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# 生物学# 生化学

新しいタンパク質ケージが細胞イメージングを改善する

研究者たちは、細胞内のタンパク質をよりよく視覚化するためのタンパク質カゴを作ってるんだ。

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細胞内でのタンパク質の配置を時間をかけて観察することは、タンパク質の働きや細胞活動における役割を理解するのに重要なんだ。タンパク質の場所を知ることで、科学者たちはがんみたいな病気の新しい治療法を見つける手助けができる。細胞内のタンパク質を見る方法はいくつかあるけど、一般的な方法の一つが蛍光顕微鏡で、特別な光を使ってタンパク質を可視化するんだ。ただ、この方法はタグ付けされたタンパク質しか見れないし、細部がはっきり見えないこともある。別の技術であるクライオ電子トモグラフィーは、よりクリアな画像を提供するけど、通常は大きなタンパク質群にしか使えない。細胞の忙しい空間でタンパク質を見つけるのが難しいからね。

これらの方法を改善するために、研究者たちは特別なタンパク質のケージを作って、細胞内のタンパク質を特定する手助けをしているんだ。このケージは、複数のタンパク質の部分から作られた小さな中空構造で、簡単に組み合わせられる。その他の分子を保持したり、表面にタンパク質を表示させるためにデザインできるから、イメージングにとても役立つ。

タンパク質ケージとは?

タンパク質ケージは、研究者が特定の方法で振る舞うように設計できるナノ構造なんだ。生きた細胞にとって安定して安全なようにデザインされてる。ケージは異なるタンパク質に取り付けるようカスタマイズできるから、以前は特定しにくかったタンパク質を可視化する手段になる。これは、タンパク質を遺伝子操作したり化学物質を加えたりせずに、細胞内のタンパク質を研究する際に特に便利なんだ。

この研究では、ケージが一般的な蛍光タンパク質であるGFPに結合できるように特別にデザインされたタンパク質に繋がれている。これにより、ケージを使って細胞内のタンパク質がどこにあるかを特定できるようになるんだ。

タンパク質ケージの作り方

このタンパク質ケージを作るために、科学者たちはまず、ケージを作る方法を細胞に指示する2種類の遺伝子を作ったんだ。それを細菌に導入して、細菌がケージに必要なタンパク質成分を生産するようにした。タンパク質を分離した後、希望するケージの形に組み立てた。そして、明るい蛍光マーカーでケージにラベルを付けて、見やすくしたんだ。

特別な技術を使ってケージを精製して、正しく形成されているか確認した。サイズ排除クロマトグラフィーを使って、組み立てプロセス中に作成された異なるサイズの粒子を分けることができた。

タンパク質ケージのテスト

このタンパク質ケージを作った後、科学者たちはそれを人間のHEK-293T細胞という一般的に使われる細胞に導入できるかテストしたんだ。研究者たちはリポフェクションという方法を使って、ケージを細胞に導入する手助けをした。ケージが細胞に入り込むことができて、既に細胞に存在しているGFPタンパク質に結合できることを観察したんだ。

リポフェクションで使用するタンパク質ケージの量を調整することで、より多くのケージがより多くの明るいスポットを生んで、細胞内への成功した導入を示していることがわかった。これらの明るいスポットは、細胞内のタンパク質の場所に関する貴重な情報を提供してくれる。

タンパク質の相互作用を可視化

タンパク質ケージが細胞内で機能できるかを見るために、研究者たちはそれがGFPにどれだけ結合できるかを調べた。ケージをGFPを発現している細胞に挿入した時、ケージがGFPタンパク質と結合していることを示す明るい蛍光スポットを見つけた。これで、ケージが細胞に成功裏に入り込んで、ターゲットタンパク質と相互作用していることが確認できたんだ。

研究者たちはさらに、このケージが細胞内の特定のタンパク質を見つけて結合できるかテストした。GFPでタグ付けされたミトコンドリアタンパク質MFN1を導入した後、蛍光ケージをこれらの細胞に追加すると、ケージが細胞内のエネルギーを生産する構造であるミトコンドリア上のMFN1タンパク質を特定できたことを観察した。

タンパク質ケージの特異性

結合が特異的であることを確認するために、研究者たちはGFPと似ているが同一ではない別のタンパク質、mNeonGreenを使ってケージをテストした。このタンパク質はケージと相互作用しないはずだ。mNeonGreenタンパク質を発現する細胞にケージを導入した時、結合が見られなかったことで、ケージがGFPを特異的にターゲットにしていることが確認できたんだ。

タンパク質ケージの応用

このタンパク質ケージを使った研究は、タンパク質とその行動をリアルタイムで細胞内で研究する新しい方法を示している。これにより、特定のタンパク質にターゲットを絞った治療法を提供することで、病気の治療が向上するかもしれない。たとえば、修正されたケージが特定のタンパク質を発現している細胞に直接薬を運ぶことができれば、副作用を減らし、治療効率を高めるのに役立つかもしれない。

研究者たちは、今後の研究でさまざまな方法でこのケージを応用することを希望している。タンパク質を自然な環境で可視化する能力は、その機能や治療目的での操作方法を理解するために重要なんだ。

結論

このようにデザインされたタンパク質ケージの開発は、細胞内のタンパク質を研究するための有望な方法を示している。この研究は、ケージが安全に細胞に導入され、特定のターゲットタンパク質に特異的に結合し、高度な顕微鏡技術を用いて効果的に可視化できることを示しているんだ。細胞イメージングやタンパク質相互作用のための新しいツールを提供することで、研究者たちは生物学や病気のメカニズムについてより深い洞察を得られる。今後、さまざまな科学分野でこのタンパク質ケージのさらなる応用の可能性が広がっているんだ。

オリジナルソース

タイトル: Designed fluorescent protein cages as fiducial markers for targeted cell imaging

概要: Understanding how proteins function within their cellular environments is essential for cellular biology and biomedical research. However, current imaging techniques exhibit limitations, particularly in the study of small complexes and individual proteins within cells. Previously, protein cages have been employed as imaging scaffolds to study purified small proteins using cryo-electron microscopy (cryo-EM). Here we demonstrate an approach to deliver designed protein cages - endowed with fluorescence and targeted binding properties - into cells, thereby serving as fiducial markers for cellular imaging. We used protein cages with anti-GFP DARPin domains to target a mitochondrial protein (MFN1) expressed in mammalian cells, which was genetically fused to GFP. We demonstrate that the protein cages can penetrate cells, are directed to specific subcellular locations, and are detectable with confocal microscopy. This innovation represents a milestone in developing tools for in-depth cellular exploration, especially in conjunction with methods such as cryo-correlative light and electron microscopy (cryo-CLEM).

著者: Roger Castells-Graells, M. Gee, K. Atai, H. A. Coller, T. O. Yeates

最終更新: 2024-03-02 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.28.582585

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.28.582585.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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