente la chiarezza e il dettaglio delle immagini. I risultati hanno mostrato che le immagini catturate con il nuovo metodo erano più nitide rispetto a quelle ottenute con metodi normali.
Questo miglioramento nella risoluzione significa che i ricercatori possono vedere strutture fini nelle cellule che prima erano difficili da distinguere. Questo potrebbe fornire preziose intuizioni su come funzionano le cellule e aiutare a comprendere vari processi biologici.
Applicazioni e prospettive future
Le implicazioni di questo nuovo metodo sono entusiasmanti. Migliorando la capacità di immaginare cellule e tessuti viventi, gli scienziati possono ottenere migliori intuizioni sul loro funzionamento. Questo potrebbe essere utile in vari campi, compresi medicina e biologia, consentendo progressi nella comprensione delle malattie e nello sviluppo di nuovi trattamenti.
La tecnologia potrebbe anche essere adattata per l'uso con altre tecniche di imaging. Ad esempio, combinare i modelli di puntini con altre tecniche laser potrebbe aprire nuove possibilità nella ricerca scientifica.
Conclusione
In sintesi, questo approccio innovativo dell'utilizzo della microscopia STED a puntini complementari rappresenta un importante progresso nella microscopia. Utilizzando i modelli di puntini, i ricercatori possono ottenere una risoluzione e una velocità superiori, minimizzando i danni ai campioni. Le potenziali applicazioni di questa tecnica sono vaste, il che potrebbe portare a nuove scoperte in molti campi della scienza. Man mano che questa tecnologia continua a svilupparsi, promette di trasformare il modo in cui gli scienziati studiano il mondo microscopico che ci circonda.
Titolo: Complementary Speckle STED Microscopy
Estratto: Stimulated Emission Depletion (STED) microscopy has emerged as a powerful technique providing visualization of biological structures at the molecular level in living samples. In this technique, the diffraction limit is broken by selectively depleting the fluorophore's excited state by stimulated emission, typically using a donut-shaped optical vortex beam. STED microscopy performs unrivalably well in degraded optical conditions such as living tissues. Nevertheless, photo-bleaching and acquisition time are among the main challenges for imaging large volumetric field of views. In this regard, random light beams like speckle patterns have proved to be especially promising for three-dimensional imaging in compressed sensing schemes. Taking advantage of the high spatial density of intrisic optical vortices in speckles -- the most commonly used beam spatial structure used in STED microscopy -- we propose here a novel scheme consisting in performing STED microscopy using speckles. Two speckle patterns are generated at the excitation and the depletion wavelengths, respectively, exhibiting inverted intensity contrasts. We illustrate spatial resolution enhancement using complementary speckles as excitation and depletion beam on both fluorescent beads and biological samples. Our results establish a robust method for super-resolved three-dimensional imaging with promising perspectives in terms of temporal resolution and photobleaching.
Autori: Payvand Arjmand, Samlan Chandran Thodika, Elsa Bivas, Haoyang Li, Martin Oheim, Hiroyuki Yoshida, Etienne Brasselet, Marc Guillon
Ultimo aggiornamento: 2024-07-23 00:00:00
Lingua: English
URL di origine: https://arxiv.org/abs/2407.16493
Fonte PDF: https://arxiv.org/pdf/2407.16493
Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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