Avanços nas Técnicas de Imagem da Medula Espinhal
Novos métodos de imagem iluminam as interações das células da medula espinhal e o fluxo sanguíneo.
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Índice
Avanços recentes nas técnicas de imagem tornaram possível observar atividades na medula espinhal de camundongos vivos. Isso levou a uma melhor compreensão dos comportamentos das células relacionados à saúde e doença. Um foco importante tem sido como as células neurais e as células imunológicas interagem, especialmente durante doenças e lesões.
Técnicas de Imagem na Medula Espinhal
Uma técnica popular de imagem na medula espinhal se chama fluorescência excitada por dois fótons (2PEF). Esse método permite que os pesquisadores vejam as células em detalhes. No entanto, tem suas limitações. Um grande problema é que só consegue fazer imagens eficazes até cerca de 150 micrômetros de profundidade na medula. Essa restrição ocorre devido ao empacotamento denso de Axônios mielinizados, que dispersa a luz, dificultando a visualização mais profunda do tecido.
Os pesquisadores também usam janelas de imagem crônicas para permitir observações de longo prazo sem causar danos excessivos ao tecido. Essas janelas possibilitam estudos de diferentes áreas da medula espinhal, incluindo regiões superficiais e algumas partes mais profundas. Para ver áreas mais internas, os pesquisadores costumam usar métodos invasivos, que podem ser complicados e arriscados.
Diferenças nas Áreas da Medula Espinhal
Diferentes partes da medula espinhal têm funções distintas e são afetadas de maneiras diferentes pelas doenças. Por exemplo, o corno dorsal lida principalmente com informações sensoriais e dor. Para estudar os circuitos que controlam o movimento, os pesquisadores precisam penetrar mais fundo na medula. Além disso, como as células respondem a lesões varia entre as camadas, tornando importante estudar várias áreas.
Avançando nas Técnicas de Imagem
Para superar as limitações do 2PEF, os pesquisadores começaram a usar a fluorescência excitada por três fótons (3PEF). Essa técnica avançada usa comprimentos de onda de luz mais longos, o que ajuda a reduzir a dispersão. Essa capacidade aumentada permitiu que os cientistas vissem mais fundo na medula espinhal, alcançando profundidades de imagem de cerca de 550 micrômetros. Isso abre novas possibilidades para estudar vários processos celulares na medula.
O Estudo dos Vasos Sanguíneos na Medula Espinhal
Usando 3PEF, os cientistas podem observar a estrutura complexa dos vasos sanguíneos na medula espinhal. Eles conseguiram capturar imagens do fluxo sanguíneo, incluindo como o sangue se move através de diferentes tipos de vasos. Ao focar nas redes de arteríolas e vênulas, os pesquisadores podem entender como a circulação sanguínea apoia a saúde da medula espinhal.
Os pesquisadores descobriram que a velocidade do fluxo sanguíneo varia dependendo do tamanho dos vasos. As arteríolas tendem a mostrar velocidades de fluxo mais altas à medida que seu diâmetro aumenta, enquanto as velocidades de fluxo nas vênulas são menos variáveis. Compreender essa dinâmica ajuda os pesquisadores a conhecer mais sobre como a medula espinhal é nutrida e como seu suprimento sanguíneo reage em diferentes condições.
Efeitos do Bloqueio dos Vasos
Uma área crucial de pesquisa envolve observar o que acontece quando um vaso sanguíneo na medula espinhal é bloqueado. Usando a imagem 3PEF, os cientistas podem ver os efeitos imediatos nas estruturas neurais e como as células respondem a essas lesões. Eles descobriram que quando uma vênula superficial é ocluída, os axônios próximos começam a inchar e se degradar ao longo do tempo.
Durante esse processo, as células imunológicas do corpo, especificamente as microglia, começam a reagir. Essas células desempenham um papel crucial na manutenção da saúde do sistema nervoso. Elas migram em direção às áreas lesionadas, mudam de forma e podem até invadir os vasos sanguíneos. Esse comportamento indica que as microglia estão ativamente envolvidas na resposta à lesão, potencialmente afetando quão bem a medula espinhal pode se recuperar.
