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# Biologie# Molekularbiologie

RNA: Der unbekannte Held der Zellen

Erforsche die wichtigen Rollen von RNA in menschlichen Bioflüssigkeiten und der Zellfunktion.

Jasper Verwilt, Kimberly Verniers, Sofie De Geyter, Sofie Roelandt, Cláudio Pinheiro, An Hendrix, Pieter Mestdagh, Jo Vandesompele

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Inhaltsverzeichnis

Ribonukleinsäure, oder RNA, ist einer der Hauptakteure in den Zellen lebender Organismen. Sie ist wie ein Skript, das der Zelle sagt, was sie tun soll. RNA gibt's in vielen Formen und Längen, und sie spielt verschiedene Rollen, damit die Zellen gut funktionieren. Stell dir vor, es ist wie ein Team von Arbeitern, jeder mit einem einzigartigen Job, um die Fabrik am Laufen zu halten.

Die Verschiedenen Arten von RNA

RNA kann hauptsächlich in zwei Gruppen aufgeteilt werden, je nach ihrer Länge: kurz und lang.

Kurze RNA

Kurze RNA umfasst Typen wie Mikro-RNA (miRNA), Transfer-RNA (tRNA), YRNA und Vault-RNA (vRNA). Diese Moleküle sind hauptsächlich daran beteiligt, wie die Zelle arbeitet. Sie können mit Proteinen, DNA und anderen RNA kommunizieren, um sicherzustellen, dass alles synchron läuft. Denk an sie wie die Qualitätskontrolleur*innen auf dem Fabrikboden, die sicherstellen, dass alles den Standards entspricht.

Lange RNA

Lange RNA ist eine breitere Kategorie, die Messenger-RNA (mRNA), lange nicht-kodierende RNA (lncRNA) und zirkuläre RNA (circRNA) umfasst.

  • mRNA dient als Blaupause für die Herstellung von Proteinen, die entscheidend für die Struktur und Funktion der Zelle sind.
  • lncRNA reguliert oft andere RNA und ist nicht an der Kodierung von Proteinen beteiligt.
  • circRNA kann mit verschiedenen Molekülen in der Zelle interagieren und manchmal als „Schwamm“ fungieren, um andere RNA oder Proteine aufzusaugen.

Die Reise der RNA

Wenn Zellen leben, geben sie auch RNA in die Räume ausserhalb der Zelle ab. Das kann aktiv oder passiv geschehen, wie ein Ballon, der wegschwebt. Sobald sie draussen ist, findet man die RNA in verschiedenen Körperflüssigkeiten, wie Blut und Urin. Allerdings ist die Umgebung ausserhalb der Zellen hart für RNA, was oft zu ihrem Abbau führt.

Überraschenderweise schaffen es einige RNA-Typen, unter diesen Bedingungen stabil zu bleiben. Forscher haben herausgefunden, dass bestimmte RNA an grössere Moleküle anheften kann, wie kleine Frachtschiffe, was hilft, sie vor Schäden zu schützen. Diese schützenden Strukturen umfassen Extrazelluläre Vesikel (EVs) und Proteine, die mit der RNA Komplexe bilden.

Die Forschungschallenge

Die meisten Studien haben kurze RNA im Blutplasma untersucht, aber nur wenige haben sich mit den längeren RNA-Typen in menschlichen Flüssigkeiten beschäftigt. Obwohl lange RNA hauptsächlich als fragmentiert betrachtet wird, was darauf hindeutet, dass sie leicht abgebaut wird, gibt es Hinweise darauf, dass einige intakte Formen existieren.

Aktuelle Beweise für lange, intakte RNA in Biofluiden stammen hauptsächlich aus Technologien, die Schwierigkeiten haben, längere Stränge richtig zu analysieren. Um ein klareres Bild zu bekommen, wenden sich Wissenschaftler fortschrittlichen Sequenzierungsmethoden zu, die einen vollständigen Überblick über diese langen RNA-Moleküle bieten können.

Neue Techniken zur Analyse von RNA

Um dieses Problem anzugehen, haben Forscher eine neue Niedrig-Eingang-Sequenzierungsmethode entwickelt. Dieser Ansatz ermöglicht es ihnen, ganze RNA-Sequenzen zu studieren, selbst wenn sie mit winzigen Mengen von Proben beginnen, wie ein Detektiv, der Hinweise aus einem Rätsel zusammensetzt.

In ihrer Studie konzentrierten sich die Wissenschaftler darauf, RNA aus plättchenfreiem Plasma – einer klaren Flüssigkeit, die nach der Zentrifugation von Blut übrig bleibt – und Urin zu untersuchen. Durch die Kombination verschiedener Extraktionsmethoden und Reinigungsschritte wollten sie so viel intakte RNA wie möglich sammeln.

Den Prozess aufschlüsseln

Probenentnahme

Für die Studie sammelten die Forscher Blut und Urin von gesunden Spender*innen. Blut wurde mit speziellen Röhrchen entnommen, die die Aktivierung der Thrombozyten minimieren, um sicherzustellen, dass die RNA so rein wie möglich bleibt. Unmittelbar nach der Entnahme wurden die Proben verarbeitet, um die RNA schnell und effizient zu isolieren – wie ein Wettrennen, um das frischeste Brot aus dem Ofen zu bekommen.

