Ferramenta Inovadora Aumenta a Criação de Membranas Celulares Sintéticas
O DIB-BOT facilita a produção de camadas de interface de gotículas pra pesquisa.
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Índice
- O que são Bilayers de Interface de Gotículas?
- A Necessidade de um Método Melhor
- Apresentando o DIB-BOT
- Como o DIB-BOT Funciona
- Resultados de Usar o DIB-BOT
- Explorando Padrões Complexos
- Avaliando a Função de Proteínas de Membrana
- Vantagens do DIB-BOT
- Limitações Atuais e Direções Futuras
- Conclusão
- Fonte original
Células artificiais estão sendo estudadas pra replicar funções biológicas básicas. Uma das partes chave desses modelos é a membrana celular. Pesquisadores desenvolveram vários métodos pra criar Membranas sintéticas usando diferentes materiais. As Bilayers de Interface de Gotículas (DIBs) são uma abordagem promissora pra criar essas membranas. Elas têm uns benefícios únicos, como estabilidade e facilidade de fazer diferentes tipos de bilayers.
O que são Bilayers de Interface de Gotículas?
As DIBs se formam ao juntar duas gotículas de água que contêm moléculas de Lipídios em óleo. Quando essas gotículas se tocam, uma bilayer de lipídio se forma naturalmente na interface entre elas. Esse processo permite que os cientistas criem bilayers estáveis que imitam membranas biológicas sem precisar de equipamentos ou técnicas complexas. As DIBs podem imitar algumas propriedades das membranas celulares reais e podem transportar íons, tornando-as úteis pra várias aplicações, como descoberta de drogas.
No entanto, criar DIBs pode levar tempo e requer habilidades e equipamentos especiais. A maioria dos métodos existentes envolve colocar gotículas manualmente, o que pode ser lento e levar a inconsistências no tamanho e na posição das gotículas.
A Necessidade de um Método Melhor
Pra resolver esses desafios, os pesquisadores têm buscado maneiras de tornar o processo de criação das DIBs mais rápido e confiável. Os métodos atuais normalmente criam DIBs um par de gotículas de cada vez, limitando o número de bilayers que podem ser criadas rapidamente. Automatizar esse processo poderia ajudar a aumentar a produtividade e reduzir o tempo pra desenvolver essas membranas.
Uma abordagem é usar uma impressora 3D junto com um dispositivo especializado que deposita pequenos volumes de líquido com precisão. Esse arranjo pode ajudar a formar DIBs de forma mais eficiente e precisa do que os métodos manuais.
Apresentando o DIB-BOT
Um novo instrumento de código aberto chamado DIB-BOT foi desenvolvido pra agilizar o processo de criação de DIBs. Esse dispositivo usa uma impressora 3D padrão e um pequeno injetor de líquido pra automatizar o processo de deposição de gotículas. O DIB-BOT pode criar muitas DIBs em um curto período com mínima participação do usuário, garantindo que as gotículas sejam colocadas e dimensionadas de forma consistente.
O DIB-BOT funciona depositando quantidades específicas de líquido em uma placa de 384 poços, o que permite experimentos de alto rendimento. Esse arranjo facilitou pra os pesquisadores explorarem uma variedade de condições ao trabalharem com DIBs.
Como o DIB-BOT Funciona
Criar DIBs com o DIB-BOT envolve duas etapas principais. Primeiro, um tipo de lipídio é dissolvido em óleo pra criar uma solução. Segundo, pequenas quantidades de solução aquosa são injetadas nessa fase oleosa. Quando duas gotículas entram em contato, elas formam uma bilayer entre elas. O DIB-BOT é projetado pra lidar com essas etapas de forma fácil e reproduzível.
O DIB-BOT usa um código de software especial pra controlar o injetor de gotículas e a impressora 3D. Isso permite que ele posicione as gotículas com precisão nos poços, garantindo resultados consistentes entre os experimentos. O arranjo pode reduzir significativamente o tempo necessário pra criar DIBs em comparação aos métodos tradicionais.
Resultados de Usar o DIB-BOT
O DIB-BOT se mostrou eficaz na criação de DIBs com alta precisão. Ao automatizar o processo, ele consegue produzir um número maior de DIBs mais rápido do que os métodos manuais. Em testes, o DIB-BOT mostrou menos variabilidade no tamanho e na posição das gotículas, levando a resultados mais confiáveis.
Ao criar sistemas de duas gotículas, o DIB-BOT pode lidar com várias cores e condições de forma eficiente. Isso significa que os pesquisadores podem estudar como diferentes condições afetam o comportamento das gotículas e suas interações dentro da bilayer.
Explorando Padrões Complexos
Uma das características empolgantes do DIB-BOT é sua capacidade de criar padrões complexos de gotículas. Isso pode permitir que os cientistas simulem sistemas biológicos mais complicados, como tecidos compostos por múltiplos tipos de células. O DIB-BOT pode criar diferentes combinações de gotículas rapidamente, abrindo portas pra novas possibilidades de pesquisa.
