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BOOST: 拡張顕微鏡法をもっと速くするアプローチ

科学者たちが、より鮮明な画像のためにサンプル準備を速くするBOOSTを開発した。

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目次

科学者たちは常に生物サンプルの細かいディテールを見るためのより良い方法を探しています。彼らが使う重要な技術の一つが顕微鏡です。最近の拡張顕微鏡法(ExM)という方法は、サンプルを物理的に大きくすることで、研究者がより明確な画像を取るのを助けます。この新しい方法は、科学者が細胞や組織を観察する方法を変えました。サンプルを拡張することで、研究者は通常の光顕微鏡では見られない細かい部分を確認できます。

拡張顕微鏡法の可能性

導入以来、さまざまな研究ニーズに応じた多くのExMの方法が作られてきました。これらの新しい技術の中には、25ナノメートルといった小さな構造を視覚化できる高い解像度を達成したものもあります。場合によっては、研究者は単一のタンパク質を視覚化することに成功し、生物サンプルについての驚くべき詳細を明らかにしています。これにより、細胞の組織や機能についての新しい洞察が得られました。

でも、問題があります。ExMのためにサンプルを準備するのに時間がかかると、緊急の状況、例えば医療診断などでは使いづらくなります。フォルマリンで固定されてパラフィンに埋め込まれたサンプルのように、準備に数日かかることもあります。この遅さは、迅速な判断が必要な時には大きな欠点です。したがって、ExMをより早く効率的に使う方法が強く求められています。

サンプル処理におけるマイクロ波照射

一つの潜在的な解決策はマイクロ波照射で、これはさまざまな顕微鏡技術においてサンプル準備を迅速化するのに役立つことが証明されています。マイクロ波は組織を固定したり、他の準備プロセスを強化したりするのに役立ち、研究者が生物サンプルを扱うのを簡単かつ迅速にします。

このアイデアは、ExMプロセスの特定のステップ、例えば化学物質の導入、ゲルの形成、サンプルの処理がマイクロ波エネルギーの恩恵を受けられる可能性があるというものです。たとえば、ゲルを作成する際にマイクロ波を使うことで、反応がより早く効率的に行われます。つまり、研究者は通常の時間の一部でサンプルを準備できるかもしれません。

BOOSTの導入

ExMで直面する課題に応じて、科学者たちはBOOSTという新しい方法を開発しました。この技術は、拡張顕微鏡法の全体のワークフローを合理化することを目指しています。BOOSTは、さまざまな生物サンプルに適用できる一連のシンプルで効果的なマイクロ波対応のステップを意味します。

BOOSTを使うことで、研究者はサンプルの準備時間を数日から数時間に短縮することに成功しました。これはサンプルの種類や必要な染色によって変わります。この大幅な時間短縮により、迅速な処理が必要なサンプルを扱うことが可能になり、医療や臨床の場面でも役立ちます。

BOOSTのワークフロー

BOOSTは、拡張顕微鏡法のためのサンプル準備を成功させる一連のステップを含みます。まず、プロセスはマイクロ波エネルギーに対応した特別設計のゲルから始まります。科学者たちは、このゲルが効果的な拡張のための必要な特性を提供するように注意深く配合します。

次に、サンプルは生物材料をゲルに対してより受容的にする処理を受けます。この「アンカリング」ステップにより、サンプル内のタンパク質がゲルにしっかりと付着し、拡張プロセスの準備が整います。

アンカリングが完了すると、サンプルは加水分解ステップを受け、ゲルが膨張するように処理されます。このステップではマイクロ波が熱を提供し、望ましい膨張を達成するのを助ける化学反応を加速します。最後に、特定の染料でサンプルを染色して、画像化するための特定の構造を強調することができます。

全体として、BOOSTは拡張顕微鏡法のプロセスを大幅に効率化し、効果的にし、生物学的研究におけるより広範な応用を可能にします。

BOOSTの利点

BOOSTの実施は、従来のExM法に対して多くの利点を提供します。迅速な処理時間により、研究者は結果をより早く得ることができ、医療診断のような時間に敏感な状況では重要です。また、BOOSTは高品質の画像を生み出し、研究者が複雑な生物構造を研究するために必要なディテールを保持することが示されています。