Entendendo a Degeneração Neural
Quando os pesquisadores analisaram como os neurônios mudam após um bloqueio, observaram uma série de mudanças. Inicialmente, os neurônios parecem intactos, mas rapidamente começam a inchar. Eventualmente, muitos deles se degradam completamente. Esse processo não é uniforme; camadas mais profundas na medula espinhal parecem apresentar degeneração mais rápida, possivelmente devido a uma maior suscetibilidade a danos.
Observando Interações das Microglia
Um aspecto importante da pesquisa é estudar como as microglia interagem com os vasos sanguíneos durante a lesão. Após um bloqueio, as microglia tendem a se mover em direção às áreas afetadas. Elas primeiro fazem contato com as paredes dos vasos, e algumas podem até invadir o lúmen do vaso sanguíneo. Essa invasão está associada ao vazamento de componentes do sangue para o tecido ao redor, indicando um potencial dano à barreira sangue-medula espinhal.
A Complexidade da Imagem da Medula Espinhal
A imagem na medula espinhal continua desafiadora devido à sua estrutura complexa e às propriedades ópticas dos tecidos. A substância branca, que é rica em axônios mielinizados, dispersa a luz e complica a imagem em profundidade. No entanto, o uso do 3PEF mostrou promessas em superar esses problemas, permitindo imagens mais claras com menos ruído de fundo.
Considerações e Tecnologias Futuras
Os pesquisadores continuam a aprimorar as técnicas de imagem para melhorar sua capacidade de olhar fundo na medula espinhal. Desenvolvimentos recentes em ótica adaptativa foram introduzidos para ajudar a corrigir problemas causados pela dispersão da luz. Isso pode levar a uma melhor resolução e potencialmente descobrir atividades celulares adicionais que são difíceis de observar com os métodos atuais.
Implicações para a Saúde e Doença
As descobertas desses estudos fornecem informações importantes sobre como a medula espinhal responde a diferentes desafios de saúde. Elas enfatizam a necessidade de entender a dinâmica celular durante lesões e recuperações. Ao explorar esses processos em tempo real, os cientistas esperam encontrar novas maneiras de abordar lesões na medula espinhal e condições relacionadas.
Conclusão
A imagem in vivo da medula espinhal de camundongos é uma ferramenta poderosa que permite aos pesquisadores observar processos relacionados à saúde e à doença. Usando técnicas de imagem avançadas como o 3PEF, os cientistas conseguem examinar como as células se comportam em resposta a lesões, como o sangue flui pelos vasos e como as células imunológicas interagem com o sistema nervoso. Essa pesquisa traz promessas para melhorar nossa compreensão da saúde da medula espinhal e desenvolver tratamentos potenciais para várias condições.
Título: Three-photon excited fluorescence microscopy enables imaging of blood flow, neural structure and inflammatory response deep into mouse spinal cord in vivo
Resumo: Nonlinear optical microscopy enables non-invasive imaging in scattering samples with cellular resolution. The spinal cord connects the brain with the periphery and governs fundamental behaviors such as locomotion and somatosensation. Because of dense myelination on the dorsal surface, imaging to the spinal grey matter is challenging, even with two-photon microscopy. Here we show that three-photon excited fluorescence (3PEF) microscopy enables multicolor imaging at depths of up to ~550 m into the mouse spinal cord, in vivo. We quantified blood flow across vessel types along the spinal vascular network. We then followed the response of neurites and microglia after occlusion of a surface venule, where we observed depth-dependent structural changes in neurites and interactions of perivascular microglia with vessel branches upstream from the clot. This work establishes that 3PEF imaging enables studies of functional dynamics and cell type interactions in the top 550 m of the murine spinal cord, in vivo.
Autores: Chris B Schaffer, Y.-T. Cheng, K. M. Lett, C. Xu
Última atualização: 2024-04-06 00:00:00
Idioma: English
Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.04.588110
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.04.588110.full.pdf
Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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