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トロンビン検出のためのDNAベースのハイドロゲル

DNAアプタマーを使った新しいハイドロゲルで、効率的なトロンビンセンサー。

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トロンビンセンシングのためトロンビンセンシングのための高度なハイドロゲル、診断方法を向上させるよ。新しいハイドロゲルがトロンビンを検出して
目次

DNAベースのハイドロゲルは、DNAから作られた特別な材料で、いろんなセンサー技術で使えるんだ。これらのハイドロゲルは、DNAの特有の性質を活かしてて、安定性やプログラム可能性、自己組織化が特徴。つまり、科学者たちはDNAを使って、特定の物質を検出できる小さなデバイスやシステムを作れるってわけ。

DNAの特別なところ

DNAにはこれらの材料で多くの役割を果たすための特定の特徴がある。重要なのは、環境の変化に反応できるDNAのさまざまな形、いわゆるDNAモチーフ。iモチーフ、Aモチーフ、アプタマーが含まれてる。アプタマーは特定の分子、たとえばタンパク質を認識して結合する短いDNAの断片で、センサーアプリケーションにとってめっちゃ便利なんだ。

トロンビン検出の必要性

医療の分野では、トロンビンのような特定のタンパク質のレベルを検出することがめっちゃ大事。トロンビンは血液が固まるのを助ける重要な酵素で、トロンビンに関する問題は過剰出血や危険な血栓などの深刻な健康問題につながる可能性がある。

今のトロンビンを検出する方法は高くて複雑で、訓練を受けた人や特別な設備が必要なことが多い。だから、トロンビンのレベルを正確に測るためのシンプルでコスト効果の高い方法が必要なんだ。

新しいハイブリッドハイドロゲルの作成

この課題に取り組むために、研究者たちはDNAアプタマーをMXeneっていう材料と組み合わせた新しいハイブリッドハイドロゲルを開発した。MXeneは電気を通す二次元の材料で、センサー作成にすごく魅力的なんだ。

この新しいハイドロゲルでは、MXeneが電気的特性を提供し、DNAアプタマーがセンサーとして機能する。トロンビンが存在すると、アプタマーに結合して、ハイドロゲルの構造が変化する。この構造の変化を測定することで、トロンビンを検出できる。

トロンビン検出の仕組み

このハイブリッドハイドロゲルは、DNAアプタマーがMXeneに付着することでネットワークを形成して動作する。このネットワークは安定していて、良好な電気信号を伝えるんだ。だけど、トロンビンが加わると、アプタマーが形を変えて、その相補的な鎖から外れる。このネットワークの中断は抵抗の変化として測定できる。

検出システムのステップ

  1. 材料の準備: 最初にMXeneシートをMAX相という出発材料から作る。特定の元素を取り除くために化学的な方法を使ってシートを得る。

  2. 機能化: MXeneシートをDNAアプタマーと結合できるように改造する。これは特定の化学物質を使って反応性のある表面を作ることを含む。

  3. アプタマーの取り付け: その後、MXeneシートにDNAアプタマーを取り付ける。このステップは、アプタマーがトロンビンに結びつくからめっちゃ重要。

  4. トロンビンの結合: すべてが整ったら、ハイブリッドハイドロゲルをテストできる。トロンビンを加えると、アプタマーに結びついてハイドロゲルの構造が変わる。

  5. 変化の測定: 最後のステップは、ハイドロゲルの抵抗の変化を測定する。この測定でトロンビンの量がわかるんだ。

実験設定

ハイブリッドハイドロゲルを作るには、いくつかの化学物質と材料が必要。プロセスには、分光光度計を使って実験のさまざまな段階で材料の特性を分析するなど、いろんな実験室技術が使われる。

使用された材料

  • オリゴヌクレオチド: 短いDNAの鎖をサプライヤーから購入。

  • トロンビン: 実験に適した人間の血漿から得られた。

  • ハイドロゲル形成に必要な化学物質: ハイドロゲルを作ったりMXeneシートを改造するためにいろんな化学物質を使った。

特性評価の技術

ハイブリッドハイドロゲルの形成と特性を確認するためにいろんな技術が使われた:

