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# 生物学# 免疫学

COVID-19に対する鼻用ワクチンの進展

研究はCOVID-19をターゲットにした鼻用ワクチンのための融合タンパク質に焦点を当てている。

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鼻用ワクチン:新しい希望鼻用ワクチン:新しい希望D-19に対して可能性を示してるよ。革新的なフュージョンタンパク質がCOVI
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呼吸器系は、COVID-19、インフルエンザ、結核などの深刻な病気を引き起こす病原菌など、多くの外部の脅威にさらされている。体がこれらの病原菌を早めに排除するのは良いことで、特に鼻で、肺や血流に到達する前に防ぐのが大事なんだ。免疫防御を強化する有望な方法の一つが、鼻用ワクチンなんだよ。この方法は、鼻のエリアにある特別な免疫システムを利用してる。

鼻用ワクチンは、通常の注射と比べていくつかの利点がある。体と鼻の両方で免疫反応を引き起こすことができるから、鼻から入ってくる病原菌にとっては重要なんだ。それに、鼻用ワクチンは針がいらないから、患者にとってはもっと簡単で安全なんだ。

インフルエンザとCOVID-19のための鼻用ワクチン

鼻用ワクチンの開発は特にインフルエンザで大成功していて、FluMistやNasovacなどのいくつかの鼻用ワクチンがすでに使用承認されている。これらのワクチンは、通常のワクチンよりも強い免疫反応を引き起こすことができるから、効果を高めるために追加の成分が必要じゃないんだ。

鼻用インフルエンザワクチンの成果を受けて、COVID-19のための鼻用ワクチンを設計することへの関心が高まっている。研究者たちは、無害なウイルスを使ってCOVID-19ウイルスの一部を免疫システムに届けるさまざまなタイプの鼻用ワクチンを開発中なんだ。これらのワクチンのいくつかは、初期の研究で安全性やさまざまなウイルス株に対する保護能力を示している。

多くの現在の鼻用ワクチンは、弱毒化ウイルスや改変ウイルスキャリアを使って設計されている。このタイプは強力な免疫反応を生み出すことができるけれど、冷やしておく必要があったり、望ましくない副作用を引き起こしたりすることがある。他のタイプのワクチン、例えばサブユニットワクチンはより安全かもしれないが、特定の追加成分がないと強い免疫反応を引き起こすのに苦労することがある。免疫反応を促すための非常に効果的な成分はコレラ毒素だけど、それはワクチンには使えないほど有害なんだ。

研究者たちは、コレラ毒素をワクチンブースターとして安全に使えるようにする方法を考えてきた。彼らは、毒素の良い部分を保持しつつ、有害な特性を取り除いた融合タンパク質を作った。この新しいタンパク質は、強い免疫反応を促進し、望ましくない免疫反応を防ぐのに効果的なんだ。

この新しいタンパク質を抗原と混ぜるだけでなく、科学者たちはそれらを一つの融合タンパク質に結合することもできる。これは、さまざまなウイルスのタンパク質で行われており、試験で強い結果を示している。

現在の研究

この研究では、科学者たちがCOVID-19に対抗するための2つの新しい融合タンパク質を開発することを目指している。このタンパク質には、強い免疫反応を引き起こすことで知られているCOVID-19ウイルスのスパイクタンパク質の一部が含まれる。彼らは、これらの新しいタンパク質が安定で効果的に望ましい免疫反応を生み出すと期待している。

そのために、彼らはこれらのタンパク質を生産する際に直面する可能性のある課題を評価することにした。研究は、将来のワクチン開発に使用できるように、融合タンパク質の生成と精製の方法を改善することに焦点を当てている。このアプローチは、他の病気のワクチンにも適用できるんだ。

融合タンパク質の作成

開発中の2つのタンパク質は、コレラ毒素の一部とCOVID-19スパイクタンパク質のセクションを組み合わせたものだ。これらのタンパク質は、タンパク質生産で一般的な手法である細菌を使って作られた。研究者たちは、そのデザインを調べ、これらのタンパク質が実験室でどのように振る舞うかを予測した。

彼らは、タンパク質の振る舞いや相互作用、安定性を理解するためにさまざまなオンラインツールを使用した。期待されるタンパク質の構造は、類似のタンパク質の既知の特徴と一致していて、正常に機能することが示唆されている。

