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# 生物学# 細胞生物学

新しいプローブがアクチンフィラメントの組織を明らかにする

研究者たちが生きている細胞のアクチンの構造を可視化するためのプローブを開発した。

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アクチンフィラメントの可視アクチンフィラメントの可視織が明らかになった。新しい方法で生きている細胞のアクチンの組
目次

アクチンは、微生物から人間まで、いろんな生き物に見られる基本的なタンパク質なんだ。筋肉の収縮を助けたり、細胞の分裂を可能にしたり、細胞の移動をサポートしたり、組織の形を保つのに重要な役割を果たしている。アクチンは通常、モノマーと呼ばれる小さい単位として存在していて、これがつながってフィラメントという長い鎖を形成する。これらのフィラメントは細胞内で形や配置を変えて、さまざまなタスクをこなすことができる。アクチンフィラメントの組織は、その機能にとって不可欠なんだ。

アクチンとその重要性

アクチンは真核細胞で最も一般的なタンパク質のひとつで、異なる種においても非常に似ている。アクチンの構成や構造、細胞内での配置が、その働きに大きく影響するんだ。例えば、アクチンフィラメントが密に集まっていると筋肉の収縮を支えられるけど、別の配置だと細胞の移動や分裂を助けることができる。

細胞内で、アクチンフィラメントは単独で働くわけじゃなく、アクチン結合タンパク質と呼ばれる他の多くのタンパク質と相互作用する。これらのタンパク質はアクチンフィラメントの形成や配置を調整するのを助けるんだ。これらのタンパク質がアクチンと一緒にどのように働くかを理解することは、多くの生物学的プロセスを理解するために重要だよ。

アクチンの組織を研究する上での課題

アクチンタンパク質やその相互作用の研究が進んではいるものの、実際に生きた細胞の中でアクチンフィラメントがどのように組織されているかを解明するのは難しいんだ。従来の方法、例えば電子顕微鏡はアクチンの配置を示すことができるけど、生きた細胞を観察するには向いていない。蛍光顕微鏡は生きた細胞のアクチンイオンをイメージするための人気の技術なんだけど、この方法だけでは蛍光信号の明るさに基づいてアクチンフィラメントがどう配置されているかの全貌を把握することはできないんだ。

アクチンフィラメントの組織をより明確に理解するために、研究者たちは生きた細胞内部のアクチンの構造をリアルタイムで測定できる、もっと先進的なイメージング技術を探している。

偏光法でアクチンの組織を測定する

蛍光偏光顕微鏡法、または偏光法と呼ばれる手法を使って、アクチンフィラメントの配置を測定することができる。これは、アクチンフィラメントに結合したプローブから発せられる蛍光信号が偏光された光とどのように相互作用するかを利用する方法なんだ。

光がアクチンフィラメントに結合した分子に当たると、これらの分子の配置が明るさに影響を与える。サンプルから放出される光の明るさや方向を分析することで、研究者はその細胞内のアクチンフィラメントがどう組織されているかについて詳細な情報を集めることができる。アクチンフィラメントの向きに関連する角度を計算することで、その配置や整列を特定できるんだ。

アクチン用の特別な蛍光プローブ

偏光法を効果的に使うには、アクチンフィラメントに結合したときにうまく動作する蛍光プローブが必要なんだ。従来の蛍光染料はアクチンに結合できるけど、その正常な機能に影響を与えることもある。つまり、生きた細胞の中でアクチンの働き方に変化をもたらし、誤解を招く結果になることがある。

研究者たちは、アクチンを研究するためのプローブとして使える遺伝子コーディングされた蛍光タンパク質を開発したんだ。これらの特別に設計されたタンパク質は動きが少なく、アクチンの通常の機能に大きく干渉せずにアクチンの組織をより正確に測定できるようにするんだ。

新しい蛍光プローブの設計

この研究は、アクチンフィラメントがリアルタイムでどう組織されているかを示す新しい蛍光タンパク質ベースのレポータを作ることに焦点を当てている。これらの新しくデザインされたレポータは、酵母やミミズ、ショウジョウバエなどのさまざまな生き物で使える。

目標は、アクチンフィラメントの向きや整列を正確に測定できる感度の高い蛍光タンパク質プローブを作ること。研究者たちは、蛍光タンパク質の構造を変えることで、さまざまなバージョンのこれらのレポータを構築し、アクチンフィラメントにしっかりと結合したまま明確な信号を提供するように、動きを最小限に抑えているんだ。

