カルシウムセンサーに光を当てる
細胞研究で使われる赤色蛍光カルシウムセンサーの最新の進歩を発見しよう。
Franka H. van der Linden, Theodorus W.J. Gadella Jr., Joachim Goedhart
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目次
生物学や科学の世界では、研究者たちは生きた細胞のさまざまな側面を研究するためのツールを常に探しているんだ。興味深い分野の一つは、細胞がカルシウムという多くの細胞機能にとって必須の要素にどのように対処するかだよ。科学者たちは、カルシウムのレベルが変化すると光る特別なセンサーを作り出していて、細胞の働きについて貴重な洞察を提供しているんだ。その中でも特にワクワクするのは、赤色蛍光タンパク質を使ったセンサーで、特別な照明の下で明るく光るんだ。
赤色センサーの探求
なんで赤色センサーが特に興味深いのか不思議に思うかもしれないね。実は、赤色光にはいくつかの利点があるんだ。まず、赤色光は青や緑の光よりも組織の奥深くまで届くんだ。つまり、科学者たちが細胞や動物の中で何が起こっているかを見たいとき、赤色センサーはよりクリアな画像を提供できるんだよ。逆に、赤色センサーは緑の友達に比べて明るさが少ないから、時々検出が難しいっていう欠点もあるけどね。
蛍光タンパク質の台頭
蛍光タンパク質(FPs)は、特定の波長にさらされると光を放つタンパク質なんだ。細胞内のプロセスを追跡するなど、さまざまな研究アプリケーションにとって重要なんだ。この旅は、すぐに人気を博した黄色蛍光タンパク質から始まった。その後、緑色のバリエーションが登場して、すぐに赤色のバリエーションも仲間入りしたんだよ。
明るさの課題
簡単に言うと、研究者たちは赤色蛍光タンパク質が特長があるものの、明るさが低いために見つけるのが難しいことを発見したんだ。カルシウムセンシングに最も広く使用されている赤色蛍光タンパク質はmAppleと呼ばれるもので、学校の「人気者」みたいな存在で、多くのセンサーで使われていて、科学者たちがカルシウムが細胞内でどう振る舞うかを見るのを助けているんだ。他にもmRubyやmCherryなどのタンパク質も登場したけど、時にはその身分を混同してしまうこともあったよ。
明るいアイデア:mScarlet
最近、科学者たちはさらに明るい赤色蛍光タンパク質を開発しているんだ。mScarletシリーズはその一例で、このタンパク質は早く成熟し、高い量子収率を持っているから、明るさに優れているんだ。研究者たちは、mScarletファミリーのバリエーションを使うことでカルシウムセンサーにカラフルな進展があると信じているんだ。
明るさと寿命
ここからちょっと複雑になるけど、これらのセンサーの明るさだけが考慮されるわけじゃないんだ。科学者たちは、蛍光タンパク質がどれくらいの時間、興奮した状態にとどまるかを測る蛍光寿命というものも見ているよ。この特性は、研究者たちに細胞内で何が起こっているかをより詳細に見る手助けをしてくれるんだ。
より良いセンサーの探求
より良いセンサーを目指して、研究者たちはさまざまなmScarletの候補を作り、異なる条件でその蛍光寿命をテストしているんだ。驚くべきことに、いくつかのセンサーはカルシウムが存在しないときに鈍くなることが分かったんだ。鈍いのは大きな問題とは思えないかもしれないけど、細胞の挙動における微妙な変化を測ろうとすると、すべての光が大事なんだよ。
興味深い試験
研究者たちは新しいmScarletセンサーでテストを行い、いくつかは期待できる結果を示したんだ。特定のセンサーのバリエーションがカルシウムのレベルに応じて明るさを変えることができることを発見したんだ。この変化は重要で、科学者たちがカルシウムが細胞に入っているか出ているかを見つけるのを助けるんだ。
突然変異の助け
これらのセンサーをさらに良くするために、科学者たちは突然変異導入を行ったんだ、つまり、タンパク質のDNAを意図的に変えることをして、明るさを向上させたり寿命のコントラストを改善したりするんだ。そして、なんとこれらの突然変異体の中にはかなり明るいものもあって、カルシウムの変化の測定がより良くできるようになったんだ!
