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マートルラスト株を検出する新しい方法

研究者たちは、マートルラストの菌株を効果的に特定する診断ツールを開発した。

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マートルラスストレインの検マートルラスストレインの検するのを助ける。新しいツールが有害な真菌株を効率よく特定
目次

マートルラストは、アウストロプッキニア・プシディイという名前の真菌が引き起こす病気だよ。この真菌は、ユーカリやグアバなどのよく知られた種を含むマートル科の480以上の異なる植物に影響を与えるんだ。この真菌は世界中の植物にとってトップの脅威とされていて、特にオーストラリアやニュージーランドのようにマートル植物が広がっている国々では、生態系や産業に深刻な被害を与える可能性があるのが大きな懸念なんだ。

アウストロプッキニア・プシディイの歴史

この真菌は1884年にブラジルで最初に発見されたんだ。長い間、主にアメリカ大陸に留まっていたけど、最終的にはヨーロッパや南極を除くすべての大陸に広がったんだ。オーストラリアでは、2010年に初めてこの真菌が検出されたんだけど、そこで見つかった株はパンデミックバージョンで、自然エリアや商業林にとって重要なリスクとなっているんだ。例えば、ユーカリの木はこの真菌の影響で23%から35%の体積を失うことがあるんだ。

症状と病気の広がり

アウストロプッキニア・プシディイは、影響を受けた植物に目立つ症状を引き起こすよ。最初のサインは葉に小さな黄色い斑点ができることで、これが明るいオレンジ色の膿胞に発展することもあるんだ。この膿胞はスポアを放出して、他の植物に感染させるから、早期発見と制御がすごく重要になるんだ。

早期発見の重要性

マートルラストの存在を早期に特定することはめっちゃ重要だよ。これによって広がりを防いだり、被害を制限したりできるんだ。現在の病原菌診断方法には、特別なマーカーやqPCRという技術を使った方法があるんだけど、ただちょっと問題があって、このテストのために選ばれたDNA領域は異なる株を区別するにはあまり多様性がないんだ。その結果、アウストロプッキニア・プシディイの異なる株の検出と特定を改善するための新しい方法が必要なんだ。

真菌の交配を理解する

真菌の交配はちょっと複雑で、交配型(MAT)ローカスと呼ばれる特定の遺伝子が関わってるんだ。アウストロプッキニア・プシディイのようなさび病真菌には、二つの異なるローカスがあって、一つは交配に役立つ遺伝子を含み、もう一つは真菌の成長や発達を制御するんだ。この遺伝子は、真菌の繁殖とライフサイクルを決定するのに重要なんだ。

研究によると、アウストロプッキニア・プシディイでは、交配の適合性は主に二つの遺伝子ともう一つの遺伝子によって制御されてるんだ。つまり、異なる株が成功裏に交配できる能力は、これらの特定の遺伝的マーカーに依存しているってことだよ。

研究の目的

この研究の目的は、アウストロプッキニア・プシディイのさまざまな株を検出して特定するための非常に効果的な方法を作ることだったんだ。これによって既存のアウトブレイクを監視するだけでなく、新しい株が影響を受けていない地域に入るのを防ぐこともできるんだ。研究者たちは真菌のDNAの交配に関わる特定の部分に焦点を当てて、これがより良い検出方法につながることを期待してたんだ。

プライマー設計と方法論

この研究の目的を達成するために、研究者たちはアウストロプッキニア・プシディイの異なる株のDNAの重要な領域を特定したんだ。それから、ターゲット領域に結合できる短いDNAの断片である特定のプライマーを設計したんだ。これによって、テスト中にこれらの領域を増幅することができるようになるんだ。プライマーは、真菌に関する以前の遺伝情報に基づいて作られたんだ。

プライマーは、既知の株やさまざまなフィールドサンプルなど、別のソースからのサンプルを使って徹底的にテストされたんだ。DNAは標準的な方法を使ってスポアや感染した植物材料から抽出され、その品質がテストに適しているか確認されたよ。

PCRテスト

最初のテストでは、ターゲット株のDNAを増幅するのを助けるPCRという技術が使われたんだ。これによって、プライマーが効果的に機能して、ターゲットの真菌と他の類似種の区別ができるかを確認したんだ。結果は、プライマーがターゲット株から期待されるDNAセグメントを増幅したけど、無関係な種からは増幅されなかったことを示しているんだ。これで特異性が確認されたんだ。

二回目のテストでは、研究者たちはフィールドから集めたさらなるサンプルや単一スポアの分離株を見てたんだ。彼らは同じPCR方法を使ってさまざまなサンプルからDNAを増幅し、ターゲット真菌の存在を確認したんだ。

