工業用の酵母株の最適化
研究が、バイオ燃料や食品生産における酵母のパフォーマンスを向上させる方法を明らかにしている。
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目次
酵母は、食品やバイオ燃料の生産など、さまざまな業界で使われる強力な微生物だよ。酵母の品種改良は、目的の製品を生産する能力を向上させるために重要なんだ。効果的な方法の一つは、機能的ゲノムスクリーニングを通じて行うことだよ。このプロセスによって、科学者たちは酵母のパフォーマンスを向上させる重要な特性に関与する特定の遺伝子を特定できるんだ。
機能的ゲノムスクリーニングの重要性
機能的ゲノムスクリーニングは、研究者が遺伝子とその機能の関係を理解するのに役立つ技術だよ。さまざまな酵母の品種を検査することで、科学者たちは有害物質への耐性やエタノールの耐性、酵母の形状や構造の変化などの特性に注目できるんだ。この情報は、産業用途でより良いパフォーマンスを発揮できる酵母の品種を作るために不可欠なんだ。
Saccharomyces cerevisiaeやYarrowia lipolyticaなどの酵母は、多くのゲノム研究の対象になってきたよ。これらのスクリーニングでは、環境ストレスへの抵抗力の向上や、タンパク質の生産と放出の改善、代替栄養素の利用能力の向上など、重要な発見があったんだ。これらの研究の結果は、バイオ燃料生産や製薬、食品加工などのさまざまな分野に役立ってるよ。
遺伝子編集の進展
最近では、遺伝子編集技術、特にCRISPRシステムの進展によって、研究者が機能的ゲノムスクリーニングを行う方法が革新されたんだ。CRISPR法を使うと、酵母のDNAに正確な変更を加えることができて、特定の遺伝子の役割を特定しやすくなるよ。CRISPRを使うことで、遺伝子を削除したり変更したりして、これらの変化が酵母の成長や繁殖にどう影響するかを見ることができるんだ。
CRISPRベースのスクリーニングの主要な要素は、ガイドRNA(GRNA)の使用だよ。gRNAはCRISPRシステムをゲノムの特定の部分に導く役割をするんだ。幅広い遺伝子に目標を設定するgRNAのライブラリを作ることで、研究者たちは同時に複数の遺伝子の機能を効率的に調査できるようになるんだ。
機能的ゲノムスクリーニングの種類
機能的ゲノムスクリーニングは、主に2つのタイプに分けられるよ:アレイスクリーンとプールスクリーン。
アレイスクリーン
アレイスクリーンでは、個々の酵母の変異体を作成して、一つ一つテストするんだ。この方法では、各変異体の特性、例えば成長率や耐性レベルを正確に測定できるけど、特に大きな変異体ライブラリを扱う場合は労力がかかるんだ。
プールスクリーン
一方、プールスクリーンでは、複数の変異体を1つの培養液にまとめるんだ。この方法はより効率的で、研究者たちは同時に多くの変異体を調べることができるよ。プール状態では個々の変異体を追跡するのが難しいけど、シーケンシング技術の進歩によって、どのgRNAが存在しているのかを分析できるようになって、酵母のパフォーマンスに大きく影響する遺伝子を特定する手助けをしてくれるんだ。
最適化されたsgRNAライブラリの開発
最近では、酵母研究に使うための最適化されたgRNAライブラリの作成に注力が注がれているよ。gRNAの数を減らしつつ、酵母のゲノムを効果的にカバーできるようにすることで、科学者たちはスクリーニングプロセスを簡素化できるようになるんだ。これには、特定の遺伝子をターゲットにするのが非常に効果的なgRNAを選ぶことが含まれるよ。
新しいgRNAライブラリを設計する際、研究者たちは酵母のゲノム内の各遺伝子が適切にターゲットされるようにすることを目指しているんだ。これによって、管理しやすいgRNAの数とゲノムの効果的なカバーのバランスを保てるから、最小限のリソースで効率的なスクリーニングができるようになるんだ。
代替炭素源での成長スクリーニング
酵母の品種を最適化する主な目標の一つは、代替炭素源での成長を改善することだよ。特に、アセテートや長鎖炭化水素、脂肪酸のような源は、バイオ燃料生産やその他の産業用途での利用の可能性から注目を集めているんだ。
最適化されたgRNAライブラリを使って、科学者たちはアセテートを唯一の炭素源として育てたときに、さまざまな酵母の品種がどうパフォーマンスを発揮するか実験を行ったんだ。この実験では、ノックアウトしたときにアセテートでの成長が向上する遺伝子がたくさん見つかったよ。これらの遺伝子を特定するのは、非グルコース炭素源で繁栄できる品種を開発するために重要なんだ。
アセテートスクリーニングの結果
アセテートスクリーニング実験では、異なる濃度のアセテートを含む培地で酵母の品種を育てたよ。研究者たちはノックアウトした各遺伝子のフィットネススコアを計算して、どの遺伝子が成長の有利をもたらしたかを判断したんだ。アセテートでの成長が向上した品種はさらに評価され、いくつかの重要な遺伝子が特定されたんだ。
結果は、特定の遺伝子のノックアウトが、酵母がアセテートを与えられたときに指数成長期に入るまでの時間を大幅に短縮することを示していたよ。この発見は、これらの遺伝子を修正することで、代替炭素源を利用するのにより効率的な酵母の品種が得られる可能性があることを示唆しているんだ。
炭化水素での成長テスト
アセテートでの成長を成功裏にスクリーニングした後、関心は炭化水素に向けられたんだ。炭化水素は酵母の別の潜在的な炭素源で、酵母がこれらの物質をどのように代謝するかを理解することは、産業応用にとって重要なんだ。
機能的ゲノムスクリーニングを行って、ドデカンやオレイン酸などのさまざまな炭化水素を使って、酵母が繁栄するために必要な遺伝子を特定する実験を行ったんだ。アセテートスクリーニングのように、遺伝子ノックアウトのフィットネススコアを計算して、これらの炭素源で成長に必要な重要な遺伝子や有益な遺伝子を見つけることができたよ。
炭化水素スクリーニングの影響
炭化水素スクリーニングでは、酵母の成長や生産性を向上させる可能性のある多数の遺伝子ターゲットが特定されたんだ。多くの重要な遺伝子は、炭化水素を分解するために必要な代謝経路に関連していたよ。また、フィットネスの利点を与える一部の遺伝子は、細胞膜の維持やストレス応答に関連していて、厳しい成長環境での生存にとって重要なんだ。
この研究は、酵母の代謝とさまざまな基質での成長に影響を与える遺伝的要因を理解することの重要性を強調しているよ。これらのスクリーニングから得られた洞察は、産業用に酵母品種を強化するための将来の工学的努力を導く手助けになるんだ。
結論
