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# 生物学# 神経科学

生物研究のためのX線イメージングの進展

新しいX線技術が生物組織の微細なレベルでの可視化を向上させてるよ。

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目次

生物イメージングの分野では、研究者たちが組織内の微細構造を可視化するためのより良い方法を常に追求してるんだ。伝統的な方法、例えば電子顕微鏡は、組織にどれだけ深く入れるかが制限されてるから、密な組織の3D画像を見るためには、サンプルを薄く切ったりしなきゃならないんだ。これが問題なのは、長時間の実験中に重要なディテールを失う可能性があるから。

X線イメージングは、有望な代替手段で、X線はあまり損傷を与えずにサンプルに深く入れることができる。でも、古いX線技術は高解像度の画像を作るのが難しくて、組織内の小さな構造が見えにくいんだ。最近の技術の進歩、特にシンクロトロン施設の利用が、X線イメージングの質を向上させてる。これらの施設はすごく明るいX線を生成できるから、研究者たちは生物組織を詳細に可視化できるようになったんだ。

X線イメージングの基本

X線イメージングは、サンプルを通してX線を通し、反対側から出てくる光をキャッチすることで機能する。異なる材料はX線を異なって吸収するから、サンプルの各部分が吸収するX線の量に基づいて画像が生成される。柔らかい生物組織は、密な材料に比べてX線をあまり吸収しないから、見にくいんだ。

柔らかい組織がX線画像で見えやすくするために、科学者たちは特別な染色方法を使い始めた。重金属染料は組織のコントラストを増加させることができるけど、これらの染料はイメージングプロセス中に放射線から組織がより脆弱になる可能性もある。

新しい方法

研究者たちは、高度な染色方法とX線イメージングを組み合わせた新しいイメージング技術を開発した。この戦略では、古い材料に比べて放射線損傷からの保護を提供する特定の樹脂を使用するんだ。この新しい樹脂に組織を埋め込むことで、損傷を最小限に抑えつつ、高い詳細レベルの画像を得ることができるんだ。

このプロセスは極低温条件下で行われて、サンプルを非常に冷たく保つことで、放射線曝露によって起こる可能性のある構造変化を減少させるんだ。この新しい方法を使って、研究者たちは神経組織の3D画像を38ナノメートルの解像度で取得することに成功した。このレベルの詳細だと、シナプスのような微細な構造が見えるから、脳の働きを理解するのに重要なんだ。

イメージングプロセス

イメージングプロセスは、まず組織サンプルの準備から始まる。サンプルが固定され、染色されたら、特別な樹脂に埋め込まれる。このプロセスは、組織に安定した環境を作り、イメージングの質を向上させることを目指してる。

埋め込んだ後、サンプルは位相コヒーレントX線コンピュータトモグラフィー(PXCT)という技術を使ってスキャンされる。サンプルは集中したX線のビームを通して動かされ、X線の回折パターンがキャッチされる。コンピュータアルゴリズムを使って、キャッチしたデータを処理して、サンプルの詳細な3D画像を再構築するんだ。

PXCTプロセス中に、別の角度から複数の画像が撮られる。研究者たちはサンプルを回転させ、多くの投影を集めて組織の完全なビューを作成する。アルゴリズムはこれらの投影を組み合わせて、詳細な3Dモデルを作るんだ。

結果と発見

新しいイメージング方法をマウスの脳組織のサンプルに使ったとき、研究者たちは血管、細胞本体、細かい神経突起などのさまざまな特徴を特定できた。この成功は、新しい技術が生物組織の重要な要素を効果的に可視化できることを示してる。

実験の一つでは、研究者たちはマウスの嗅球の外層を特定の染料で染色し、頑丈な樹脂に埋め込んだ。イメージングの後、樹状突起や他の細かい構造を特定できて、技術が約84ナノメートルの解像度を達成できることを示した。

イメージング中に放射線量を増加させると、研究者たちは画像の解像度が改善されることに気づいた。高い放射線量は一般的に画像をシャープにするけど、放射線が多すぎると組織に損傷を与える可能性がある。研究者たちは、頑丈な樹脂のおかげで、サンプルに重大な損傷を与えることなく限界をさらに押し上げることができたんだ。

制御された放射線量の範囲で、彼らは49.7ナノメートルの解像度を持つ画像を取得できた。6 × 10^8 Gyを超える放射線量でも、放射線による変化は観察されたけど、膜や細胞の特徴に目立った構造的損傷はなかった。

