植物ゲノム工学のためのウイルスデリバリーの進展
研究者たちは、植物ウイルスを使って遺伝子導入方法を進化させ、作物の特性を向上させている。
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目次
ゲノムエンジニアリングは、科学者が植物の遺伝物質を修正することを可能にするプロセスだよ。この技術には、病気への抵抗力や栄養価の向上など、作物の特性を改善する可能性があるんだ。しかし、科学者たちは、これらの変更を行うために必要なツールを提供する際に課題に直面している。大きな問題の一つは、これらのツールを植物細胞に安定して届けることなんだ。
ウイルスを使った遺伝子の配達
遺伝子ツールを届ける課題を克服するために、研究者たちは植物ウイルスに目を向けている。このウイルスは、必要な遺伝成分を運んで植物全体を移動できるんだ。不要な遺伝子をサイレンシングしたり、新しいタンパク質を発現させたりするために使えるよ。ウイルスを使うと、通常の方法に比べて時間と労力を節約できるけど、伝統的な方法はしばしば無菌環境での複雑な手続きを必要とするよ。
でも、ウイルスを使うことにはいくつかの欠点もある。特定の種類の植物にしか効果がなかったり、感染した植物に有害な症状を引き起こしたり、植物のすべての部分に効果的に到達できなかったりすることがあるんだ。例えば、成長に重要なメリステムにウイルスを届けるのは難しいことがあるよ。さらに、多くのウイルスには運べる遺伝物質の量に制限があって、この制限を超えると正しく機能しなくなることもあるんだ。
ウイルス配達システムの最近の進展
最近、研究者たちは遺伝子編集ツールを植物に届けるための新しいウイルスベクターを作成する進展を遂げたよ。一部の研究では、科学者たちはいくつかの異なる植物ウイルスを使って、Cas9やガイドRNAなどの遺伝子編集のための成分を成功裏に届けたんだ。しかし、これらの方法ではまだ無菌手続きを通じて植物を再生させる必要があったよ。
一方で、タバコラトルウイルスや大麦縞モザイクウイルスのようなメリステムに侵入できるウイルスが、さまざまな植物にガイドRNAを届けるのに成功したよ。これらの方法は通常、トランスジェニック植物に依存していて、大きなタンパク質を届けるのには適さないかもしれないね。
サイト特異的リコンビナーゼ:新しいツール
ゲノムエンジニアリングにおけるもう一つの重要なツールは、サイト特異的リコンビナーゼ(SSR)と呼ばれるものだよ。SSRは、植物のゲノムの特定の場所でDNAの断片を取り除いたり挿入したりすることができるんだ。これにより、不必要な遺伝子を取り除いたり、複数の有益な特性を積み重ねたりすることができるよ。
過去の研究では、研究者たちは植物ウイルスを使ってトランスジェニック植物に特定のSSR、Creリコンビナーゼを成功裏に届けたことがあるけど、これらの方法でも感染した組織からの再生が必要だったし、植物に遺伝的に受け継がれる変化を一貫してもたらすことはできなかったんだ。
タバコラトルウイルスの探求
この研究では、科学者たちはSSRを届けるツールとしてタバコラトルウイルス(TRV)を使うことに焦点を当てたよ。TRVにはいくつかの利点がある:広範囲の植物に感染できて、軽い症状を引き起こし、種を通じてウイルスを受け渡すことなく一時的にメリステムに侵入できるんだ。研究者たちは、組み換えが起こると色が変わる特別なレポータ遺伝子を持つ新しい植物系統を作成して、ウイルス配達の効果を追跡できるようにしたよ。
遺伝子スイッチの設計
チームは、TRV感染のターゲットとして機能する一連の遺伝子構造を設計したよ。これらの構造は、成功した組換え時に除去できるマーカーを含むように慎重に作られた。もし組換えが行われれば、植物は目に見える色の変化を示すことになって、成功した遺伝子改変を示すことになるよ。
彼らは、Creリコンビナーゼのためのさまざまな認識部位を使って異なる構造を作ったんだ。そして、トランスジェニックラインを生成して、TRVを使って感染させた。研究者たちは、色の変化が成功した組換えによるものであり、時間が経つにつれて信号が植物全体に広がったことを確認したよ。
ウイルスの動きを監視する
ウイルスが植物内でどのように移動するかを追跡することもこの研究の重要な目標だったよ。研究者たちは、色の変化が最初に茎で起こり、その後植物の他の部分に広がったことを観察した。これはウイルスが植物組織を通じて通常どのように移動するかと一致しているよ。この追跡によって、ウイルスが根や生殖器官に到達できることがわかり、遺伝的な修正が受け継がれる可能性を持っていることが示されたんだ。
受け継がれる修正を作成する
重要な目標の一つは、植物に遺伝的な変化を受け継がせることだった。研究者たちは、感染した植物の子孫を調べて、修正が持続するかどうかを確認したよ。すべての感染した植物が成長するわけではなく、植物の生存能力にいくつかの課題があったよ。
それでも、感染した植物の多くの子孫が望ましい色の変化を示し、成功した組換えイベントがあったことを示していたよ。全体的に、データはTRVを使ったウイルスによる配達が、植物に受け継がれる変化をもたらすことが頻繁にできることを示唆していたんだ。
表現型欠陥への対処
研究者たちは、Creリコンビナーゼを使うと、植物の成長や発達に悪影響が出ることがあることに気づいたよ。多くの植物が成長不良や他の異常を示したんだ。代替手段を検討するために、FLPやCinHなどの他のSSRを使ってみたんだけど、これらは同じ問題を引き起こさないかもしれないね。