RNA-Extraktion

Sobald die Proben gesammelt waren, war der nächste Schritt, die RNA zu extrahieren. Dies wurde mit speziellen Extraktionskits durchgeführt, die für geringe RNA-Mengen ausgelegt sind. Die Forscher fügten Spike-in-RNAS als Kontrollen hinzu, um zu prüfen, ob während des Extraktionsprozesses RNA abgebaut wurde. Diese Kontrolle half, sicherzustellen, dass ihre Ergebnisse zuverlässig waren.

Sequenzierung der RNA

Nachdem die RNA extrahiert wurde, bereiteten die Forscher sie auf die Sequenzierung vor, was wie ein Schnappschuss des Aufbaus der RNA ist. Sie verwendeten eine spezielle Technik, um lange Sequenzen aus der extrahierten RNA zu erzeugen. Kurze Lesesequenzierung wurde ebenfalls eingesetzt, um ergänzende Daten bereitzustellen.

Durch den Vergleich der langen und kurzen Reads hofften die Wissenschaftler, ein besseres Verständnis der RNA-Landschaft in ihren Proben zu bekommen.

Die Ergebnisse: Vollständige RNA

Die Analyse zeigte einige faszinierende Ergebnisse. Die Forscher entdeckten, dass die RNA im Blutplasma und Urin tatsächlich intakt war und vollständige Moleküle bildete. Das war ein grosser Durchbruch, weil es direkte Beweise dafür lieferte, dass lange RNA ausserhalb von Zellen in menschlichen Bioflüssigkeiten existiert.

Die Intaktheit der RNA

Um zu bestimmen, wie „ganz“ die RNA-Moleküle waren, verglichen die Forscher die Sequenzen, die sie erhalten hatten, mit den erwarteten Längen dieser Moleküle. Sie fanden heraus, dass ein guter Prozentsatz der RNA intakt war, was vielversprechende Nachrichten für weitere Studien ist. Es ist wie herauszufinden, dass ein Kuchen, den du für ein einfaches Muffin gehalten hast, nach allem noch Schichten und Frosting hat!

Verschiedene Biofluide, verschiedene RNA

Blutplasma vs. Urin

Die Forscher untersuchten auch, wie intakte RNA zwischen Blutplasma und Urin variierte. Sie fanden heraus, dass die Mengen an intakter RNA in verschiedenen Fraktionen beider Flüssigkeiten unterschiedlich waren. Im Blutplasma waren bestimmte RNA-Typen zahlreicher, während andere im Urin häufiger vorkamen.

Extrazelluläre Vesikel

Indem sie das Blutplasma in verschiedene Fraktionen trennten, konnten die Forscher sehen, wie sich intakte RNA in unterschiedlichen Situationen verhält. Die Ergebnisse zeigten, dass einige RNA-Typen die „rauen Gewässer“ ausserhalb der Zellen besser überstehen konnten als andere.

Einfacher gesagt, es war, als würde man beobachten, wie verschiedene Boote mit den Wellen umgehen – manche sind stabil und bleiben schwimmend, während andere kentern könnten.

Fazit: Die Erkenntnis

Diese Forschung beleuchtet die Präsenz von intakten RNA-Molekülen im menschlichen Blutplasma und Urin. Diese Erkenntnisse helfen, unser Verständnis darüber, wie RNA ausserhalb von Zellen funktioniert, zu erweitern und könnten zu spannenden neuen Erkundungen in der Medizin und Biologie führen.

Auch wenn es noch Fragen zu beantworten gibt – wie diese RNA-Moleküle vom Körper genutzt werden und welche Funktionen sie genau haben – eines ist klar: RNA ist viel mehr als nur ein Bote. Sie ist ein wichtiger Teil des zellulären Spiels, egal wo sie landet.

Also, das nächste Mal, wenn du von RNA hörst, denk daran, dass sie eine ziemlich interessante Geschichte zu erzählen hat. Von den Tiefen der Zellen bis zur Weite der Bioflüssigkeiten ist es eine Reise voller Wendungen, Überraschungen und ein bisschen wissenschaftlicher Magie!

Originalquelle

Titel: Intact messenger RNA exists in human blood plasma and urine, and their purified macromolecular compartments

Zusammenfassung: It is generally assumed that extracellular long RNA molecules in biofluids are fragmented. Few studies have indirectly hinted at the existence of possibly functional, intact long RNA transcripts. In search for such RNA molecules, we developed a long-read full transcript sequencing workflow for low-input and low-quality samples. We applied our method to human blood plasma, urine, and their isolated macromolecular compartments, in parallel with total RNA sequencing. This approach enabled us to find intact messenger RNA molecules in human biofluids and macromolecular compartments. We showed that the full-length transcriptome of human urine and blood plasma differs, but we also reveal intact messenger RNA molecules shared between biofluids. In addition, we show that these intact molecules are differentially distributed over fractionated macromolecular compartments. This study provides a foundation for future extracellular RNA studies to elucidate the human biofluid full-length transcriptome.

Autoren: Jasper Verwilt, Kimberly Verniers, Sofie De Geyter, Sofie Roelandt, Cláudio Pinheiro, An Hendrix, Pieter Mestdagh, Jo Vandesompele

Letzte Aktualisierung: Nov 30, 2024

Sprache: English

Quell-URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.30.626091

Quell-PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.30.626091.full.pdf

Lizenz: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Änderungen: Diese Zusammenfassung wurde mit Unterstützung von AI erstellt und kann Ungenauigkeiten enthalten. Genaue Informationen entnehmen Sie bitte den hier verlinkten Originaldokumenten.

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