課題と解決策

激励的な結果がある一方で、この技術を使う際の課題もある。放射線は画像の質に影響を与える可能性があり、特に用量が高すぎるときは注意が必要なんだ。これに対処するために、研究者たちは非剛体再構成アルゴリズムを導入して、放射線によって引き起こされる歪みを修正する手助けをしてる。このアルゴリズムは、組織構造の変化をモデル化して、最終的な画像の質を改善するんだ。

もう一つの課題は、重金属で染色されたサンプルを貫通させるために高エネルギーの光子が必要なこと。高エネルギーは一般的により高度な装置を必要とし、イメージングの質が低下する可能性がある。これを克服するために、研究者たちは、これらの高エネルギーの要件を回避するイメージング方法、例えば薄いスライスに焦点を当てたラミノグラフィの使用を提案してるんだ。

進展と今後の方向性

染色、埋め込み、イメージング技術の進展は、生物イメージングの分野で重要な一歩を示してる。頑丈な樹脂を使うことで、サンプルの整合性を損なうことなく、より効果的なイメージングが可能になるから、シナプスのような繊細な構造の研究には欠かせないんだ。

今後の研究では、これらのプロトコルをさらに洗練させて、さらに良い染色技術や埋め込み材料を探求することが目指される。研究者たちがこれらの方法を改善し続けることで、イメージングの解像度と質が新たな高みに達することが期待されるんだ。

要するに、重金属染料と新しい放射線耐性樹脂、先進的なイメージング技術を組み合わせたアプローチは、生物研究に大きな可能性を持ってる。この方法は、可視化を向上させるだけでなく、生物組織の複雑さ、特に脳やそのつながりを理解するための新たな洞察の扉を開くんだ。

結論

生物組織のイメージング技術が進化し続ける中で、細胞レベルでの生命の intricate な詳細を探求する能力も進化していくんだ。脳の構造を理解してマッピングするのは複雑なタスクだけど、こうした革新のおかげで、研究者たちは神経接続や機能の謎を解き明かすことに近づいてる。最先端のこの方法が神経科学や他の分野で主流になることで、私たちの知識の進展に寄与し、医療科学の突破口につながることを期待してるんだ。

継続的な改善と洗練によって、生物研究におけるX線イメージングの未来は明るくて、より詳細で微妙な理解が期待できるんだ。技術と生物学の統合が、興味深い発見への道を切り開き、生命の複雑なメカニズムの理解を深めるだろう。

オリジナルソース

タイトル: Non-destructive X-ray tomography of brain tissue ultrastructure

概要: Maps of dense subcellular features in biological tissue are the key to understanding the structural basis of organ function. Electron microscopy provides the necessary resolution, yet - as electrons penetrate samples for only a few 100s of nm - requires physical sectioning or ablation, which strongly challenges anatomical investigations of entire organs such as mammalian brains. As demonstrated for the engineering and physical sciences, X-ray nanotomography represents a promising alternative for ultrastructural 3d imaging without physical sectioning1-15. Leveraging the high brilliance of 4th generation synchrotron X-ray sources, it has the potential to non-destructively image mm3-sized samples at ultrastructural resolution within a few days16. A fundamental barrier to application to the life sciences is that, when irradiated with high-intensity X-rays, biological samples deform and ultimately disintegrate, prohibiting reaching sufficient resolution. Here, we introduce a combination of engineering solutions which defeat this barrier for X-ray ptychography17, a coherent diffractive X-ray imaging technique. The solutions include a cryogenic sample stage with high stability, high-precision interferometric positioners and tailored non-rigid tomographic reconstruction algorithms18. Furthermore, adapting an epoxy resin developed for the nuclear and aerospace industry, we demonstrate radiation resistance to X-ray doses exceeding 1010 Gy. The resulting sub-40 nm isotropic resolution makes it possible to densely resolve axon bundles, boutons, dendrites and reliably identify synapses without physical sectioning. Moreover, we validated the X-ray technique using the current gold standard, namely focused ion beam scanning electron microscopy (FIB-SEM)19,20 to demonstrate intact ultrastructure in tissue volumes first imaged by X-rays. This unlocks the potential of X-ray tomography for high-resolution tissue imaging, coinciding with the transformative advancements of next-generation synchrotrons worldwide21.

著者: Andreas Schaefer, C. Bosch, T. Aidukas, M. Holler, A. Pacureanu, E. Mueller, C. J. Peddie, Y. Zhang, P. Cook, L. Collinson, O. Bunk, A. Menzel, M. Guizar-Sicairos, G. Aeppli, A. Diaz, A. Wanner

最終更新: 2024-09-25 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.11.16.567403

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.11.16.567403.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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