新しいプローブのテスト

これらの強化されたアクチンレポータが生きた細胞でどう機能するかを確認するため、さまざまなテストが行われた。特定の蛍光タンパク質が、以前に知られているアクチン結合ドメインに結合してその配置を追跡した。研究者たちは、偏光法を使ってこれらの新しいプローブがアクチンフィラメントの組織の変化をどれだけうまく測定できるかを定量化したんだ。

これらのテストを通じて、研究者たちは新しい蛍光プローブが生きた細胞でアクチンの組織を効果的に可視化でき、アクチン機能に大きな変化を引き起こすことなく働くことを示すことができた。新しいプローブは可視性と機能性のバランスが良かったんだ。

新しいプローブの応用

この新しいレポータは、アクチンフィラメントの組織を理解することが重要なさまざまな研究分野で使える。たとえば、細胞分裂プロセスや、細胞が移動中に形を変える様子、組織がどのように形成されてその構造を維持するかを研究するのに役立つんだ。

アクチンフィラメントがこれらのプロセスでどう組織されているかを見ることで、科学者たちは細胞が健康や病気の中でどのように発展し機能するかを理解し始めることができる。この理解は、発生生物学や癌研究などの分野に影響を与える可能性があるよ。

生物でのプローブの使用

これらの蛍光プローブは、培養細胞だけでなく、酵母やミミズ、ショウジョウバエなどの全体の生物でもテストされた。こうすることで、研究者たちはこれらのプローブがより自然な環境でどのように動作するかを観察でき、生きた組織でのアクチンの役割に関する貴重なデータを集めることができる。

例えば、C. elegansの胚の伸長におけるアクチンの役割を研究することで、アクチンが発生中の生物をどう形作るのかが明らかになるかもしれない。ショウジョウバエでの同様の実験は、アクチンが飛行中の筋肉の構造と機能にどのように関与しているかを理解するのに役立つんだ。

結論

要するに、アクチンフィラメントは多くの細胞プロセスにとって重要で、その組織はさまざまな生物学的機能に影響を与える。アクチンの組織を研究するのは難しいけど、蛍光タンパク質ベースのレポータや偏光法のようなイメージング技術の進歩が、この重要なタンパク質の理解を深めることを約束しているよ。新しいツールは生きた生物の中でアクチンをリアルタイムで可視化できるようにし、生物学や医学における重要な発見の可能性を開いている。

アクチンフィラメントが異なる状況やさまざまな刺激に反応してどう組織されるかを探ることで、研究者たちは細胞が健康や病気の中でどう振る舞うかについての洞察を得ることができる。この新しい蛍光プローブは、細胞レベルでの生命の複雑さをよりよく理解するための強力なツールとなっているんだ。

オリジナルソース

タイトル: Genetically encoded reporters of actin filament organization in living cells and tissues

概要: The cytoskeletal protein actin is crucial for cell shape and integrity throughout eukaryotes. Actin filaments perform essential biological functions, including muscle contraction, cell division and tissue morphogenesis. These diverse activities are achieved through the ability of actin filaments to be arranged into diverse architectures, but a detailed appreciation of the dynamic organizational state of the actin filaments has been hindered by available tools. Fluorescence polarization microscopy is uniquely placed for measuring actin organization by exploiting the sensitivity of polarized light excitation to the orientation of fluorophores attached to actin filaments. By engineering constrained fluorescent protein fusions to widely used actin localization reporters, we have succeeded in developing novel genetically-encoded reporters for non-invasive, quantitative measurements of actin filament organization in living cells by fluorescence polarization microscopy. We show examples of actin organization measurements in living mammalian cells in culture, as well as in vivo in fission yeast, C. elegans and Drosophila.

著者: Manos Mavrakis, C. Silva Martins, F. Iv, S. Kumar Suman, T. C. Panagiotou, C. Sidor, M. Ruso-Lopez, C. N. Plancke, S. Omi, M. Gomes, A. Llewellyn, S. R. Bandi, L. Ramond, F. Arbizzani, C. V. Rimoli, F. Schnorrer, F. Robin, A. Wilde, L. LeGoff, J.-D. Pedelacq, S. Cabantous, S. A. Rincon, C. Chandre, S. Brasselet

最終更新: 2024-04-29 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.26.591305

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.04.26.591305.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

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