比率プラスミド
でも、完璧なセンサーを求める探求はここで終わらなかったよ。科学者たちは、新しいプラスミドを作ったんだ。これは蛍光タンパク質を運ぶ小さなDNAの断片なんだ。このプラスミドはpFRと呼ばれ、細菌と哺乳類細胞の両方で機能するように設計されているんだ。これによって、研究者たちは異なるセンサーを直接比較できて、どのセンサーが一番効果的かを見ることができるんだよ。
HeLa細胞とその役割
HeLa細胞は細胞生物学のロックスターで、これらの研究で多くの実験に使われたんだ。この細胞は急速に成長する能力で有名で、研究に広く使われているんだ。HeLa細胞で赤色センサーをテストすることで、科学者たちは生きた環境でこれらのセンサーがどのように機能するかを見ることができるんだ、これは新しい発明の究極のテストだよ!
寿命の詳細な観察
研究者たちはHeLa細胞でこれらのセンサーを研究する際、蛍光寿命を詳しく測定して、さまざまな条件でセンサーがどのように反応するかを見ようとしたんだ。彼らはカルシウムを追加したり、カルシウムの入り口を助ける分子であるイオノマイシンを使ったりして、センサーがどのように反応するかを観察したんだ。
明るさと性能の比較
研究者たちは自分たちの突然変異センサーを以前に発表された赤色カルシウムセンサーと比較したいと考えていたんだ。それをするために、彼らはそれぞれのセンサーがどれくらい明るいかだけでなく、カルシウムのレベルが変わったときに明るさがどれだけ変わるかも見たんだ。この比較によって、どのセンサーがリアルタイムで細胞の挙動を観察するのに最も便利かを判断できるようになったんだ。
大きなカルシウムの議論
センサーを比較する中で、科学者たちは興味深いトレンドに気付いたんだ。ラボ条件で優れたパフォーマンスを示したセンサーが、生きた細胞では期待通りに振る舞わなかったんだ。この不一致は、生きた細胞の複雑さによるものかもしれないね、これはセンサーの機能に影響を与えることがあるからね。
将来の方向性
いくつかの課題があるものの、研究者たちはこれらの赤色カルシウムセンサーの可能性について楽観的なんだ。彼らは、これらのデザインをさらに洗練させて、カルシウムの変化に対してもっと明るく、敏感にできるようにするつもりなんだ。測定プロセスの自動化や哺乳類細胞テストに取り組むことで、細胞生物学の新しい発見につながるかもしれないね。
結論
というわけで、赤色カルシウムセンサーの世界への深掘りがここにあるよ。研究者たちがこれらの素晴らしい小さなタンパク質を通じて細胞の挙動の謎を解き明かしていく中で、彼らがどんな新しい洞察を発見するのか、楽しみに待とう!科学がこんなに明るいなんて、誰が想像しただろうね?
オリジナルソース
タイトル: Exploration of mScarlet for development of a red lifetime sensor for calcium imaging
概要: The past decades, researchers have worked on the development of genetically encoded biosensors, including over 60 genetically encoded calcium indicators (GECIs) containing a single fluorescent protein (FP). Red fluorescent GECIs provide advantages in terms of imaging depths and reduced cell toxicity. Most of GECIs respond with a fluorescence intensity change, and researchers have strived to improve the sensors in terms of brightness and fold-change. Unfortunately, fluorescence intensity is influenced by many factors other than the desired sensor response. GECIs with a fluorescence lifetime contrast overcome this drawback, but so far, no bright red GECI has been developed that shows a fluorescence lifetime contrast. We tried to tackle this challenge by using the brightest red fluorescent proteins from the mScarlet family to develop a new sensor. We did succeed in creating remarkable bright probes, but the fluorescence lifetime contrast we observed in bacterial lysates was lost in mammalian cells. Based on our results, and the success of others to develop a pH and a voltage sensor of mScarlet, we are confident that a GECI with mScarlet is feasible. To this end, we propose to continue development using a mammalian cell-based screening, instead of screening in bacterial lysates.
著者: Franka H. van der Linden, Theodorus W.J. Gadella Jr., Joachim Goedhart
最終更新: 2024-12-23 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.22.628354
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.22.628354.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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