もう一つの大きな利点は、BOOSTの方法が頑丈であることです。これは、培養細胞、組織、さらにはフォルマリン固定やパラフィン埋め込みセクションのようなより難しいサンプルでもうまく機能します。この多様性により、研究者はさまざまな研究分野でBOOSTを適用できます。

さらに、BOOST用に開発されたゲルには、以前の技術で問題を引き起こす可能性のある成分(例えばアクリル酸ナトリウム)が含まれていません。これにより、研究者は不均一な染色やサンプルの収縮などの問題に直面する可能性が低くなり、より一貫した結果が得られます。

詳細なイメージング能力

BOOSTは、サンプル内の超構造的な詳細を解決するのに効果的であることが証明されています。BOOSTで使用される高度な方法により、研究者は細胞内の小さな特徴、例えば小器官や複雑な組織構造を高い明瞭さで視覚化できるようになりました。この能力は、細胞がどのように機能し自然環境で相互作用するかを理解するのに特に重要です。

例えば、研究者は培養細胞を調べ、ミトコンドリアの配置や細胞核の組織のような細かな詳細を明らかにすることができました。このディテールのレベルは、さまざまな条件下での細胞の健康や振る舞いについての重要な情報を提供できます。

さらに、BOOSTは組織サンプルの研究にも成功裏に適用され、脳内のニューロンや肝細胞の複雑な働きを視覚化することを可能にしました。ナノスケール解像度でこれらの構造を画像化できる能力は、病理学や細胞生物学の分野での研究の新しい可能性を開きます。

医療研究における応用

BOOSTによる処理時間と画像品質の急速な改善は、医療研究にとってエキサイティングな進展です。たとえば、病理学において、組織サンプルを迅速に拡張して分析できることは、癌などの病気の迅速な診断につながります。腫瘍の細部を視覚化することで、病理学者は治療オプションについてよりよい決定を下すことができます。

また、BOOSTの多様性によって、さまざまなサンプルタイプにわたって使用できるため、人間の健康に関するさまざまな側面を研究している研究者にとっては重要です。これにより、BOOSTは発生生物学から病気メカニズムの調査に至るまで、さまざまな研究に適用できます。

結論

BOOSTは、拡張顕微鏡技術において大きな進展を示しています。マイクロ波照射と革新的なゲル化学を組み合わせることで、研究者は生物サンプルを画像化のために準備する速度と効果を大幅に改善する方法を開発しました。この進歩は、生物プロセスや構造の研究を実験室や臨床応用で強化することを約束します。

科学コミュニティがBOOSTの可能性を探り続ける中で、この技術は顕微鏡や生物研究の分野に持続的な影響を与えることでしょう。改善されたイメージング能力と迅速な処理時間を通じて、BOOSTは発見の新しい道を開き、細胞レベルでの生命理解を深める可能性を秘めています。

オリジナルソース

タイトル: BOOST: a robust ten-fold expansion method on hour-scale

概要: Expansion microscopy (ExM) enhances the microscopy resolution by physically expanding biological specimens and improves the visualization of structural and molecular details. Numerous ExM techniques and labeling methods have been developed and refined over the past decade to cater to specific research needs. Nonetheless, a shared limitation among current protocols is the extensive time required for sample processing, particularly for challenging-to-expand biological specimens (e.g., formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) sections and large three-dimensional specimens). Here, we have developed a rapid and robust ExM workflow named BOOST, which leverages a series of novel microwave (MW)-accelerated ExM chemistry, resulting in a single-step linear expansion of [~]10x. Specifically, BOOST facilitates a [~]10-fold expansion of cultured cells, tissue sections, and even the challenging-to-expand FFPE sections under merely 90 minutes with heat and surfactant-based protein denaturation. Furthermore, BOOST employs microwave-assisted proteomic staining and immunostaining to facilitate high-resolution visualization of structural and molecular details with significantly enhanced throughput. Noteworthily, BOOST has pioneered a [~]10-fold expansion of large millimeter-sized three-dimensional specimens in approximately three hours. BOOST offers an easily adaptable workflow based on stable and common reagents, thus boosting the potential adoption of ExM methods in biological investigations.

著者: Haibo Jiang, J. Guo, H. Yang, C. Lu, D. Cui, M. Zhao, C. Li, W. Chen, Q. Yang, Z. Li, M. Chen, S. Zhao, J. Zhou, J. He

最終更新: 2024-07-16 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.11.603043

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.11.603043.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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