研究者たちは、これらの追加のSSRを使っても同様の実験を行ったよ。彼らは、他のリコンビナーゼも効果的に組換えを引き起こすことができることを発見したんだ。これにより、代替リコンビナーゼを使うことで植物の全体的な健康や生存能力を改善できるかもしれないことが示されたよ。
ツールボックスの拡大
研究者たちは、TRVを使った新しいウイルス配達方法が効果的で、複数のタイプのリコンビナーゼを届けることができることを示すことができた。これにより、植物におけるゲノムエンジニアリングの新しい可能性が開かれて、遺伝子の積み重ねや合成遺伝子回路の作成など、より複雑な修正が可能になったんだ。
結論
この研究を通じて、研究者たちはウイルスを使って植物に遺伝子ツールを届けるより効果的な方法を開発して、ゲノムエンジニアリングの分野を進展させたよ。彼らはまた、視覚的なレポータシステムを通じてウイルス感染を追跡できることを示したんだ。これが将来のウイルスベクターを最適化するのに役立つかもしれないね。
これらの研究結果は、以前の方法で見られた欠点なしに植物に受け継がれる変化をもたらす可能性を強調しているよ。科学者たちがこれらの技術を探求し、洗練し続けることで、改善した特性を持つ作物を開発する道を切り開くかもしれなくて、農業生産性を向上させたり、世界的な食糧安全保障に取り組む助けになるかもしれないね。
タイトル: Viral delivery of recombinases to activate heritable genetic switches in plants
概要: Viral vectors provide an increasingly versatile platform for transformation-free reagent delivery to plants. RNA viral vectors can be used to induce gene silencing, overexpress proteins, or introduce gene editing reagents, but they are often constrained by carrying capacity or restricted tropism in germline cells. Site-specific recombinases that catalyze precise genetic rearrangements are powerful tools for genome engineering that vary in size and, potentially, efficacy in plants. In this work, we show that viral vectors based on Tobacco rattle virus (TRV) deliver and stably express four recombinases ranging in size from [~]0.6kb to [~]1.5kb, and achieve simultaneous marker removal and reporter activation through targeted excision in transgenic Nicotiana benthamiana target lines. TRV vectors with Cre, FLP, CinH, and Integrase13 efficiently mediated recombination in infected somatic tissue, and also led to heritable modifications at high frequency. An excision-activated Ruby reporter enabled simple and high-resolution tracing of infected cell lineages, without the need for molecular genotyping. Together, our experiments broaden the scope of viral recombinase delivery, and offer insights into infection dynamics that may be useful in the development of future viral vectors.
著者: Daniel Voytas, J. C. Chamness, J. P. Cody, A. J. Cruz
最終更新: 2024-03-05 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.03.583219
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.03.583219.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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