植物ゲノムサイズ推定の進展
新しい方法で植物のゲノムサイズの測定精度が向上。
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ゲノムサイズは植物生物学の重要な側面だよ。植物の染色体の1セットに含まれるDNAの総量を指すんだ。科学者たちは植物の多くの部分を測定できるけど、ゲノム全体のサイズを決定するのはまだ難しいんだ。
昔は、研究者たちはさまざまな技術を使ってゲノムサイズの感覚をつかもうとしてた。顕微鏡観察やさまざまな生化学的アプローチなどが含まれてたけど、これらの初期の方法には限界があった。多くが参照ゲノムと比較する必要があって、特定のケースでは正確さに欠けてたんだ。
技術が進歩するにつれて、新しい方法が登場した。一つの大きな進展が次世代シーケンシング技術だった。この革新により、研究者たちはDNAをさまざまな方法で分析できるようになった、特にk-merと呼ばれるユニークな配列を見ることでね。k-merは短いDNAの配列で、科学者たちはこれらのk-merを分析してゲノムサイズを推定するためのツールを開発した。でも、これらの方法は多くのデータを必要とすることが多くて、それが障害になることもあったんだ。
ロングリードシーケンシングが導入されると、研究者たちはより高品質なゲノムを組み立てる能力を得た。この方法は、以前の技術よりも植物の完全な遺伝的構成をより正確に組み合わせるのに役立つ。でも、核小体やセントロメアの整理に関わるような複雑な植物ゲノムのいくつかの領域は、やっぱり組み立てるのが難しいことが多い。つまり、科学者たちは作成した組み立てに基づいてゲノムサイズを推定できるけど、未解決の領域のせいで本当のゲノムサイズを反映してないかもしれないので慎重にならなきゃいけないんだ。
例えば、最も研究されている植物種の一つであるアラビドプシス・タリアナのゲノムは、これまでの数年間でさまざまな推定があった。初期の予測は幅が広く、最近の完全なゲノム組み立てもサイズの推定に違いがあるんだ。重要なモデル生物だけど、測定方法のバリエーションのせいでそのゲノムの正確なサイズはまだ少し不明確なんだ。
ゲノムサイズの推定を改善するために、MGSE(マッピングベースのゲノムサイズ推定)という新しい方法が導入された。この方法は、DNAリードが植物のゲノムの高品質な組み立てにどれくらいマッピングされるかを分析するためのPythonスクリプトを使うんだ。ゲノムの各部分のカバレッジをチェックすることで、研究者たちは全体のサイズをより良い推定ができるようになるんだ。MGSEの方法にはいくつかのユニークな利点があるよ。短いリードとロングリードの両方で機能するから、さまざまなシーケンシング技術を活用できてk-merデータだけに頼ることもないんだ。
研究者たちは、アラビドプシス・タリアナやビートなどのさまざまなデータセットにMGSEを適用した。この新しい方法をテストする際、彼らはMGSEの結果を古いツールと比較したんだ。その結果、MGSEは特に複雑な植物ゲノムのサイズをより正確に予測できたことがわかったんだ。
アラビドプシス・タリアナのアクセッションのゲノムサイズを評価する際に、MGSEは推定を絞り込むのに効果的だった。さまざまな参照遺伝子や領域を使って、より信頼性のある平均サイズを提供したんだ。他のk-merに基づく方法は大きな変動を示すことが多く、時には誤って低い推定を出すこともあったけど、MGSEはもっと期待されるサイズに近い一貫した範囲を提供したんだ。
その後、研究者たちはMGSEをさらに広げて、さまざまな他の植物にも適用して、柔軟性を示した。例えば、米のゲノムサイズを推定する際、MGSEはイルミナやロングリード技術を含む複数のシーケンシング方法からのデータをうまく扱った。この柔軟性は、異なる種のゲノムサイズ推定の精度を高めるかもしれないんだ。
B. vulgarisのゲノムを見たとき、MGSEはさまざまな品種に基づいてそのサイズを推定した。これらすべてのツールを比較すると、MGSEは文献から知られている以前の推定をよりよく反映する結果を提供する能力で際立っていた。他の既存の方法には欠点があって、実際のゲノムサイズを過小評価するものもあった。
研究全体を通して、アラビドプシス・タリアナ、ビート、米のためにMGSEは常に以前に発表されたデータに基づいた期待されるサイズの範囲に収まる結果を出した。この複雑なゲノムにおいてもゲノムサイズを正確に推定する能力は、MGSEが科学者にとって興味深いツールになるんだ。
信頼できる推定値を提供するだけでなく、MGSEは汚染DNAリードも効率的に処理できるんだ。これにより、植物からの関連遺伝情報だけを考慮することができるから、サンプルにはさまざまなタイプの汚染DNAがあることを考えると重要なんだ。さらに、MGSEはデータの中でサイズ推定を歪める可能性のある重複リードをフィルタリングすることもできる。
これらの良い特性にもかかわらず、ゲノムサイズ推定にはまだいくつかの課題がある。例えば、植物ゲノムの高い繰り返しは、サイズの正確な決定を複雑にすることがある。さらに、ゲノムの異なる領域は異なるカバレッジレベルを示すことがあって、これが過小評価や過大評価につながる可能性もあるんだ。
将来の研究を改善するために、科学者たちはDNAシーケンスのGC含量を考慮する必要があるかもしれない。ここでの変動はシーケンシング結果に影響を与えることがあるから、これを考慮することが推定をさらに洗練する手助けになるかもしれないんだ。
要するに、植物のゲノムサイズを理解することは生物学的研究の多くの分野で重要なんだ。以前の方法が洞察を提供した一方で、MGSEのような新しい技術はもっと正確な推定を提供することに期待が持てる。技術が進化し続ける中で、これらの方法のさらなる改善が期待できるから、科学者が植物の遺伝的世界についての洞察を得るのがもっと簡単になるだろうね。
