微細真核生物における共生関係の調査
ボドサルタンスとそのバクテリアに関する研究が、予想外の成長パターンを明らかにした。
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自然界では、いくつかの生物が他の生物に依存して生きている。この関係は共生と呼ばれる。例えば、宿主生物が適切に機能するために特定のパートナー、つまり共生者を必要とする場合がある。このような関係はよく見られ、多くの生物に存在している。これらの関係を理解することで、人間の病気の治療法や農業の改善につながることもある。
例えば、フィラリア症のような寄生虫によって引き起こされる特定の病気は、共生者をターゲットにすることで治療できる。共生者に影響を与えると、宿主が不妊になることがあり、新しい治療戦略が得られることもある。それに加えて、植物や血液を食べる多くの昆虫も共生者に依存している。したがって、これらの関係がどのように機能するかを知ることは、人間の健康や食糧源を守るための鍵となる。
しかし、これらの関係を研究するのは複雑な場合が多い。よくある科学的手法に対して共生者や宿主がうまく反応しないことがあり、依存関係の仕組みを明らかにするのが難しい。
微小真核宿主をモデル生物として
微小真核宿主は、共生関係を研究する上で価値がある。これらの宿主は通常、単細胞生物であり、内部にさまざまな微生物が共生していることがある。これらの微生物は宿主の生活に大きな影響を与える。例えば、パラメシウムとクロレラに関する有名なケースでは、クロレラがパラメシウムに光合成を行う能力を与える。
さらに、この関係は独自のメカニズムによって安定している。もしクロレラが死ぬと、その残骸がパラメシウムにとって重要な遺伝子を沈黙させることによって悪影響を及ぼす可能性がある。これは、遺伝子間の相互作用が関係を維持するために重要であることを示している。
微小真核生物は研究室で培養しやすく、科学者たちは遺伝子がどのように機能するかを研究するためにRNA(遺伝物質の一種)を操作できる。また、小さな分子も簡単にシステムに導入することができる。ただし、水中に生息する生物に対してこれらの方法を発展させるには、まだ多くの作業が必要だ。
Bodo saltansとCandidatus Bodocaedibacter vickermaniiの研究
この研究では、特定の微小真核宿主Bodo saltansと、その中に生息する細菌Candidatus Bodocaedibacter vickermanii(Cbv)に焦点を当てた。B. saltansは、主に他の細菌を食べる小さな生物で、淡水と塩水の環境の両方に存在する。CbvはB. saltansの生活サイクルの恒久的な部分であり、抗生物質で除去すると宿主も死んでしまうようだ。
科学者たちは、B. saltansとCbvは互いに生存するために必要だと考えている。例えば、Cbvを殺す抗生物質はB. saltansの死にもつながる。研究者たちは、CbvにはB. saltansとつながるのに役立つ特定のシステムがあることを発見した。細菌が取り除かれると、宿主は他の細菌によって生成される有害物質に対する防御を失う可能性がある。
この関係をよりよく理解するために、研究者たちはB. saltansとCbvの両方の遺伝子の発現を操作するためのツールを開発することを目指した。関連する生物でうまくいった方法の一つは、アンチセンス抑制と呼ばれるもので、特定の遺伝子の働きを止めることができる。
アンチセンス抑制の適用
アンチセンス抑制は、B. saltansに似た他の生物でも成功裏に使われてきた。例えば、科学者たちは、合成RNA様分子を用いて別の生物Trypanosoma cruziの特定の遺伝子をブロックした。
この方法はCbvに関連する細菌にも適用されている。研究者たちは合成ペプチド核酸(PNA)を使用して、これらの細菌の遺伝子をターゲットにし、それらが生存に不可欠であることを確認した。ただし、アンチセンス法が効果的に機能するためには、しばしば分子を細胞内部に届けるための特定の配達方法が必要だ。
B. saltansの遺伝子操作ツールが改善されると、科学者たちはB. saltansとCbvの両方に同じ技術を適用するためのプロトコルを作成しようと試みた。
アンチセンス分子の配達方法
アンチセンス分子をB. saltansとCbvに導入するために、さまざまな方法がテストされた。一つの成功したアプローチは、顕微鏡で簡単に追跡できる蛍光色素標識PNAを使用することだった。
研究者たちは、B. saltansを二つの主な方法で処理した:生物を抗生物質分子を含む溶液に24時間置くか、電気ショックを使って分子が細胞に迅速に入る手助けをする方法だ。細胞を観察したところ、インキュベーション法では電気穿孔法と比較して細胞内の蛍光分子のレベルがずっと高くなった。
チェックしたところ、アンチセンス分子が細胞内のCbv細菌に入っていることが分かった。しかし、細菌内の分子の量は周囲の細胞質よりも大きくはなかった。これは、分子が入ることができる一方で、共生者内に大量に蓄積されないことを示唆している。
研究者たちは、細胞内への入出を助けるキャリアに関連した他のタイプのアンチセンス分子も探求した。が、これらの試みは元のPNA法ほど上手くいかなかった。そのため、B. saltansとCbvの両方を標的にしたさらなる実験にはインキュベーション法に固執することにした。
アンチセンス分子が遺伝子発現に与える影響
