Novos Sensores Transformam a Pesquisa de Cálcio nas Células
Os sensores NEMOer oferecem um rastreamento melhorado da dinâmica de cálcio em células vivas.
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Índice
O Cálcio desempenha um papel super importante em várias funções dentro das nossas Células. Ele ajuda a regular processos que mantêm nossos corpos funcionando direitinho. O retículo endoplasmático ou sarcoplasmático (RE/RS) é uma das principais fontes de cálcio nas células animais. Quando esse sistema de cálcio sai do equilíbrio, pode causar estresse no RE e até morte celular. Esse desequilíbrio está ligado a várias doenças como câncer, problemas cardíacos e condições que afetam o sistema nervoso. Para entender melhor como o cálcio do RE se comporta em células saudáveis e doentes, é essencial visualizar suas mudanças com precisão ao longo do tempo.
Novas Ferramentas para Estudar a Dinâmica do Cálcio
Os pesquisadores desenvolveram ferramentas especiais, ou Sensores, que ajudam a monitorar os níveis de cálcio nas células. Ao modificar certas proteínas que se ligam ao cálcio, os cientistas criaram sensores que mostram quando os níveis de cálcio sobem ou descem. Esses sensores incluem várias versões, como GCaMP e GECO, que conseguem medir as mudanças de cálcio, mas têm limitações como tempos de resposta lentos ou alcances de detecção limitados.
Uma das inovações notáveis é um conjunto de sensores chamados NEMOer, que foram projetados para responder de forma mais sensível e rápida às mudanças de cálcio. Isso permite um melhor monitoramento de eventos rápidos de cálcio que ocorrem nas células, como os nas células musculares do coração durante as contrações.
Melhorando o Design dos Indicadores de Cálcio
Para criar esses sensores NEMOer, os pesquisadores fizeram alterações específicas em proteínas existentes de maneira que elas competissem melhor pelo cálcio. Ao introduzir essas mudanças e direcioná-las para o RE, os sensores NEMOer exibem sinais brilhantes e uma ampla faixa dinâmica. Isso permite que eles captem até pequenas flutuações nos níveis de cálcio, o que é importante para entender como o cálcio influencia várias atividades celulares.
Em testes, os sensores NEMOer mostraram uma resposta muito mais forte às mudanças de cálcio em comparação com sensores mais antigos. Por exemplo, quando o armazenamento de cálcio no RE foi esvaziado usando um medicamento, os sensores NEMOer mostraram uma queda impressionante na fluorescência em comparação com sensores tradicionais. Isso indica que eles conseguem detectar mudanças mais significativas nos níveis de cálcio ao longo do tempo.
Desempenho em Diferentes Tipos de Células
A eficácia dos sensores NEMOer foi avaliada em vários tipos de células. Por exemplo, quando utilizados em células musculares do coração, o NEMOer-f, uma das variantes do NEMOer, conseguiu detectar rapidamente as mudanças de cálcio em resposta à Estimulação Elétrica ou cafeína, que provoca a liberação de cálcio. Isso é importante para entender como as células do coração funcionam durante a contração.
Em neurônios, o NEMOer-n mostrou uma resposta significativa à estimulação elétrica, especialmente nas dendritas, onde os níveis de cálcio tendem a aumentar. Isso demonstra a capacidade dos sensores NEMOer de fornecer insights críticos sobre a sinalização de cálcio nas células nervosas, que é vital para o funcionamento saudável do cérebro.
Sensores Ratiométricos Novos
Para aprimorar ainda mais a medição dos níveis de cálcio, os pesquisadores desenvolveram uma versão chamada TuNer, que utiliza um sistema de duas cores. Esse sistema permite um melhor rastreamento e fornece uma imagem mais clara das mudanças de cálcio em diferentes áreas da célula. Quando os sensores TuNer foram testados, eles conseguiram medir com sucesso os níveis de cálcio de baseline e as mudanças durante a estimulação, demonstrando seu potencial para estudos celulares detalhados.