MGSEの開発と適用は、現代のツールが植物生物学の理解を高める可能性を示してる。研究と技術的進歩が続く中で、植物ゲノム学やさまざまな種のゲノムサイズをより信頼性を持って推定する能力が大きく進展する可能性が高いんだ。
タイトル: Duplexed CeTEAM drug biosensors reveal determinants of PARP inhibitor selectivity
概要: PARP inhibitors (PARPi) predominantly targeting PARP1 and PARP2 have revolutionized cancer therapy by selectively killing cancer cells with defective DNA repair. However, achieving PARP1 or PARP2-selective inhibitors is difficult due to their close structural homology. Selectivity profiling is typically done with purified proteins, but these lack the complexity of intracellular environments and could therefore be inaccurate. Here, we duplex PARP1 L713F-GFP and PARP2 L269A-mCherry CeTEAM drug biosensors to systematically characterize binding and cell cycle alterations of 27 PARPi at the single cell level. Our results reveal that most PARPi are generally equipotent for both PARPs, including the next-generation drug, senaparib. However, benzimidazole carboxamide (niraparib) derivatives demonstrated PARP1-selective tendencies, while pthalazinones (olaparib) favored PARP2. AZD5305, a reported PARP1-selective inhibitor with characteristics of both series, was the exception and appears [~]1600-fold more potent towards PARP1. In agreement with current understanding, we see that PARP trapping phenotypes positively correlate with PARP1/2 binding potency, while some potent binders, such as veliparib, did not - likely reflecting their allosteric influence on DNA retention. We also assessed the effect of the PARP1/2 active site component, HPF1, on intracellular PARPi binding and see that HPF1 depletion elicits slight deviations in apparent binding potency, while contributing additively to PARP-DNA trapping phenotypes. The PARP1/2 CeTEAM platform thus provides a structural roadmap for the development of selective PARPi and should facilitate the discovery of better targeted therapies. Furthermore, our results highlight that multiplexing CeTEAM biosensors and layered genetic perturbations can systematically profile determinants of intracellular drug selectivity.
著者: Nicholas C.K. Valerie, M. J. Pires, A. Lovric, S. Alam, E. Fabbrizi, D. Rotili, M. Altun
最終更新: 2024-10-01 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.08.09.607390
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.08.09.607390.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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