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# 生物学 # 微生物学

細菌遺伝学の隠れた世界を暴く

研究で細いタンパク質と嵌め込まれた遺伝子がバイ菌にとってどれだけ大事かが明らかになった。

Emily C A Goodall, F. Hodges, W. Kok, B. Permana, T. Cuddihy, Z. Yang, N. Kahler, K. Shires, K. Pullela, V. V. L. Torres, J. Rooke, A. Delhaye, J. A. Bryant, B. M. Forde, M. Hemm, i. henderson

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細菌の遺伝子:小さいタンパ 細菌の遺伝子:小さいタンパ ク質が大事 の見落とされがちな役割を明らかにしている 研究がバクテリアにおける小さなタンパク質
目次

過去20年で、科学者たちは多くのバイ菌の遺伝子コードを読み取ることができたんだ。それによって、彼らの遺伝子や時間とともにどう変わるかについてもっと学んだ。でも、新たな証拠が出てきて、バイ菌の遺伝子を全部理解してるわけじゃないかもしれないってことを示唆してる。特に、小さいタンパク質についてはあんまり注目されてこなかったんだよね。従来は、あるサイズ以下のものはタンパク質とみなされないことが多かったから、研究中に多くの小さなタンパク質コーディング配列が見逃されちゃった。

小さいタンパク質

小さいタンパク質っていうのは、アミノ酸が50未満で構成されてるタンパク質で、バイ菌の中で重要な役割を持ってるんだ。これらのタンパク質は、ストレスに応じたり、細胞分裂や代謝、抗生物質に対抗するのにも関わってることが分かってる。重要なのに、研究ではこれらの小さいタンパク質を正確に特定するのが難しいんだ。短いから、どのDNAの部分が本当にタンパク質コーディング配列で、どれがただのランダムな配列かを判断するのが難しいんだよね。それに、いくつかの小さいタンパク質は特定のバイ菌の中でしか働かないから、異なる種の配列を比較するのも厄介なんだ。

ネストされた遺伝子

もう一つよく見落とされがちな遺伝子のグループがネストされた遺伝子だ。これらは大きな遺伝子の中にある小さな遺伝子で、メインの遺伝子と同じ方向にあったり逆方向にあったりすることがあるんだ。一部のネストされた遺伝子はアイソフォームと呼ばれ、大きな遺伝子の異なるスタート地点から生成される。ネストされた遺伝子はウイルスや高等生物には一般的だけど、バイ菌では珍しいと見なされがちなんだ。多くの自動システムはバイ菌のゲノムを読むときに、これらの小さなコーディング配列を無視しちゃうから、発見がもっと見逃されるんだよ。

小さいタンパク質を見つける方法

小さいタンパク質を見つける課題に対処するために、新しい方法が開発されてるんだ。1つのアプローチは、タンパク質を作る機械であるリボソームを、今翻訳してるRNAに引っかけることなんだ。この手法を使うことで、研究者たちはどのRNAの部分が実際にタンパク質に変わっているかを特定できるんだ。でも、これらの研究の結果を解釈するのはまだ難しいことがある。

翻訳レポーター

翻訳レポーターは、タンパク質コーディング配列を見つけるためのもう一つのツールなんだ。この方法では、アルカリフォスファターゼのようなよく知られてるタンパク質をターゲット遺伝子にくっつけるんだ。もし遺伝子が正しく結びついてれば、結果としてできるタンパク質が簡単に検出できるよ。以前の方法では、アルカリフォスファターゼの遺伝子をバイ菌のDNAに導入して、ターゲットタンパク質に結びついてるときだけ機能するようにしたんだ。遺伝子を結びつけるこの革新的な方法は、さまざまなタンパク質の機能を明らかにするのに役立ってる。

レポータートランスポゾンライブラリーの構築

過去の研究では、科学者たちはよく研究されたE. coliの株で新しいコーディング配列を探すためのシステムを使ったんだ。彼らは、ゲノム内をジャンプできて、耐性バイ菌を選別するマーカーを運ぶことができるDNAの断片、トランスポゾンを導入した。この方法は、マーカーが既存の遺伝子に正しく挿入されたときだけ機能するように設計されたんだ。ミュータントのライブラリーを作った後、彼らはDNAをシーケンスしてトランスポゾンがどこに着地したかを見つけた。これにより、新しいタンパク質コーディング遺伝子を特定する方法が提供され、先行知識を基に新しい遺伝情報を解放することができたんだ。