Estudos In Vivo em Zebrafish
Os sensores NEMOer foram testados em zebrafish vivos, que são transparentes em certos estágios, permitindo que os pesquisadores observem os sensores em ação dentro de células musculares vivas. Quando os músculos contraíram, os sensores detectaram mudanças de cálcio, mostrando que conseguem funcionar efetivamente em um organismo vivo.
Resumo das Principais Descobertas
No geral, os sensores NEMOer representam um avanço significativo no estudo da dinâmica do cálcio nas células. Eles são mais brilhantes e sensíveis do que os sensores anteriores, permitindo a detecção de eventos rápidos de cálcio que são cruciais para entender as funções do coração e do sistema nervoso. Ao fornecer novas maneiras de visualizar mudanças no cálcio, os sensores NEMOer criam oportunidades empolgantes para futuras pesquisas sobre como a sinalização de cálcio impacta a saúde e as doenças.
Direções para Pesquisas Futuras
As descobertas sobre os sensores NEMOer abrem caminho para uma exploração mais profunda da sinalização de cálcio em vários contextos biológicos. Estudos futuros podem se concentrar em como esses sensores podem ser usados para monitorar mudanças de cálcio em tempo real durante diversas atividades celulares ou em resposta a diferentes estímulos. Compreender essas dinâmicas pode levar a insights sobre mecanismos de doenças e possíveis alvos terapêuticos, principalmente para condições que envolvem a desregulação do cálcio.
Além disso, os pesquisadores podem explorar a otimização desses sensores ainda mais para obter uma resolução e tempos de resposta melhores. A possibilidade de utilizar sensores NEMOer em uma variedade maior de organismos e tipos celulares poderia ajudar a revelar novos aspectos da sinalização de cálcio que atualmente não são bem compreendidos.
Conclusão
Para concluir, o desenvolvimento dos sensores NEMOer representa um avanço incrível no rastreamento da sinalização de cálcio em várias células. Essas ferramentas fornecem novos insights sobre os comportamentos intrincados do cálcio em organismos vivos e destacam a importância do cálcio em manter a saúde e a função celular. À medida que a pesquisa avança, os sensores NEMOer têm o potencial de impactar significativamente nossa compreensão de muitos processos biológicos e doenças ligadas à sinalização de cálcio.
Título: Highly Dynamic and Sensitive NEMOer Calcium Indicators for Imaging ER Calcium Signals in Excitable Cells
Resumo: Endoplasmic/sarcoplasmic reticulum (ER/SR) sits at the heart of the calcium (Ca2+) signaling machinery, yet current genetically encoded Ca2+ indicators (GECIs) lack the ability to detect elementary Ca2+ release events from ER/SR, particularly in muscle cells. Here we report a set of organellar GECIs, termed NEMOer, to efficiently capture ER Ca2+ dynamics with increased sensitivity and responsiveness. Compared to G-CEPIA1er, NEMOer indicators exhibit dynamic ranges that are an order of magnitude larger, which enables up to 5-fold more sensitive detection of Ca2+ oscillation in both non-excitable and excitable cells. The ratiometric version further allows super-resolution monitoring of local ER Ca2+ homeostasis and dynamics. Notably, the NEMOer-f variant enabled the inaugural detection of Ca2+ blinks, elementary Ca2+ releasing signals from the SR of cardiomyocytes, as well as in vivo spontaneous SR Ca2+ releases in zebrafish. In summary, the highly dynamic NEMOer sensors expand the repertoire of organellar Ca2+ sensors that allow real-time monitoring of intricate Ca2+ dynamics and homeostasis in live cells with high spatiotemporal resolution.
Autores: Youjun Wang, W. Gu, J.-H. Chen, Y. Zhang, J. Li, H. Zhang, A. Jiang, Z. Zhong, J. Zhang, C. Xi, T. Hou, D. L. Gill, D. Li, Y. Mu, A.-H. Tang
Última atualização: 2024-04-28 00:00:00
Idioma: English
Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.08.583332
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.08.583332.full.pdf
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