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Édition du génome chez les moutons : Une nouvelle approche

Des chercheurs utilisent l'électroporation et CRISPR pour modifier les gènes des moutons afin d'améliorer leur croissance.

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L'édition génomique, c'est une technique qui peut changer le patrimoine génétique des animaux, y compris les animaux d'élevage comme les moutons et les bovins. Une méthode populaire, c'est la technologie CRISPR, qui est appréciée pour sa capacité à faire des changements précis dans l'ADN. Tandis que les méthodes traditionnelles, comme la microinjection, coûtent souvent cher et nécessitent des travailleurs qualifiés, l'Électroporation propose un moyen plus rapide et plus efficace de faire ça.

C'est quoi l'électroporation ?

L'électroporation fonctionne en utilisant des impulsions électriques pour rendre les membranes cellulaires plus perméables. Ça permet d'introduire des matériaux génétiques dans les cellules, comme les composants CRISPR. En appliquant cette technique aux zygotes, qui sont les tout premiers stades des embryons, les scientifiques peuvent augmenter les chances de créer des animaux avec les changements génétiques souhaités. Des recherches montrent que l'électroporation peut donner des taux de mutation élevés et réduire le risque de mosaïcisme, où toutes les cellules ne portent pas le même changement génétique.

Importance de SOCS2 chez les moutons

Un des cibles pour l'édition génomique chez les moutons, c'est le gène SOCS2. Ce gène joue un rôle dans la régulation de la croissance et du métabolisme. Des études ont montré que désactiver ce gène peut entraîner des taux de croissance accrus. Par exemple, chez les souris, l'absence de SOCS2 résulte en tailles corporelles plus grandes et en poids plus lourds. Alors, modifier le gène SOCS2 chez les moutons pourrait potentiellement donner des animaux qui grandissent plus vite et plus efficacement.

Aperçu de l'étude

Dans cette étude, les chercheurs ont voulu créer des moutons qui n'ont pas le gène SOCS2 en utilisant l'électroporation. Ils ont produit des zygotes à partir d'œufs et de sperme de moutons dans des conditions de laboratoire. Après la fécondation, ils ont introduit deux ARN guides spécifiques et des composants CRISPR dans les zygotes six heures plus tard grâce à l'électroporation. L'objectif était de créer des moutons avec des mutations dans le gène SOCS2 qui entraîneraient sa désactivation.

Production d'embryons

Pour commencer, les chercheurs ont collecté des ovaires de moutons et ont récolté les complexes cumulus-oocyte. Ils ont ensuite fait mûrir ces œufs dans un environnement contrôlé pour les préparer à la fécondation. Après la maturation, les œufs ont été fécondés avec du sperme dans des conditions spécifiques pour créer des zygotes.

Processus d'électroporation

Après la fécondation, les zygotes ont été électroporés pour introduire les ARN guides et les composants CRISPR nécessaires. Les chercheurs ont utilisé des paramètres électriques spécifiques pour s'assurer que le processus était efficace. Après l'électroporation, les embryons ont été autorisés à se développer jusqu'au stade de blastocyste avant d'être transférés à des mères porteuses.

Transfert aux brebis porteuses

Treize brebis porteuses ont été préparées pour recevoir les embryons. Elles ont été synchronisées pour l'élevage afin de s'assurer qu'elles étaient prêtes à accepter les embryons au bon moment. Après avoir confirmé que les portes étaient enceintes par échographie, les chercheurs ont surveillé la santé des embryons.

Génotypage des agneaux

Une fois les agneaux nés, ils ont subi un test génétique appelé génotypage pour déterminer si le gène SOCS2 avait été effectivement modifié. Ce test consistait à amplifier des régions spécifiques de l'ADN qui entourent le gène ciblé. Les chercheurs étaient particulièrement intéressés à savoir si le gène avait été désactivé et dans quelle mesure.

Résultats de l'étude

Sur les treize brebis porteuses, un total de six agneaux est né. Parmi eux, trois ont survécu jusqu'à 20 semaines. L'analyse génétique a montré que tous les agneaux modifiés avaient des mutations dans le gène SOCS2. Cependant, les mutations spécifiques variaient considérablement entre les agneaux, avec des suppressions importantes observées qui n'étaient pas la suppression de 85 paires de bases prévue.