ミュータントの選別とスクリーニング

トランスポゾンライブラリーを作った後、特定の抗生物質を使ってミュータントをスクリーニングしたんだ。生き残ったバイ菌は、トランスポゾンが耐性遺伝子を発現できるように挿入されたに違いない。科学者たちは、トランスポゾンが統合された近くのDNAをシーケンスして新しい遺伝子を特定した。こうして、彼らは何千もの新しい潜在的なタンパク質を発見したんだ。

スクリーニングの結果

スクリーニングプロセスを実施した後、研究者たちはユニークな挿入サイトの大量を特定したんだ。これが可能性のある新しい遺伝子に対応していることが分かった。多くの場合、これらは既知の遺伝子内にあり、フレームから外れていることが示唆されていて、ネストされた遺伝子が存在することを示してる。一部の領域では、重なり合う遺伝子も見つかって、複雑な遺伝子調節を示してたんだ。

新しい遺伝子の検証

発見を確認するために、科学者たちはいくつかの選択された遺伝子に対してウエスタンブロット分析を行ったんだ。新しい遺伝子が実際にタンパク質を生成してるかどうかを確認することが目的だった。結果、予測された小さいタンパク質のいくつかが発現していて、存在が確認された。全てのタンパク質を検出できたわけじゃなかったけど、一部の検出は期待が持てるもので、この方法の効果を支持してる。

タンパク質構造予測

次に、科学者たちは計算的方法を使ってこれらの小さいタンパク質の構造を予測したんだ。いくつかのタンパク質は構造予測には小さすぎたけど、他のものは特定の構造を形成する可能性が見られたから、機能の可能性も示唆されてる。研究は、これらのタンパク質の多くが膜を越えて物質を輸送するような重要な生物学的プロセスに関与している可能性があることを示唆してる。

E. coli株間の保存状態

次のステップは、これらの新しい遺伝子が異なるE. coli株の中でどれだけ保存されてるかを調べることだったんだ。広範なE. coliのゲノムコレクションをチェックすることで、研究者たちは多くの新たに特定された遺伝子が異なる株間で共有されていることが分かったんだ。これは、ランダムな出来事じゃなく、バイ菌の機能に重要な役割を果たす可能性が高いことを示唆してる。

小さいタンパク質の重要性

全体として、この研究はバイ菌の遺伝学における小さいタンパク質の重要性を強調してる。これらのタンパク質は従来のゲノム注釈では見落とされがちだけど、バイ菌の機能や調節について貴重な洞察を持ってる可能性が高い。研究の結果は、特に非常に重要でありながらよく無視される小さいタンパク質のゲノム注釈に対するより深いアプローチが必要であることを強調しているんだ。

未来の方向性

この研究で開発された方法は、他のバイ菌や生物で小さいタンパク質を見つけるために応用できるかもしれない。小さいタンパク質、特にネストされた遺伝子の領域にはまだ探求すべきことがたくさんあるんだ。もっと技術やツールが洗練されることで、バイ菌の遺伝的可能性への理解が深まっていくんだ。これらの洞察は、バイオテクノロジーや医療の進展につながり、新しい治療法や応用の可能性を開くかもしれない。

結論

結論として、小さいタンパク質とそのバイ菌内での役割を探ることで、まだ学ぶべきことがたくさんあることが分かったんだ。革新的な技術とさまざまな戦略を使って、研究者たちはバイ菌遺伝学の複雑な世界を徐々に明らかにし始めてる。この研究はバイ菌のゲノムについての知識を豊かにするだけでなく、将来の研究において大きい遺伝子でも小さい遺伝子でもすべての遺伝子を考慮する重要性を強調してるんだ。

オリジナルソース

タイトル: Genome scale identification of new genes using saturated reporter transposon mutagenesis

概要: Small or overlapping genes are prevalent across all domains of life but are often overlooked for annotation and function because of challenges in their detection. The advent of high-density mutagenesis and data-mining studies suggest the existence of further coding potential within bacterial genomes. To overcome limitations in existing protein detection methods, we applied a genetics-based approach. We combined transposon insertion sequencing with a translation reporter to identify translated open reading frames throughout the genome at scale, independent of genome annotation. We applied our method to the well-characterised species Escherichia coli and identified [~]200 putative novel protein coding sequences (CDS). These are mostly short CDSs (

著者: Emily C A Goodall, F. Hodges, W. Kok, B. Permana, T. Cuddihy, Z. Yang, N. Kahler, K. Shires, K. Pullela, V. V. L. Torres, J. Rooke, A. Delhaye, J. A. Bryant, B. M. Forde, M. Hemm, i. henderson

最終更新: 2024-11-30 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.06.611592

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.06.611592.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

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