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新しいタンパク質ベースのナノリアクターが酵素の性能を向上させる

ナノリアクターのデザインの進歩が、さまざまな用途における酵素の効率と安定性を高めてるよ。

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酵素ナノリアクターの突破口酵素ナノリアクターの突破口向上させる。強化されたデザインが酵素の活性と安定性を
目次

タンパク質ベースのナノリアクターは、酵素を保持できる小さな構造だよ。酵素は化学反応を早めるタンパク質で、このナノリアクターには、生命体のプロセスを助けたり、環境汚染物質を掃除したりするような多くの使い道があるんだ。実験室でも化学反応を通じて製品を作るために使えるし、酵素をナノリアクターの中に入れることで、酵素の働きをコントロールしたり、パフォーマンスを向上させたりできるんだけど、酵素を活性のまま保つのは難しい問題なんだ。

酵素ナノリアクターの利点

ナノリアクターに酵素をカプセル化することにはいくつかのメリットがあるよ。まず、酵素がより良く組織化されて、うまく働くようになるんだ。次に、酵素が保護されていないときに起こる可能性がある不要な副反応を防ぐ手助けをする。これによって、酵素が反応してはいけないものと反応することで起こる毒性の影響を減らすことができるよ。また、カプセル化された酵素は安定性が高く、環境の他のタンパク質による劣化にも耐えられる傾向があるんだ。

さらに、これらのナノリアクターは重要な分子を安全で溶けやすい方法で保持できるから、酵素の近くに必要な成分を置いて、反応をより効率的にすることができるんだ。ただ、これらのナノリアクターを作るのは複雑で、酵素の活性を減らす厳しい条件が必要なことが多いんだ。

酵素活性の課題

効果的なナノリアクターを作る上での一つの大きな問題は、酵素が中に閉じ込められると、うまく働かないことがあるんだ。これは、ナノリアクターの中の条件が酵素にとって理想的でない場合や、ナノリアクターのデザインが酵素のニーズに合っていないからだ。カプセル化された酵素は活性が落ちることが多くて、これは応用で使うには問題だよね。

いろんなナノリアクターのタイプ

酵素ナノリアクターにはいろんなデザインがあるよ。リピッドで作られたもの、ポリマーからのもの、DNAや金属ベースの材料からのものがある。それぞれ組み立て方や動作方法が異なるけど、多くは組み立てるのに手作業がたくさん必要で、生産のスケールアップが難しいんだ。一方で、タンパク質ベースのナノリアクターは、生命体の中でたった1ステップで作れる可能性があって、製造が簡単になるかもしれないよ。

既存のタンパク質ベースのナノリアクター

いくつかの異なるタンパク質ベースのシステムが酵素ナノリアクターの応用に使われているんだ。フェリチン、ウイルスカプシド、細菌のマイクロコンパートメントみたいな構造が含まれてるよ。例えば、P22ウイルスカプシドは、有害物質を分解するためのナノリアクターを作るために使われてるんだけど、これらのシステムはまだパフォーマンスに問題を抱えているんだ。

P22システムの一つの大きな課題は、大きな孔があって酵素が閉じ込められるのが劣っていることだよ。これにより柔軟性はあるけど、安定性や効率に問題を引き起こすこともあるんだ。他のシステム、例えばルミザンシンターゼや細菌のマイクロコンパートメントも、カプセル化されたときに酵素の活性が減少することがあるんだ。

孔の大きさの重要性

これらのナノリアクターの孔の大きさは重要なんだ。研究によれば、小さい分子は孔を通りやすいけど、大きい分子は入るのが難しいんだ。これが障壁を作ってナノリアクターの効果を下げてしまうんだ。さらに、孔の電荷も分子が出入りする動きに影響を与えることがあるよ。

このダイナミクスをより理解するために、科学者たちは孔の大きさの変化が分子の移動能力にどれだけ影響を与えるかをテストしているんだ。従来の方法での研究は複雑で、小さな分子には理想的でないことがある。

新しいデザインアプローチ

私たちの研究では、孔の大きさを最適化することに焦点を当てたタンパク質ベースのナノリアクターの新しいデザインを紹介するよ。特別に設計された孔を持つ改良型カプスリンナノコンパートメントを作ったんだ。孔の寸法や電荷を変えることで、小さい分子が通りやすくなるようにしつつ、酵素を安全かつ活動的に保つことを目指したんだ。

先進的なイメージング技術を使って、新しいデザインの特性を調べて、かなりの量の貨物を保持できることを観察したよ。また、分子がどれだけ通るかや酵素のパフォーマンスを測る実験も行ったんだ。

