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# 生物学# 免疫学

樹状細胞の分離の新しい方法

研究者たちが免疫研究のために樹状細胞をより早く分離する方法を見つけた。

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速い樹状細胞分離法速い樹状細胞分離法た。新しい技術が樹状細胞の研究効率を向上させ
目次

樹状細胞(DC)は、体が感染を認識して戦うのを助ける大事な免疫細胞だよ。彼らは抗原という小さな断片を処理することでこれを行っていて、抗原は免疫反応を引き起こす物質なんだ。特別なタイプの抗原提示細胞として、彼らは免疫システムの働きにおいてキーの役割を果たしているよ。DCは病原体を見つけて、リンパ球などの他の免疫細胞に情報を伝えるのを助けるんだ。

樹状細胞の重要性

免疫システムでの重要な役割にもかかわらず、DCは免疫細胞の中でわずか1〜2%しか占めていないんだ。だから、大量のDCを研究のために得るのは難しいことがある。研究者たちは、Flt3Lというタンパク質を生成する特定の腫瘍モデルを使ったり、DCの数を増やすためのさまざまなサイトカインを追加して、十分な樹状細胞を手に入れることが多いんだ。

それとは別に、科学者たちは骨髄から樹状細胞をラボで作ることもできるよ。この方法では、3つの主なタイプに分類されるより多くの細胞を得ることができるんだ:

  1. 形質芽細胞型樹状細胞(pDC):ウイルス感染と戦うのに重要な細胞だよ。
  2. タイプ1従来型樹状細胞(cDC1):CD8+ T細胞という特定のタイプのT細胞に抗原を提示するのが得意なんだ。
  3. タイプ2従来型樹状細胞(cDC2):他のTヘルパー細胞を活性化するのを助ける細胞で、さまざまな種類の感染に対応するのに重要なんだ。

すべての樹状細胞はCD11cという共通のマーカーを持っているけど、他のマーカーによって見分けることもできるよ。たとえば、pDCはB220というマーカーのレベルが高いし、cDC1はCD24やClec9Aのマーカーが高いんだ。

樹状細胞の生成プロセス

研究者が骨髄から樹状細胞を作りたいとき、伝統的な方法は注射器を使って骨から骨髄を洗い流すことなんだ。このプロセスは、多くの細胞が必要な場合、時間と労力がかかることがあるんだよ。さらに、洗浄中に骨を傷つけないように注意するのもスキルが必要なんだ。

最近、遠心分離を利用した技術がより早い代替手段として提案されたんだ。遠心分離は、骨を回転させて骨髄を分離することで、時間を節約できて、より多くの細胞を得られそうなんだ。ただ、どちらの方法が樹状細胞を生成するのにより良いかを比較する必要があったんだ。

DC分離の2つの方法の比較

比較では、研究者たちは洗浄法と遠心法を同時に使って、集められた細胞の数と生成された樹状細胞のタイプが似ているかを見たんだ。結果は、遠心法はかなり短い時間で、洗浄と同じくらいの樹状細胞を生成したことを示したよ。

骨髄分離の手順

どちらの方法でも、最初のステップは骨を準備することなんだ。研究者たちは慎重にマウスから骨を取り出すよ。消毒して、皮膚を切り、他の組織を取り除いて骨を露出させるんだ。骨が露出したら、次のステップに進むよ。

洗浄法
  1. 骨の端を切って骨髄を露出させる。
  2. 冷たいDC培地を入れた注射器で骨髄をチューブに洗い流す。
  3. 骨髄を優しく混ぜて塊をほぐす。
遠心法
  1. 骨の片方の端を切る。
  2. 特殊なチューブに立てて置く。
  3. 冷たいDC培地を追加して、遠心分離機でチューブを回す。
  4. 骨髄は底に沈み、骨は空のときに白く見える。

どちらの方法でも、さらに処理するための十分な細胞を得ることができるよ。

樹状細胞の培養

骨髄を採取した後は、細胞を特別な培地で培養して、数日間で樹状細胞に成長・分化させる次のステップに進むよ。この間、細胞の健康と機能を維持するために、細胞を乱さないことが大事なんだ。

8日目には、研究者たちが培養物をチェックするんだ。通常、マウス1匹あたり約4000万細胞が見えるよ。樹状細胞の発達を評価するために、研究者たちはフローサイトメトリーという技術を使って、細胞の特徴を分析することができるんだ。

主要な発見

研究の結果は以下の通りだよ:

  1. 遠心法は速い:遠心法を使うことで、サンプルの準備にかかる時間が大幅に短縮されたよ。
  2. 類似の細胞タイプ:どちらの分離方法でも類似のタイプの樹状細胞が生成されたので、遠心法が彼らの特性を変えなかったことを示しているんだ。
  3. 遠心法での細胞収量が多い:培養期間の終わりには、遠心法がより多くの細胞を得られたよ。

細胞収量と質の重要性

より多くの樹状細胞を持つことは、特に免疫反応でこれらの細胞がどのように機能するかを研究する上で大きな違いを生むことができるんだ。研究者たちは、ワクチンや癌治療などの実験に十分な量のこれらの細胞が必要なんだよ。

この研究は、遠心法を使うことで科学者たちがより効率的に質の高い樹状細胞を得られることを示しているんだ。

結論

樹状細胞は免疫システムにとって重要で、感染を検出し応答するのを助けるんだ。研究のために十分な数の樹状細胞を分離するのは大変だけど、2つの異なる方法を比較した結果、遠心法はより速く、同じくらい効果的な方法だとわかったよ。

この技術の進展は、免疫学の研究 efforts、特により良いワクチンや病気の治療法の開発に貢献できるんだ。質の高い樹状細胞を迅速に分離・培養する能力は、科学者たちがこれらの細胞が健康と病気においてどのように重要な役割を果たすかを探求し続ける手助けになるんだ。

オリジナルソース

タイトル: A Simple and Rapid Protocol for the Isolation of Murine Bone Marrow Suitable for the Differentiation of Dendritic Cells

概要: The generation of bone marrow-derived dendritic cells is a widely used approach in immunological research to study antigen processing and presentation as well as T cell activation responses. However, the initial step of isolating the bone marrow can be time-consuming, especially when larger numbers of precursor cells are required. Here, we assessed whether an accelerated bone marrow isolation method using centrifugation is suitable for the differentiation of FMS-like tyrosine kinase 3 ligand-driven dendritic cells. Compared to the conventional flushing method, the centrifugation-based isolation method resulted in a similar bone marrow cell yield on day 0, increased cell numbers by day 8, similar proportions of dendritic cell subsets, and consequently a higher number of type 1 conventional dendritic cells (cDC1) from the culture. Although the primary purpose of the method optimization was to improve experimental efficiency and increase the output of cDC1s, the protocol is also compatible with the differentiation of other dendritic cell subsets such as cDC2 and plasmacytoid dendritic cells, with an improved output cell count and a consistent phenotype.

著者: Asolina Braun, R. Song, M. Bafit, K. M. Tullett, P. S. Tan, M. H. Lahoud, M. O'Keeffe, A. W. Purcell

最終更新: 2024-01-31 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.29.577349

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.29.577349.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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