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心筋梗塞のダメージ測定の進展

新しい方法で心筋梗塞後の心臓のダメージ評価が改善された。

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心臓発作のダメージ評価心臓発作のダメージ評価化する。新しい染料が心筋梗塞後の心臓損傷評価を強
目次

心筋梗塞(MI)、つまり心臓発作は、動脈に脂肪がたまることで起こる深刻な状態だよ。この蓄積が血流をブロックして、心臓の筋肉にダメージを与えちゃう。残念ながら、MIは世界中で主な死因の一つなんだ。影響を受けた人を助けるために、研究者たちはMI後の心臓のダメージを治療したり減らしたりする新しい方法に取り組んでる。

医者がMI後の心臓のダメージを評価するとき、通常は梗塞のサイズや影響を受けた心臓の部分を見てるんだ。このサイズを測ることで、どれだけのダメージがあったのか、心臓がどれだけ機能しているのかがわかる。研究で梗塞サイズを測る一般的な方法の一つは、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム塩化物(TTC)という染料を使うこと。これは健康な心臓の組織を赤く染めて、ダメージを受けた組織は白く残るって仕組みなんだ。

エバンスブルーという別の染料と組み合わせることで、心臓発作中にリスクのあった部分も確認できる。このエリアを測るのはすごく重要で、最終的な梗塞のサイズを予測したり、ブロックによって影響を受けた部分を示すのに役立つ。

MI後に時間が経つと、心臓は回復し始めるけど、その過程で傷跡の組織ができることがある。シリウスレッドやマッソンのトリクロームといった染料が、この傷跡の組織を測るために使われる。これらの染料は、傷跡の一部であるコラーゲンというタンパク質を強調して、心臓が時間とともにどのように回復しているのかを理解する手助けをする。

従来の染料に加えて、研究者たちは新しい蛍光染料を使って梗塞や傷跡のエリアをより良く測定しようとしている。例えば、ファロイジンという蛍光染料は、心筋細胞に存在するF-アクチンというタンパク質を特異的に染めることができる。それによって、F-アクチンが欠けている場所を観察することで、ダメージを受けた心臓のエリアを明確に特定できるんだ。

さらに、ウィートジャームアグルチニン(WGA)という別の染料も、心臓の傷跡の組織を特定するのに役立つ。WGAはタンパク質やコラーゲンを染めるので、傷跡がどこにあるのかが簡単にわかる。いくつかの研究では、MIから4週間後にはWGAが傷跡組織をうまくマークするって示されてる。

梗塞や傷跡の正確な測定は、心臓発作の新しい治療法をテストするうえで重要なんだ。適切な染色法を選ぶことで、ダメージの程度や心臓がどのように回復しているかを理解する手助けになる。このレポートでは、従来の染料と新しい方法を比較して、特にファロイジンとWGAに焦点を当てるよ。

動物実験の概要

これらの実験では、心臓発作をモデル化するためにオスのマウスを使用した。マウスは厳しいガイドラインに従って特別にケアされた。MIを誘発する手術の前に、マウスには痛み止めが与えられ、麻酔にかけられた。手術中には、心臓の一部が一時的にブロックされて心臓発作を模擬したんだ。

しばらくしてから、マウスは犠牲にされ、その心臓が分析のために取り出された。心臓はその後、梗塞や傷跡のエリアを評価するためにさまざまな染料で処理された。

染色技術

染色プロセスは心臓組織の準備から始まる。心臓が取り出されたら、クリーンにして、梗塞や傷跡のエリアを可視化するために染料で処理する必要がある。

従来の染料

  1. TTCとエバンスブルー: まず、心臓から余分な組織を取り除いて、主要な動脈を露出させた。その後、エバンスブルーで健康なエリアを染めて、次にTTCでリスクのあったエリア内の生きた組織を強調した。この組み合わせは、ブロックの影響を受けたエリアとまだ生きているエリアを示す。

  2. シリウスレッド、マッソンのトリクローム、ゴモリのトリクローム: これらの染料は、心臓が回復する時間が経った後の傷跡組織を調べるために使用される。コラーゲンの異なる側面を強調し、どれだけ傷跡組織が発達したかを示している。

新しい染料

  1. ファロイジン染色: プロセスは心臓組織の準備から始まる。心臓が準備できたら、ファロイジンで処理され、F-アクチンが intactなエリアを強調する。F-アクチンが欠けている場合、そのエリアがダメージを受けていることを意味する。

