OPM:顕微鏡の未来
革命的な画像技術が細胞の詳細を傷つけずに明らかにする。
Trung Duc Nguyen, Amir Rahmani, Aleks Ponjavic, Alfred Millett-Sikking, Reto Fiolka
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目次
生きている細胞の中の小さい構造をイメージングするとなると、研究者たちはちょっと苦労することが多いんだよね。あまりダメージを与えずに何が起こってるかを見る必要があるから。そこで登場するのが斜め面顕微鏡(OPM)ってわけ。これが顕微鏡のスーパーヒーローみたいなもので、速くて優しくて、時間をかけて小さいものを観察するのにぴったり。OPMは光シート蛍光顕微法(LSFM)という技術の一種で、最近科学の世界で注目を集めてる。
OPMの仕組み
OPMは、研究しているサンプルに対して光シートを斜めに照射する賢い仕組みを使ってる。この斜めの光は、高品質の画像を作りながらダメージを最小限に抑えるのに役立つんだ。光を放出するレンズとサンプルからの蛍光を拾うレンズが一つになってるから、映画を見てる時に目が画面から外れるみたいにレンズがずれても、光シートと検出が完璧に同期してるんだ。このニッキーなトリックがあるおかげで、OPMは少し不安定な状況でもうまく機能するんだよ。
ドリフトの問題
どんなイメージングシステムでも、ドリフトは実験中にレンズやサンプルが意図せず動いちゃうことを指すんだ。カメラが動き続けてる状態で写真を撮るのと同じで、イライラする感じだよね。ドリフトがあると、ぼやけた画像になっちゃって重要なものに焦点を合わせるのが難しくなるんだ。特にLSFMでは、光と検出用のレンズが別々だから、簡単にズレちゃうことがある。
リモートフォーカス安定化
さあ、またスーパーヒーローのOPMに戻ろう。こいつには秘密の武器があるんだ。それがリモートフォーカス安定化システム。これのおかげで、イメージングプロセスを中断することなく、画像をシャープでクリアに保てるんだ。普通のLSFMシステムは、アライメントを測定するために停止しなきゃいけないから、貴重な時間や蛍光を浪費しちゃう。OPMのリモートフォーカス安定化は常にバックグラウンドで動いてるから、研究者は実際に研究してることに集中できるんだ。例えば、かわいいナノスフィアや癌細胞を観察する時みたいに。
光学セットアップ
貴重なサンプルを最大限に活かすためにデリケートな機械をセットアップするイメージをしてみて。OPMでは、レーザー光がちょっとしたミラーセットアップを通って、斜めの光シートを作り出すんだ。いくつかのレンズやミラーを通った後、光がサンプル空間に向けられて、細かいディテールをキャッチできるようになる。レーザーはフォーカス安定化にも役立って、すべてを正しく保つための導きの光みたいな役割を果たしてるんだ。
カメラの魔法
光学の旅の終わりには、サンプルから放出された蛍光がカメラにキャッチされる。このカメラは普通のガジェットじゃなくて、ぼやけを最小限に抑えて、一番細かいディテールがしっかり出るように特別にデザインされてるんだ。レンズの巧妙な配置が整列を保ちやすくして、より良い画像につながるんだよ。
アライメントを監視
アライメントレーザービームは、安定化システムの重要な部分なんだ。光学経路に注入されて、オフセンターに向けられて高感度を確保するんだ。何かがずれたら、システムが素早く変化を検出して調整できる。メインイベントに集中してる時に、アライメントをいつも見守ってくれてる友達みたいな感じだね。
フィードバック制御システム
さて、ちょっとテクニカルな話をしようか。でもあまり難しくはないよ。フィードバック制御システムは、オペレーションの背後にいる頭脳みたいなもので、レーザースポットが正しい位置にあるかを素早く画像を撮ることでチェックしてるんだ。レーザースポットがずれたら、システムがすぐに修正して三次目的の位置を調整する。滑りを取ってくれる賢い犬がスリッパを取ってきてくれるみたいなもんだ。
精度と長期安定性
このシステムの精度はかなり印象的なんだ。100秒間に連続してスナップショットを撮ることを想像してみて。集められたデータは、標準偏差が約57ナノメートル。顕微鏡の世界では、毎回的中するのと同じくらい凄いことなんだ。誰だって100ナノメートルの精度が欲しいでしょ?そして、もし気になるなら、普通のピザ配達の人が遅れてくるより全然正確なんだよ。
ナノスフィアと癌細胞のイメージングテスト
すべてが計画通りに進んでいるか確認するために、研究者たちはいくつかのテストを行ったんだ。まずは蛍光ナノスフィアから始めて、1時間にわたってイメージングしたんだ。最初はすべてが整列して、画像は素晴らしかった。でも、1時間の終わり頃には、状況が悪化してきた。アライメントが狂って、画像がぼやけて、まるでカメラレンズにワセリンを塗ったみたいになっちゃった。
次は本番だ:A375癌細胞。研究者たちはこの細胞を安定化システムをオンにしたままでイメージングしたら、見事にクリスタルクリアな結果が得られたんだ。細かいディテールが時間経過と共に見えた。光シートは完璧に整列してて、複雑な細胞構造をキャッチしやすくなってた。まるで、全ての動きが完璧に演じられたリハーサル済みのダンスパフォーマンスを見ているようだった。
将来の改善
スーパーヒーローにも改善の余地がある。OPMシステムはすでに印象的だけど、もっと良くするアイデアがあるんだ。例えば、エンジニアはレーザースポットを微調整してフォーカスの調整をより正確にすることができるかもしれない。これによってドリフトが減って、特に複雑なイメージングタスクを扱う時に全体的なパフォーマンスが向上するだろうね。
結論
OPMの旅をまとめると、この技術が研究者たちに新たな扉を開いていることが明らかだよ。生きている細胞を長時間にわたって失わずにイメージングできる能力は、重要な前進なんだ。このイメージング手法のスーパーヒーローは、素晴らしい結果を提供するだけじゃなく、さまざまな分野での未来の発見への道を切り開いてるんだ。だから、もし君が一番小さい細胞を研究したり、癌の秘密を追いかけたりしてるなら、OPMが助けてくれるよ-ケープは必要ない!
タイトル: Active Remote Focus Stabilization in Oblique Plane Microscopy
概要: Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM) has demonstrated great potential in the life sciences owing to its efficient volumetric imaging capabilities. For long term imaging, the light-sheet typically needs to be stabilized to the detection focal plane for the best imaging results. Current light-sheet stabilization methods rely on fluorescence emission from the sample, which may interrupt the scientific imaging and add to sample photobleaching. Here we show that for oblique plane microscopes (OPM), a subset of LSFM where a single primary objective is used for illumination and detection, light-sheet stabilization can be achieved without expending sample fluorescence. Our method achieves ~43nm axial precision and maintains the light-sheet well within the depth of focus of the detection system for hour-long acquisition runs in a lab environment that would otherwise detune the system. We demonstrate subcellular imaging of the actin skeleton in melanoma cancer cells with a stabilized OPM.
著者: Trung Duc Nguyen, Amir Rahmani, Aleks Ponjavic, Alfred Millett-Sikking, Reto Fiolka
最終更新: 2024-12-02 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.29.626121
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.29.626121.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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