新しい統合型顕微鏡が生物イメージングを向上させる
コンパクトなセットアップで、ソフトX線と蛍光顕微鏡を組み合わせて、サンプル分析がより良くなるんだ。
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相関顕微鏡法は、さまざまな撮影技術を組み合わせて、特に生物学のサンプルをよりよく見るための方法だよ。よく使われる技術の一つが蛍光顕微鏡で、特別なマーカーでタグ付けされたサンプルの特定の部分を強調してくれるんだ。これで生物学的プロセスがどう働いているかはわかるけど、サンプル全体の構造を完全には見せてくれない。そこで登場するのがソフトX線顕微鏡。これだとラベルなしで詳細な構造情報が得られるんだ。
ソフトX線顕微鏡は、水のような素材を貫通できる特別な光の範囲を使うから、生物サンプルにとってすごく便利だよ。この方法は、サンプルの構造をよりクリアに見せながら、蛍光顕微鏡がそれらの構造がどう機能するかを示してくれます。ほとんどのソフトX線顕微鏡は大きくて、通常はシンクロトロンと呼ばれる大きな光源が必要なんだけど、新しい技術によって普通のラボでも使える小型の顕微鏡が作りやすくなったんだ。
この記事では、ソフトX線顕微鏡と蛍光顕微鏡を統合した新しいコンパクトなセットアップについて話している。この革新的なデバイスは、研究者がサンプルを動かさずに機能的な画像と構造的な画像の両方をキャッチできるようにしている。これでサンプルが壊れにくくなって、画像取得のプロセスも速くて効率的になるんだ。
相関顕微鏡法の必要性
さまざまな撮影方法は、サンプルについて異なる種類の情報を提供してくれる。研究者が何かを詳細に研究したいとき、複数の方法を使うのはすごく役立つんだ。例えば、蛍光顕微鏡は生命科学で広く使われていて、細胞内の特定の分子の画像を作ることができる。特に新しいスーパー解像技術の発展で効果的だよ。
でも、蛍光顕微鏡には限界がある。ラベル付けされた部分しか見えないから、いくつかの構造が見逃される可能性があるんだ。それを克服するために、ソフトX線顕微鏡のような補完的な方法を使えるんだ。この方法だと、ラベルなしでサンプル全体の構造をキャッチできる。
ソフトX線顕微鏡を使うと、研究者は高い詳細でサンプルを視覚化でき、蛍光画像では見逃されるかもしれない構造的な特徴に焦点を当てることができる。両方の方法の組み合わせで生物サンプルの分析がもっと豊かになるんだ。
統合型セットアップの仕組み
新しい統合顕微鏡は、ソフトX線と蛍光撮影コンポーネントを一つのコンパクトなユニットに組み合わせている。これで研究者はサンプルを一台の装置から別の装置に移動させる必要がなくなるから、サンプルが壊れたり状態が変わったりすることが少なくなるんだ。サンプルをそのままに保つことで、一貫した撮影条件が維持されて、両方の方法で撮られた画像の相関を簡単に保てるんだ。
顕微鏡は、水のウィンドウとして知られる特別な範囲のソフトX線で動作する。この範囲だと、生物サンプルをX線の吸収を最小限に抑えて撮影できるから、良いコントラストが得られる。統合された蛍光顕微鏡がサンプルを照らして、特定のラベル付けされた成分が光を放つようにして、その光をイメージングシステムがキャッチするんだ。
一緒にこのセットアップを使うことで、研究者は蛍光顕微鏡で興味のあるエリアをすぐに見つけてから、ソフトX線撮影に切り替えて構造の詳細をキャッチできる。このシームレスな移行で、全体のイメージングプロセスがより効果的で情報豊かになるんだ。
関与する主要技術
ソフトX線顕微鏡
ソフトX線顕微鏡は、X線を使って非常に小さなスケールのサンプルの画像を作る。普通のレンズを使う代わりに、回折を利用するフレネルゾーンプレートという装置に頼っているんだ。ソフトX線は空気中で急速に吸収されるから、真空で動作する。イメージングに必要なソフトX線光を作るために、レーザーをガスターゲットに向けて照射して、必要なX線フォトンを生成するんだ。
このセットアップで使う特定の波長は特に重要で、水のウィンドウ内に収まっているから、生物サンプルの効果的なイメージングが可能なんだ。楕円形の鏡がX線を集めてフォーカスし、サンプルに向けて送る。
蛍光顕微鏡
蛍光顕微鏡は、特別な光を使ってサンプル内のラベル付けされた分子を興奮させる。これらの分子が興奮すると、異なる波長の光を放出するから、研究者はサンプル内の特定の成分の画像をキャッチできる。統合された蛍光顕微鏡は、サンプルにLEDライトを照らして、フィルターが励起光と放出された蛍光を分離するんだ。
この統合型セットアップのために、蛍光顕微鏡はソフトX線顕微鏡と並ぶように設計されている。これでサンプルを動かさずに同時に撮影できるから、構造的なイメージングと機能的なイメージングの間で素早い切り替えができるんだ。
統合アプローチの利点
ソフトX線と蛍光顕微鏡を一つのセットアップで組み合わせることで、いくつかの重要な利点が得られるよ:
サンプルの整合性の保持: サンプルを移動させないことで、変化や損傷のリスクが最小限に抑えられる。
迅速なイメージングプロセス: 研究者は蛍光を使って興味のあるエリアをすぐに特定し、その後ソフトX線顕微鏡で高解像度の構造画像をキャッチできる。
強化されたイメージング能力: 統合することで、多色蛍光イメージングの可能性が生まれ、サンプルについての追加情報を提供する。
コンパクトなデザイン: このラボベースのセットアップは、従来のシンクロトロンベースのシステムよりも小型で、より多くの研究施設がアクセスしやすくなっている。
生物学研究への応用
この統合顕微鏡は、ナノ粒子から生細胞まで、さまざまな生物サンプルを研究するのに特に役立つ。機能的な詳細と構造的な詳細の両方を見る能力が、研究者が生物プロセスについて結論を導き出す能力を高めるんだ。
例1: 蛍光ナノ粒子
新しいセットアップの能力をデモするために、研究者はまず蛍光ナノ粒子を使ってテストした。この粒子は、励起されると光を放つように設計されていて、簡単に撮影できる基板の上に置かれたんだ。蛍光画像は粒子の明確な信号を提供し、ソフトX線画像は機能データを補完する構造的な詳細を明らかにしたんだ。
例2: シアノバクテリア