  2. ホエシュト染色: この染料は、まだ良好な血流がある組織を強調する。ホエシュトを心臓に注入することで、ブロックの影響を受けていないエリアが簡単に見える。

  3. WGA染色: 心臓はWGAで処理され、回復プロセスが進んでいる後の傷跡エリアを示す。WGAは特にコラーゲンを強調するので、健康な組織と比較して傷跡が簡単に見える。

染色方法の比較

研究者たちは、新しい蛍光法が従来の染料にどれほど匹敵するかを理解しようとしている。

  1. TTCとファロイジンの比較: 両方の方法で測定された梗塞サイズを比較したところ、強い相関関係が見られた。ファロイジンは、ダメージを受けたエリアのサイズを測る点でTTCと同じくらい効果的だった。また、蛍光法でダメージのある組織と健康な組織の境界がより明確に定義できた。

  2. リスクのあるエリアの特定: ホエシュトとファロイジン染色の組み合わせは、TTCよりもリスクのあるエリアをより正確に可視化する新しい方法を提供する。これにより、科学者たちは心臓発作中にどれだけの心筋組織が危険にさらされているかをよりよく理解できる。

  3. コラーゲンの測定: 傷跡サイズを測るのに、WGAは従来の技術の適切な代替品として見つけられた。傷跡組織を従来の染料と同じくらい効果的に特定できるし、蛍光共染色法でも使えるので、追加の研究にも役立つ。

時間経過に伴う回復に関する所見

結果は、MI後に時間が経つにつれて、異なる組織が独自の方法で反応することを示している。

  1. 初期段階(MI後24時間): この段階では、ファロイジンがダメージを受けたエリアを特定するのに適していて、F-アクチンを直接ターゲットにしている。染色がないことは細胞死のエリアを示している。

  2. 中間段階(MI後7日まで): この段階では、コラーゲンが少し形成され始めるものの、まだ密ではない。ファロイジンとWGAの両方が使用できるが、研究者たちはサイズの指標がわずかに異なることに気づき、心臓がまだ修復の状態にあることを示唆している。

  3. 後期段階(28日後): この時点で、より明確な傷跡が形成され、WGAがコラーゲンの量と強い相関関係を提供する。ファロイジンはまだダメージのあるエリアを示すことができるが、WGAはより広い傷跡エリアを特定するのに適していた。

結論

MI後の心臓の梗塞や傷跡のサイズを測定するための異なる染色方法の検討は、良い結果を示している。ファロイジンやWGAのような新しい蛍光法は、特定の点で従来の技術に匹敵するか、それを上回ることができる。これらの進展は、心臓のダメージや回復のより正確な評価につながる。最終的には、研究者たちが治療を洗練させ、研究で使用する動物の数を減らすチャンスを提供することができる。これにより、心臓発作を経験している患者へのより良いケアが実現し、影響を受けた人々の長期的な結果が改善されるんだ。

オリジナルソース

タイトル: Novel fluorescence-based methods to determine infarct and scar size in murine models of reperfused myocardial infarction

概要: BackgroundDetermination of infarct area and scar size following myocardial infarction (MI) is commonly used to evaluate the efficacy of potential cardioprotective treatments in mice and other animal models. MethodsFor both, early and late time points following MI, we compared classical histochemical approaches with fluorescence staining methods. Reperfused MI was induced in male C57BL/6J mice and hearts were extracted 24 hours, 7-, 21-, or 28-days following MI and stained with 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) and Evans Blue, Hoechst, phalloidin, Sirius Red, Massons or Gomoris Trichrome or Wheat Germ Agglutinin (WGA). ResultsFluorescent staining combining Hoechst and phalloidin constitutes an alternative for TTC and Evans Blue, enabling a clear visualization of infarct area, area at risk, as well as remote area unaffected by MI. Infarct size early after reperfusion determined with TTC staining correlates strongly with that demarcated by phalloidin while combination of Hoechst and phalloidin staining can emulate classical TTC/Evans Blue staining 24 h post-MI. Moreover, WGA is equally accurate as the classical Sirius Red, Massons and Gomoris Trichrome stainings in identifying scar size in later phases (>7d) post-MI. Finally, we demonstrate feasibility of combining conventional fluorescence staining by localizing CD45+ leukocytes to specific regions of the infarcted myocardium. ConclusionWe established staining procedure is not inferior to classical TTC staining while providing substantial benefits including the option for unbiased software-assisted analysis while sparing ample residual tissue for additional analyses. Overall, this enhances the data quality and reduces the required animal numbers consistent with the 3R concept of animal experimentation. Graphical abstract O_FIG O_LINKSMALLFIG WIDTH=200 HEIGHT=131 SRC="FIGDIR/small/604384v1_ufig1.gif" ALT="Figure 1"> View larger version (36K): [email protected]@707165org.highwire.dtl.DTLVardef@24b093org.highwire.dtl.DTLVardef@c4ad06_HPS_FORMAT_FIGEXP M_FIG C_FIG

著者: Norbert Gerdes, A. Duplessis, C. Elster, S. Becher, C. Engel, A. Lang, M. Kaldirim, C. Jung, M. Grandoch, M. Kelm, S. Pfeiler

最終更新: 2024-07-24 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.19.604384

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.19.604384.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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