タンパク質生産の課題

これらのタンパク質を細菌で生産しようとしたとき、科学者たちは課題に直面した。これらのタンパク質は、期待通りに可溶性を保てなかったんだ。適切に機能するためには可溶性が必要なのに。研究者たちは、細菌を冷やすことで解決できるかもしれないと思って、他のタンパク質でうまくいったことがあるんだ。でも、温度を下げても、この場合は可溶性が増えなかったんだ。

また、特定の成長段階で生産プロセスを開始することで、一部のタンパク質に効果があるかもしれないと発見したが、すべてのタンパク質に同じ効果があったわけではない。

可溶性を改善するために、洗剤を加えるなど、さまざまな溶液を試した。洗剤はタンパク質を溶かすのを助ける物質で、特定の種類や濃度の洗剤を使うことで、タンパク質を精製する際に可溶性タンパク質の量が大幅に増えたんだ。

精製プロセス

科学者たちは、タンパク質が生産された後に細菌の中の他のものから効果的に分離されることを確実にする必要もあった。彼らは、タンパク質の精製を改善するためのさまざまな手順を試し、元の構造や機能を保持することに集中した。

いくつかの成功があったけれど、全体的な収量、つまり使用可能なタンパク質の量は低かった。精製の段階で多くの損失が発生したんだ。最適化された手法を使った精製の効果は、期待には及ばなかった。

将来の方向性

この研究は、COVID-19に対する効果的な鼻用ワクチンをこれらの融合タンパク質を使用して開発する重要性を強調している。対象にできる既知のエピトープを持つ病気は他にもたくさんある。このアプローチにより、将来的に新しい病気が出てきたときにすぐに対処できるので、必要なウイルスの遺伝情報を迅速に取得できる。

この研究の成果は、COVID-19だけでなく、他の感染症に対する鼻用ワクチンに関するさらなる研究を導く手助けになるだろう。タンパク質の生産と精製の方法を磨くことで、さまざまな健康の脅威に対する安全で効果的なワクチンの開発への道が開かれるんだ。

結論

要するに、この研究は、COVID-19に対する潜在的な鼻用ワクチンとしての2つの新しい融合タンパク質の開発に焦点を当てている。このタンパク質は細菌を使って作られたけど、可溶性を保つことや正しく機能することに課題があった。精製プロセスに洗剤を追加することで可溶性は大幅に向上したが、全体的な収量は依然として低いままだ。

この研究の成果は、COVID-19や他の病気に対する効果的な鼻用ワクチンを作るための未来の取り組みを助けるだろう。生産と精製の方法がさらに洗練されれば、これらのワクチンがさまざまな感染症に対する公衆衛生の取り組みに貢献する日が近いかもしれない。

オリジナルソース

タイトル: Optimization of Soluble Expression of CTA1-(S14P5)4-DD and CTA1-(S21P2)4-DD Fusion Proteins as Candidates for COVID-19 Intranasal Vaccines

概要: Developing intranasal vaccines against pandemics and devastating airborne infectious diseases is imperative. The superiority of intranasal vaccines over injectable systemic vaccines is evident, but the challenge in developing effective intranasal vaccines is more substantial. Fusing a protein antigen with the catalytic domain of cholera toxin (CTA1) and the two-domain D of staphylococcal protein A (DD) has significant potential for intranasal vaccines. In the present study, we constructed two fusion proteins containing CTA1, tandem repeat linear epitopes of the SARS-CoV-2 spike protein (S14P5 or S21P2), and DD. The in silico characteristics and solubility of the fusion proteins CTA1-(S14P5)4-DD and CTA1-(S21P2)4-DD were analyzed when overexpressed in Escherichia coli. Structural predictions indicated that each component of the fusion proteins was compatible with its origin. Both fusion proteins were predicted by computational tools to be soluble when overexpressed in E. coli. Contrary to these predictions, the constructs exhibited limited solubility. The solubility did not improve even after lowering the cultivation temperature from 37{degrees}C to 18{degrees}C. Induction with IPTG at the early log phase, instead of the usual mid-log phase growth, significantly increased soluble CTA1-(S21P2)4-DD but not CTA1-(S14P5)4-DD. The solubility of overexpressed fusion proteins significantly increased when a non-denaturing detergent (Nonidet P40, Triton X100, or Tween 20) was added to the extraction buffer. In a scale-up purification experiment, the yields were low, only 1-2 mg/L of culture, due to substantial losses during the purification stages, indicating the need for further optimization of the purification process.

著者: Simson Tarigan, S. Sumarningsih, D. R. Setyawati, G. Sekarmila, A. Apas, R. Putri

最終更新: 2024-06-14 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.13.598952

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.13.598952.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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