B. saltansとCbvの特定の遺伝子を抑制できるかどうかを確認するために、研究者たちは重要だと考えた遺伝子をターゲットにしたアンチセンス分子を設計した。B. saltansでは、摂食や細胞構造に関与していると思われる遺伝子に焦点を当て、Cbvでは毒素生成や細胞分裂に関連する遺伝子をターゲットにした。
徹底したアプローチにもかかわらず、結果は遺伝子発現の有意な抑制が見られなかった。ウエスタンブロット解析や定量PCRを含む実験の観察から、アンチセンス分子はターゲットとなる遺伝子を効果的に抑制しなかったことが示された。
驚いたことに、B. saltansはアンチセンス分子にさらされた際、数が減るのではなく急激に増殖した。この成長の増加は、分子がターゲットのものであろうとランダムな配列であろうと、一貫して見られた。
予期しない成長の説明
研究者たちは、このB. saltansの予期しない成長の可能な説明をいくつか提案した。一つの考えは、B. saltansがアンチセンス分子を栄養源として利用し、成長を促進しているかもしれないということ。B. saltansは小さな細菌を食べるため、これらの分子が必須栄養素を提供している可能性がある。
もう一つの考えは、B. saltansが食べる細菌がアンチセンス分子と相互作用する物質を生成し、それがB. saltansの成長に間接的に影響を与えているかもしれないということ。いずれにしても、この場合、アンチセンス抑制法は期待された結果をもたらさなかった。
結論と今後の方向性
要するに、この研究はB. saltansとその共生者Cbvとの関係を理解するためにアンチセンス抑制を使用することを目指していたが、その方法は効果がなかった。研究者たちはアンチセンス分子を送達する技術を成功裏に実演し、B. saltansの生物学に関する貴重な洞察を得た。
期待された結果は得られなかったが、この研究は今後の研究のための基盤となる知識を提供している。現在、遺伝子編集技術のような代替方法を確立するための取り組みが進められており、B. saltansとCbvとの複雑な関係をより深く理解する新たな道を開く可能性がある。
この共生関係の遺伝的な仕組みを解明する旅は続き、共生についての理解において未来のブレークスルーを約束している。
タイトル: Development of antisense tools to study Bodo saltans and its intracellular symbiont
概要: Obligate symbioses are common in nature and present a particular challenge for functional genetic analysis. In many cases, the host is a non-model species with poor tools for genetic manipulation and the symbiont cannot be cultured or its gene expression manipulated to investigate function. Here we investigated the potential for using antisense inhibition to analyse host and symbiont gene function within an obligate aquatic symbiosis. We focused on the kinetoplastid host Bodo saltans and its bacterial symbiont, Candidatus Bodocaedibacter vickermanii, a member of Rickettsiales. We conclude that antisense inhibition is not feasible in the B. saltans and its symbiont, as the holobiont feeds on the antisense molecules - and increases in numbers - upon treatment with the antisense construct. Although our approach has proven unsuccessful, we have developed an array of protocols which can be used to study the biology of this microeukaryote and its microbial associates.
著者: Ewa Chrostek, M. Ahrar, L. Glenn, M. Held, A. Jackson, K. Kus, G. D. Hurst
最終更新: 2024-07-27 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.27.605423
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.27.605423.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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