新しいナノリアクターの構築

私たちは、特定のタイプのカプスリンであるMx_wtから新しいナノリアクターをデザインしたんだ。このカプスリンは、異なるタイプの構造を形成できて、特定のタンパク質が一緒に発現された時により多くの貨物を積むことができるんだ。孔のサイズを増やすように構造を変更した後も、安定したシェルを形成して貨物を効果的に保持できることが確認できたよ。

実験結果

私たちの実験では、新しいMx_pmutシステムを使ったとき、カプセル化された酵素の活性が大幅に改善されたよ。また、大きな孔サイズのおかげで、分子の動きが良くなって、小さな分子が出入りしやすくなったんだ。これは以前のシステムに比べて大きな改善で、特に大きな基質にとって良かったんだ。

酵素とのテスト

私たちは新しいナノリアクターを使って、さまざまな酵素のパフォーマンスをテストしたよ。最初に使った酵素の一つはNanoLucで、効率的な反応で知られてるんだ。結果は、私たちの新しいシステムにカプセル化されたNanoLucが従来のデザインに比べて130%のパフォーマンス向上を示したよ。

もう一つの酵素はAdhDで、異なる化合物を変換するために使われるものだ。これもカプセル化されたときに、89%のパフォーマンス向上を示したんだ。

ナノリアクターの安定性

酵素を劣化から守ることは、その寿命や効果を保つために重要なんだ。私たちは新しいデザインが安定性を保っているかどうかをテストしたよ。結果は、Mx_wtとMx_pmutのナノリアクターが厳しい条件下でも劣化から十分な保護を提供したことを示しているんだ。

コファクターリサイクルシステム

私たちのナノリアクターの一つの興味深い応用は、複数の酵素を共にカプセル化できることなんだ。これによって、コファクターをリサイクルできるより複雑なシステムを作る可能性が広がるよ。私たちの実験では、NADH依存の酵素を組み合わせて、内部でNADHをリサイクルできるか見てみたんだ。

結果は、私たちの新しいシステムがNADHを再生するのに効果的であることを示したよ。特に、Mx_pmutベースのナノリアクターは、従来のシステムに比べて再生能力が改善されていることが分かったんだ。

結論

孔のエンジニアリングを通じて、私たちは酵素のパフォーマンスを大幅に向上させながら安定性を維持する新しいカプスリンベースの酵素ナノリアクタープラットフォームを開発したよ。この研究は、バイオメディスンからバイオテクノロジー分野まで、さまざまなアプリケーションにおける高度な酵素ナノリアクターの使用に焦点を当てた将来の研究の基盤を築いているんだ。

以前のデザインの制限を克服し、孔の大きさを最適化することで、幅広い酵素や基質に適応できる多目的なプラットフォームを作ったよ。これによって、実験室や産業の場でも新しい機会が開けて、酵素反応の効率が向上し、さまざまな用途にアクセスしやすくなるかもしれないね。

これからは、これらのナノリアクターが特定のアプリケーションにどのように合わせられるかをさらに探求して、実際のシナリオでの効果を最大化し、既存の課題を解消することを目指していくよ。複雑な反応のために高度なマルチ酵素システムを作る可能性が、今後の研究開発において面白い道を提供するんだ。

オリジナルソース

タイトル: Pore engineering as a general strategy to improve protein-based enzyme nanoreactor performance

概要: Enzyme nanoreactors are nanoscale compartments consisting of encapsulated enzymes and a selectively permeable barrier. Sequestration and co-localization of enzymes can increase catalytic activity, stability, and longevity, highly desirable features for many biotechnological and biomedical applications of enzyme catalysts. One promising strategy to construct enzyme nanoreactors is to repurpose protein nanocages found in nature. However, protein-based enzyme nanoreactors often exhibit decreased catalytic activity, partially caused by a mismatch of protein shell selectivity and the substrate requirements of encapsulated enzymes. No broadly applicable and modular protein-based nanoreactor platform is currently available. Here, we introduce a pore-engineered universal enzyme nanoreactor platform based on encapsulins - microbial self-assembling protein nanocompartments with programmable and selective enzyme packaging capabilities. We structurally characterize our protein shell designs via cryo-electron microscopy and highlight their polymorphic nature. Through fluorescence polarization assays, we show their improved molecular flux behavior and highlight their expanded substrate range via a number of proof-of-concept enzyme nanoreactor designs. This work lays the foundation for utilizing our encapsulin-based nanoreactor platform for future biotechnological and biomedical applications.

著者: Tobias Wolfgang Giessen, S. Kwon, M. P. Andreas

最終更新: 2024-05-02 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.02.592161

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.02.592161.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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