シーケンシングと分析

詳しい分析のために、研究者たちはオックスフォード・ナノポア・テクノロジーズという、長いDNA配列を読み取ることができる方法を利用したんだ。この先進的な技術が、真菌の遺伝的構成をよりよく理解するのに役立ったんだ。彼らは特定のガイドラインに従ってDNAサンプルのライブラリを準備して、それからサンプルをシーケンシングしてDNAを読み取ったんだ。

データが正確であることを確認するために、彼らはシーケンシング結果を質とターゲット遺伝子に関連する特定の長さに基づいてフィルタリングしたんだ。このフィルタリングプロセスは、さらなる分析に使用するために最も信頼できるDNA配列のみを確保するのに役立ったんだ。

株の多様性に関する発見

研究者たちは、アウストロプッキニア・プシディイの異なる株が明確な遺伝的変異を示すことを発見したんだ。増幅されたDNA配列を分析することで、オーストラリアやブラジルなどの異なる地域からの株がユニークな遺伝的マーカーを持っていることを確認したんだ。この変異は、特定の株を識別し、その起源を理解するのに重要なんだ。

結果は、非パンデミック株は、パンデミック株と比較して四つのアレルのうち一つだけ遺伝的な類似性を持っていることを示しているんだ。この発見は、異なる株が遺伝的な構成に基づいて簡単に区別できるという考えをさらに支持しているんだ。

診断アッセイの開発

研究の結果に基づいて、研究者たちはアウストロプッキニア・プシディイの交配型ローカスに焦点を当てた新しい診断テストを確立したんだ。このテストは、さまざまな株を迅速かつ正確に特定できるようにするんだ。サンプルからの遺伝情報を既知の配列と比較することで、新株が地域に入るのを特定できるんだ。

このアッセイは、集団間の遺伝的変化や再結合を検出する可能性もあって、これはこの病気の広がりを追跡したり制御するのに重要かもしれないんだ。

結論

この研究はアウストロプッキニア・プシディイの異なる株を特定するための診断ツールを成功裏に開発したんだ。これはマートルラストのアウトブレイクを管理するのに重要なんだ。彼らの方法は、さまざまなサンプルにおいて真菌のより迅速かつ正確な検出を可能にし、新しいアウトブレイクを防ぐのに役立つんだ。研究が続く中で、さらに検出プロセスを改善することができると思うよ。この発見は、この病原体がどのように振る舞うか、そして自然の生態系や産業を守るためにどのように管理できるかを理解するために大いに貢献するんだ。

オリジナルソース

タイトル: Mating-compatibility genes employed as diagnostic markers to identify novel incursions of the myrtle rust pathogen Austropuccinia psidii

概要: Austropuccinia psidii is the causal agent of myrtle rust in over 480 species within the family Myrtaceae. Lineages of A. psidii are structured by host in its native range, and some have success on new-encounter hosts. For example, the pandemic biotype has spread beyond South America, and proliferation of other lineages is an additional risk to biodiversity and industries. Efforts to manage A. psidii incursions, including lineage differentiation, relies on variable microsatellite markers. Testing these markers is time-consuming and complex, particularly on a large scale. We designed a novel diagnostic approach targeting the fungal mating-type HD (homeodomain) transcription factor locus to address these limitations. The HD locus (bW1/2-HD1 and bE1/2-HD2) is highly polymorphic, facilitating clear biological predictions about its inheritance from founding populations. To be considered the same lineage, all four HD alleles must be identical. Our lineage diagnostics relies on PCR amplification of the HD locus in different genotypes of A. psidii followed by amplicon sequencing using Oxford Nanopore Technologies (ONT) and comparative analysis. The lineage-specific assay was validated on four isolates with existing genomes, uncharacterized isolates, and directly from infected leaf material. We reconstructed HD alleles from amplicons and confirmed their sequence identity relative to their reference. Genealogies using HD alleles confirmed the variations at the HD loci among lineages/isolates. Our study establishes a robust diagnostic tool, for differentiating known lineages of A. psidii based biological predictions. This tool holds promise for detecting new pathogen incursions and can be refined for broader applications, including air-sample detection and mixed-isolate infections.

著者: Benjamin Schwessinger, J. Feng, A. Bird, Z. Luo, R. Tam, L. Shepherd, L. Murphy, L. Singh, A. Graetz, M. Moeller, L. Amorim, N. S. Massola Junior, M. A. Prodhan, L. Shuey, D. Beattie, A. T. Gonzalez, P. A. Tobias, A. Padovan, R. Kimber, A. McTaggart, M. Kehoe, T. R. Boufleur

最終更新: 2024-02-28 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.19.580897

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.19.580897.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

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