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Nouvelle technologie de puce pour la détection de la leishmaniose

Un outil de diagnostic prometteur pour la leishmaniose montre un potentiel pour des tests efficaces.

Ke Du, R. Peng, H. Yuqing, T. J. Wiggins, N. Bahadori, S. J. Dollery, J. Waitkus, J. Rogers, Y. Chen, G. J. Tobin

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Table des matières

La leishmaniose est une maladie grave causée par un petit parasite appelé Leishmania. Ce parasite se propage chez les humains par la piqûre de mouches de sable infectées. Ça peut être mortel, classé juste après le paludisme en termes de décès dus aux maladies parasitaires. La maladie touche surtout les gens dans des zones pauvres avec un accès limité aux soins de santé, la malnutrition et des systèmes immunitaires affaiblis.

Il y a trois types principaux de leishmaniose :

  1. Leishmaniose cutanée (LC) - Affects la peau et peut causer des plaies.
  2. Leishmaniose viscérale (LV) - Également connue sous le nom de kala-azar, affecte les organes internes et est la forme la plus dangereuse.
  3. Leishmaniose mucocutanée (LM) - Affects les muqueuses et peut entraîner des complications graves si elle n'est pas traitée.

La LM peut causer des dégâts sérieux dans des zones comme le nez ou la bouche, et si elle est laissée sans traitement, ça peut être fatal.

Importance de la détection précoce

Détecter la leishmaniose tôt est super important, surtout là où les ressources sont limitées. Une intervention médicale rapide peut aider à empêcher la propagation de la maladie. La LV peut être diagnostiquée grâce à des signes et des tests spécifiques, mais les tests pour la LC et la LM dépendent souvent des symptômes et de tests de confirmation, qui peuvent parfois être inexactes.

Des avancées récentes comme la réaction en chaîne par polymérase (PCR) offrent une précision améliorée, mais ces méthodes sont souvent trop complexes ou nécessitent un équipement coûteux, ce qui les rend inadaptées à de nombreuses zones.

Avancées dans la technologie de diagnostic

Pour trouver de meilleures méthodes de diagnostic, un nouvel outil appelé le système CRISPR-Cas12a attire l'attention. Cette méthode est connue pour sa précision dans la détection des séquences d'ADN. Elle utilise un petit morceau d'ARN pour cibler et couper de l'ADN spécifique, qui peut ensuite générer un signal indiquant la présence du parasite. Cet outil fonctionne à une température stable, éliminant le besoin de cycles de température compliqués.

En associant le système CRISPR à une technique appelée amplification isotherme, qui peut rapidement augmenter la quantité d'ADN dans un échantillon, les tests peuvent devenir beaucoup plus efficaces. Cette combinaison peut donner un méthode de détection très sensible qui est facile à utiliser et ne nécessite pas d'électricité.

Développement de la puce MFAST

Notre recherche introduit une nouvelle puce de diagnostic appelée la puce MFAST, conçue spécifiquement pour détecter les espèces de Leishmania. Cette puce permet de tester simultanément plusieurs types de parasites Leishmania sans contamination croisée.

La puce est conçue de manière à ce que divers fluides puissent y circuler facilement, grâce à plusieurs traitements de surface. Ces améliorations rendent la puce plus efficace pour transporter des liquides et aident à prévenir les fuites.

Processus de fabrication

La puce MFAST débute comme un noyau imprimé en 3D fait d'un matériau appelé ABS. Ce noyau subit un traitement à la vapeur qui lisse toutes les surfaces rugueuses laissées par l'impression. Après le lissage, un mélange de silicone est versé sur le noyau pour créer la structure de la puce. Une fois la puce formée, le noyau en ABS est dissous, laissant les canaux et chambres nécessaires pour les tests.

Amélioration des performances

Pour s'assurer que les fluides circulent efficacement à travers la puce, les chercheurs appliquent différents traitements :

  1. Lissage à la vapeur - Ce processus donne une surface brillante qui aide les liquides à mieux circuler, augmentant l'efficacité d'environ 10 %.
  2. Revêtement NeverWet - Ce revêtement rend les surfaces hydrofuges, réduisant significativement les fuites de plus de 20 %.
  3. Traitement au plasma - Ce traitement améliore la surface pour optimiser le flux des liquides.

Méthode de test

Pour utiliser la puce MFAST, certains réactifs sont chargés dans différentes chambres. Ces réactifs aident à amplifier l'ADN du parasite cible. Le processus commence lorsque l'échantillon est ajouté, initiant des réactions qui permettent une détection facile du parasite basée sur des signaux visuels.