  • 分光法: 材料の化学組成や相互作用を特定するのに役立つ。

  • 顕微鏡: 高度なイメージング技術を使ってハイドロゲルの構造を可視化した。

  • 導電性テスト: トロンビンを加える前後でハイドロゲルがどれだけ電気を通すかを測定するテスト。

結果と観察

出来上がったMXene-DNAハイドロゲルはトロンビンを検出するのに効果的だとわかった。トロンビンがあると、測定可能な構造変化が起きた。

構造の変化

トロンビンが加わる前は、ハイドロゲルは密でコンパクトな構造だった。トロンビンを導入した後、構造はゆるくて不明確になり、DNA鎖の間の結合が壊れたことを反映している。この構造の変化はハイドロゲルの電気抵抗に直接影響した。

トロンビンレベルのキャリブレーション

トロンビンのレベルを定量するために、研究者たちは知られた濃度のトロンビンを含む溶液を準備して抵抗の変化を測定した。これらの測定値をグラフにプロットしてキャリブレーションカーブを作り、血液サンプル内の未知のトロンビンレベルを推定できるようにした。

特異性のテスト

検出システムがトロンビンに特異的であることが重要だった。これを確認するために、研究者たちはハイドロゲルを別のタンパク質であるブタ血清アルブミン(BSA)でテストした。結果は、BSAは抵抗に大きな変化を与えなかったので、ハイドロゲルがトロンビンに特異的に反応していることが確認された。

トロンビン検出を超えた応用

今回の研究はトロンビンに焦点を当ててるけど、ハイブリッドハイドロゲルを作成するために使った技術や原則は、他の多くの物質を検出するのにも応用できる。DNAアプタマーを変更することで、このシステムはさまざまなバイオマーカーや化学物質を感知するように適応できる。

結論

このハイブリッドハイドロゲルの開発は、コスト効果が高く、感度が良く、選択的なセンサー機器の作成に向けた重要なステップを表している。DNAとMXeneを組み合わせることで、研究者たちは医療や生物学のさまざまな応用の新しい扉を開いた。これらの技術は、多くの健康状態の診断やモニタリングの改善に期待が持てる。

この技術が、健康や環境モニタリングに欠かせない重要な分子を検出する新しくて効率的な方法につながる可能性があるってのは、すごくワクワクするね。

オリジナルソース

タイトル: 2D MXene-DNA Hybrid Hydrogel for Thrombin Detection: A Versatile Approach for Biomedical Sensing

概要: The delaminated MXene (2D MXene) and DNA hydrogel created enormous opportunities due to their versatility and ability to be tailored for specific applications. MXene offers high aspect ratio morphology and electrical conductivity, while DNA provides stimuli responsiveness and specificity in binding to ligands or complementary sequences. This synergy makes DNA an ideal actuator when combined with 2D MXenes. Present work makes the first effort to combine and exploit them for detecting the thrombin levels; a crucial proteolytic enzyme that plays a pivotal role in regulating blood clotting by cleaving fibrinogen into fibrin and plays a critical role in bleeding disorders such as Haemophilia and Von Willebrand disease. This study introduces a novel hybrid DNA hydrogel by leveraging the properties of 2D MXene with a thiol-modified thrombin binding aptamer (TBA) as a crosslinking agent. The TBA and its complementary DNA oligos are immobilized on 2D MXene sheets, forming a packed hydrogel. Upon thrombin binding, the TBA releases its complementary DNA, resulting in a loosened hydrogel and a change in resistance, which is used as a read-out for thrombin detection. The concept is successfully demonstrated, achieving 90-92% accuracy in detecting thrombin in artificial samples. This robust technique holds promise for biomedical sensing devices, allowing customization for the detection of various target molecules using specific aptamers.

著者: Chinmay Ghoroi, V. MORYA, D. D. Bhatia

最終更新: 2024-04-28 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.24.590924

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.24.590924.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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