機能的ゲノムスクリーニングは、産業用途のために酵母の品種を最適化するための重要なツールとして浮上してきているよ。CRISPRのような先進的な遺伝子編集技術を利用して、研究者は代替炭素源での成長を促進する遺伝子を効率的に特定し、ターゲットにできるんだ。
これらのスクリーニングから得られた結果は、酵母の生物学への理解を深めるだけでなく、より効率的な品種の開発への道を開いてくれるよ。持続可能な実践や代替エネルギー源への関心が高まる中、酵母がバイオ燃料や関連産業で重要な役割を果たす可能性がますます明らかになってきているよ。
要するに、この分野での研究は、産業バイオテクノロジーや、酵母を使った持続可能な生産戦略の開発に大きな影響を与える可能性がある貴重な洞察をもたらすことが期待されてるんだ。代謝工学と機能的ゲノミクスに焦点を当てることで、食品生産やバイオ燃料など、多様な用途での酵母の利用が明るい未来を迎えてるんだ。
タイトル: Optimized genome-wide CRISPR screening enables rapid engineering of growth-based phenotypes in Yarrowia lipolytica
概要: CRISPR-Cas9 functional genomic screens uncover gene targets linked to various phenotypes for metabolic engineering with remarkable efficiency. However, these genome-wide screens face a number of design challenges, including variable guide RNA activity, ensuring sufficient genome coverage, and maintaining high transformation efficiencies to ensure full library representation. These challenges are prevalent in non-conventional yeast, many of which exhibit traits that are well suited to metabolic engineering and bioprocessing. To address these hurdles in the oleaginous yeast Yarrowia lipolytica, we designed a compact, high-activity genome-wide sgRNA library. The library was designed using DeepGuide, a sgRNA activity prediction algorithm, and a large dataset of [~]50,000 sgRNAs with known activity. Three guides per gene enables redundant targeting of 98.8% of genes in the genome in a library of 23,900 sgRNAs. We deployed the optimized library to uncover genes essential to the tolerance of acetate, a promising alternative carbon source, and various hydrocarbons present in many waste streams. Our screens yielded several gene knockouts that improve acetate tolerance on their own and as double knockouts in media containing acetate as the sole carbon source. Analysis of the hydrocarbon screens revealed genes related to fatty acid and alkane metabolism in Y. lipolytica. The optimized CRISPR gRNA library and its successful use in Y. lipolytica led to the discovery of alternative carbon source-related genes and provides a workflow for creating high-activity, compact genome-wide libraries for strain engineering. HighlightsO_LIDesigned a compact, high activity CRISPR sgRNA knockout library for Yarrowia lipolytica. C_LIO_LIDeveloped an efficient pipeline for discovering genes involved in alternative carbon-source utilization. C_LIO_LIIdentified single and double gene knockouts that improve growth on acetate. C_LIO_LIIdentified genes with improved fitness and essentiality for hydrocarbon growth. C_LI
著者: Ian Wheeldon, N. R. Robertson, V. Trivedi, B. Lupish, A. Ramesh, Y. Aguilar, A. Arteaga, A. Nguyen, S. Lee, C. Lenert-Mondou, M. Harland-Dunaway, R. Jinkerson
最終更新: 2024-06-20 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.20.599746
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.20.599746.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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