Après la réaction, une lumière bleue est utilisée pour rendre les signaux visibles, permettant à l'utilisateur de voir les résultats sans avoir besoin d'équipement compliqué.

Résultats des tests

Dans les premiers tests, on a trouvé que la puce MFAST avait une grande sensibilité et spécificité pour détecter le parasite L. panamensis, même quand il est présent en très faible quantité. Le design de la puce permet de réaliser des tests positifs et négatifs en même temps, ce qui est un gros progrès par rapport aux méthodes précédentes.

En utilisant une combinaison de réactifs spécifiques, la puce peut distinguer efficacement les différents types de Leishmania. Dans les tests, les signaux de fluorescence générés étaient de clairs indicateurs de la présence de certaines espèces, rendant facile la confirmation des résultats sans confusion.

Avantages de la puce MFAST

La puce MFAST offre plusieurs avantages importants pour diagnostiquer la leishmaniose :

  1. Test simultané : Elle peut tester plusieurs espèces de Leishmania en même temps, ce qui la rend efficace.
  2. Fiabilité améliorée : Le design minimise le risque de contamination, garantissant que les résultats sont fiables.
  3. Coût réduit : Les matériaux et méthodes utilisés pour créer la puce sont rentables, ce qui la rend accessible dans des contextes à ressources limitées.
  4. Portabilité : La puce nécessite peu d'équipement pour fonctionner, n'ayant besoin que d'outils basiques comme un coussin chauffant et une source de lumière.

Stabilité des réactifs

Pour rendre la puce MFAST facile à utiliser, les réactifs utilisés pour les tests ont été lyophilisés, ce qui garantit qu'ils restent stables et faciles à transporter. Lorsqu'ils ont été testés, ces réactifs ont continué à bien fonctionner et sont restés efficaces pendant jusqu'à 15 jours lorsqu'ils sont correctement stockés.

Directions futures

Bien que la puce MFAST actuelle soit prometteuse, des améliorations futures pourraient inclure :

  • Créer des microstructures à l'intérieur de la puce pour améliorer encore le transport des fluides.
  • Ajuster la taille des canaux pour s'assurer que les liquides sont répartis uniformément dans toutes les zones de test.

Ces avancées pourraient aider à augmenter l'efficacité de la puce, en faisant un outil encore plus précieux pour diagnostiquer la leishmaniose dans des conditions difficiles.

Conclusion

La puce MFAST pourrait changer la donne pour diagnostiquer la leishmaniose, surtout là où les méthodes de test traditionnelles sont impraticables. En intégrant la technologie moderne avec un design simple, cette puce pourrait considérablement améliorer la détection et la réponse aux infections parasitaires, améliorant les résultats de santé pour les populations vulnérables à travers le monde. Au fur et à mesure que la recherche se poursuit et que d'autres innovations sont réalisées, l'objectif de fournir des outils de diagnostic fiables, accessibles et efficaces pour la leishmaniose et d'autres maladies similaires devient de plus en plus atteignable.

Source originale

Titre: Multi-Channel Funnel Adapted Sensing Tube (MFAST) for the Simple and Duplex Detection of Parasites

Résumé: Leishmaniasis poses a significant global health threat, infecting millions of people annually, particularly in tropical and subtropical regions. Timely and accurate detection of Leishmania species is crucial for effective treatment and control of this debilitating disease. This study introduces the Multi-channel Funnel Adapted Sensing Tube (MFAST) chip, an innovative diagnostic tool designed for the rapid detection of Leishmania panamensis. MFAST is fabricated through 3D printing and sacrificial molding of acrylonitrile butadiene styrene (ABS) and the reagents are transported between the reservoirs by gravity. We combine experiments and finite element analysis to reduce the leaking issues and facilitate smoother fluid flow, improving the overall performance of the device. Highly sensitive and specific RPA-CRISPR/Cas12a assay is utilized in the chip, achieving a detection limit as low as 1,000 parasites/mL (detecting as few as 5 parasites per reaction). The multi-channel design enables duplex detection, allowing for simultaneous identification of both L. braziliensis and L. panamensis through distinct channels. Furthermore, stability tests indicate that lyophilized reagents retain functionality for up to 15 days when stored at 4 {degrees}C, underscoring the potential of this chip for practical diagnostic applications in low-resource settings.

Auteurs: Ke Du, R. Peng, H. Yuqing, T. J. Wiggins, N. Bahadori, S. J. Dollery, J. Waitkus, J. Rogers, Y. Chen, G. J. Tobin

Dernière mise à jour: 2024-10-22 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.19.619249

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.19.619249.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

Merci à biorxiv pour l'utilisation de son interopérabilité en libre accès.

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