Testes iniciais com o DIB-BOT mostraram que ele pode padronizar uma variedade de combinações de gotículas em uma placa de 384 poços. Essa capacidade é crucial pra estudar sistemas multicelulares, pois permite que os pesquisadores observem como diferentes tipos de células interagem em um ambiente controlado.
Avaliando a Função de Proteínas de Membrana
Outra capacidade significativa do DIB-BOT é a de estudar proteínas de membrana. Por exemplo, um experimento envolveu inserir uma proteína específica (α-hemolisina) nas DIBs pra investigar como bem ela facilitou o movimento de íons através da bilayer. Ao variar as condições e observar os resultados, os pesquisadores puderam determinar como efetivamente a proteína funcionava.
O DIB-BOT permite medir o fluxo de íons em tempo real, proporcionando insights valiosos sobre o comportamento das proteínas de membrana. Essas descobertas podem ter implicações pra entender como certas proteínas funcionam em células vivas.
Vantagens do DIB-BOT
O DIB-BOT apresenta várias vantagens. Primeiro, ele reduz significativamente o tempo e o esforço necessários pra criar DIBs. Os pesquisadores não precisam mais posicionar gotículas manualmente, o que pode levar a erros. Em vez disso, o DIB-BOT automatiza todo o processo, garantindo alta precisão e repetibilidade.
Além disso, o DIB-BOT é construído com componentes facilmente disponíveis, tornando-o acessível pra muitos laboratórios. Essa acessibilidade incentiva mais pesquisadores a explorar as capacidades das DIBs e suas potenciais aplicações em várias áreas.
Limitações Atuais e Direções Futuras
Embora o DIB-BOT ofereça muitos benefícios, ainda existem algumas limitações. Por exemplo, criar sistemas de gotículas complexas com mais de duas gotículas pode ser desafiador devido a restrições de resolução. Atualizar a impressora ou usar componentes mais avançados pode melhorar o desempenho.
Além disso, enquanto o design atual do DIB-BOT é flexível, pode exigir algum conhecimento de impressão 3D e programação pra uso ideal. No entanto, a natureza de código aberto do DIB-BOT permite mais desenvolvimento e melhorias, incentivando a colaboração e a inovação na comunidade de pesquisa.
Conclusão
O DIB-BOT é um avanço significativo no campo da biologia sintética. Ao automatizar a criação de bilayers de interface de gotículas, ele tem o potencial de agilizar a pesquisa e expandir as possibilidades de estudar processos biológicos complexos. Essa ferramenta não só aumenta o rendimento dos experimentos, mas também melhora a precisão e a repetibilidade dos resultados.
Conforme os pesquisadores continuam a explorar as capacidades das DIBs e do DIB-BOT, podemos ver desenvolvimentos empolgantes em como entendemos e manipulamos sistemas biológicos. Ao diminuir barreiras de entrada, o DIB-BOT pode levar a novas descobertas em áreas como comportamento de proteínas de membrana, desenvolvimento de drogas e engenharia de tecidos sintéticos.
Título: DIB-BOT: An open-source hardware approach for high throughput droplet interface bilayer deposition
Resumo: Droplet interface bilayers (DIBs) provide a controlled lipid environment for the single-molecule investigation of a range of biologically relevant membrane-bound processes and have garnered attention for their potential applications in bottom-up artificial cells, biosensing, and biophysics. However, the fabrication of DIBs is currently hindered by time-consuming processes and specialized equipment. These fabrication limitations prevent the scale-up of DIB assays, making it difficult to generate the large data sets required to achieve statistically significant conclusions in single-molecule biological assays where heterogeneous behaviour is often observed. This research describes an open-source solution, dubbed "DIB-BOT," constructed by coupling a nanoinjector with an entry-level 3D printer. We present DIB-BOT as a platform to achieve rapid, reproducible, and reliable fabrication of large numbers of DIBs, addressing the limitations of manual methods. Leveraging commercially available off-the-shelf components, DIB-BOT exhibits high spatial reproducibility, minimal user input, and the ability to scale experiments rapidly. Here we demonstrate the utility of the system by integrating pairwise droplet assembly with a fluorescence plate-reader to execute a biologically relevant assay. When compared with manual DIB fabrication, the DIB-BOT had a tenfold reduction in droplet volume error, a threefold reduction in positional error, and 100% droplet yield. Overall, this method has potential to reduce entry barriers to the use of DIB methods, broadening the applications of DIB research, and generating higher quality data sets.
Autores: Matthew AB Baker, A. F. Mason, S. F. Wickham
Última atualização: 2024-01-26 00:00:00
Idioma: English
Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.26.577347
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.26.577347.full.pdf
Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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