Ces changements inattendus soulignent la complexité de l'édition génomique et la nécessité d'une analyse approfondie après la modification. Les chercheurs ont trouvé qu'une partie significative de ces mutations était indétectable par des méthodes traditionnelles comme la PCR et le séquençage de Sanger, qui sont couramment utilisées dans les études génétiques.

Effets hors cible

Une préoccupation majeure dans l'édition génomique, c'est la possibilité d'effets hors cible, où des changements indésirables se produisent dans d'autres parties du génome. Les chercheurs ont cherché des sites hors cible potentiels en analysant des régions avec de légères discordances par rapport aux séquences guide. Ils ont identifié de nombreux sites candidats mais n'ont trouvé aucune preuve significative que des mutations hors cible se produisaient, ce qui suggère que leur approche pourrait être sûre.

Impact sur la croissance

Les chercheurs ont observé que les moutons dépourvus du gène SOCS2 avaient des augmentations notables de poids et de taux de croissance par rapport aux moutons témoins. À 20 semaines, les agneaux modifiés étaient beaucoup plus lourds que les témoins. Cela s'aligne avec les résultats observés chez d'autres espèces et suggère que le gène SOCS2 joue un rôle majeur dans la régulation de la croissance.

Applications potentielles

Cette étude montre les avantages potentiels d'utiliser l'électroporation et la technologie CRISPR pour améliorer la génétique des animaux d'élevage. La capacité d'augmenter les taux de croissance chez les moutons pourrait avoir des implications économiques substantielles pour l'industrie agricole. Des animaux qui grandissent plus rapidement pourraient réduire les coûts de production et améliorer la sécurité alimentaire.

Conclusion

En résumé, la recherche a illustré avec succès l'utilisation de l'électroporation pour l'édition génique chez les moutons. En désactivant le gène SOCS2, les scientifiques ont créé des agneaux avec un potentiel de croissance accru. Bien qu'il reste des défis à relever, notamment pour comprendre les effets complets de ces modifications génétiques, les résultats sont prometteurs pour l'élevage et l'ingénierie génétique futurs. Les techniques utilisées dans cette étude pourraient ouvrir la voie à des méthodes plus efficaces et efficientes pour améliorer les caractéristiques des animaux d'élevage dans les années à venir.

Source originale

Titre: Efficient Generation of SOCS2 Knock-out Sheep by Electroporation of CRISPR-Cas9 Ribonucleoprotein Complex with Dual-sgRNAs.

Résumé: Knock-out (KO) sheep were produced using CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein complexes in zygotes targeting an 85 bp section of the first exon of the Suppressor of Cytokine Signalling-2 (SOCS2) gene. Electroporation was performed 6 hours post-fertilization with dual-guide CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins (RNPs). Fifty-two blastocysts were transferred to 13 estrus-synchronized recipients, yielding five live lambs and one stillborn. These lambs were all compound heterozygotes with mutations predicted to result in SOCS2 KO. Three lambs carried large deletion alleles (259 bp, 1694 bp, and 2127 bp) that evaded initial detection via initial PCR screening. Off-target analysis identified a small number of mutations which may have been the result of off-target activity in regions with some homology to the guides, but notably such mutations were also observed in unedited controls. Further, we observed several orders of magnitude more mutations outside of these regions of homology in both edited animals and controls. Western blot and RT-PCR analysis of cell lines from SOCS2 KO lambs showed trace levels of SOCS2 mRNA and SOCS2 protein. In conclusion, combining IVF and electroporation of dual-guide CRISPR-Cas9 RNPs was effective at generating KO sheep.

Auteurs: Alison Louise Van Eenennaam, A. K. Mahdi, D. S. Fitzpatrick, D. E. Hagen, B. R. McNabb, T. Urbano, W. M. Muir, N. Werry, J. F. Medrano, P. J. ROSS

Dernière mise à jour: 2024-07-01 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.30.601433

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.30.601433.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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