光合成を行う細菌であるシアノバクテリアも別のテストサンプルとして選ばれた。彼らのクロロフィル含量によって蛍光を放つから、蛍光顕微鏡に適しているんだ。統合セットアップを使うことで、研究者はシアノバクテリアの構造を視覚化し、その配置や相互作用を観察することで、これらの生物についての理解を深めることができた。
例3: 細胞培養
この統合顕微鏡は、NIH-3T3やCOS-7細胞のような哺乳類の細胞培養にも効果的だよ。異なる蛍光マーカーを使って細胞の特定の成分を染色して、核や細胞骨格のような構造を詳細に観察できるようにした。ソフトX線イメージングは、全体的な細胞形態についての追加情報を提供し、細胞の行動をより深く理解するのを助けるんだ。
光毒性の調査
このセットアップのもう一つの重要な機能は、蛍光染料に対するX線放射の影響を研究する能力だよ。研究者は、ソフトX線光にサンプルをさらしたときに蛍光の強度が時間とともにどう変化するかを測定できる。この情報は貴重で、異なる蛍光染料がX線曝露に対してどれだけ回復力があるかを判断するのに役立つし、将来のイメージング戦略に役立つんだ。
結論
ソフトX線と蛍光顕微鏡の統合は、生物学研究のための強力なツールを提供するよ。構造的な特徴と機能的な特徴を同時に撮影できることで、このコンパクトなシステムは複雑な生物サンプルを研究する研究者の能力を高める。サンプルの整合性を保ちながら、イメージングプロセスを迅速化する利点が、このセットアップを特に価値のあるものにしているんだ。
イメージング技術とサンプル準備方法の両方が改善され続ける中で、この統合顕微鏡は生物プロセスの理解を大きく進展させ、新しい科学の発見の道を開く可能性があるよ。
タイトル: Laboratory-Based Correlative Soft X-ray and Fluorescence Microscopy in an Integrated Setup
概要: Correlative microscopy is a powerful technique that combines the advantages of multiple imaging modalities to achieve a comprehensive understanding of investigated samples. For example, fluorescence microscopy provides unique functional contrast by imaging only specifically labeled components, especially in biological samples. However, the achievable structural information on the sample in its full complexity is limited. Here, the intrinsic label-free carbon contrast of water window soft X-ray microscopy can complement fluorescence images in a correlative approach ultimately combining nanoscale structural resolution with functional contrast. However, soft X-ray microscopes are complex and elaborate, and typically require a large-scale synchrotron radiation source due to the demanding photon flux requirements. Yet, with modern high-power lasers it has become possible to generate sufficient photon flux from laser-produced plasmas, thus enabling laboratory-based setups. Here, we present a compact table-top soft X-ray microscope with an integrated epifluorescence modality for 'in-situ' correlative imaging. Samples remain in place when switching between modalities, ensuring identical measurement conditions and avoiding sample alteration or destruction. We demonstrate our new method by multimodal images of several exemplary samples ranging from nanoparticles to various multicolor labeled cell types. A structural resolution of down to 50 nm was reached.
著者: Julius Reinhard, Sophia Kaleta, Johann Jakob Abel, Felix Wiesner, Martin Wünsche, Eric Seemann, Martin Westermann, Thomas Weber, Jan Nathanael, Alexander Iliou, Henryk Fiedorowicz, Falk Hillmann, Christian Eggeling, Gerhard G. Paulus, Silvio Fuchs
最終更新: 2023-10-02 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://arxiv.org/abs/2304.14413
ソースPDF: https://arxiv.org/pdf/2304.14413
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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