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Axolotli e AAV: Idee sulla Rigenerazione Nerveosa

La ricerca sugli axolotl svela nuovi metodi per studiare le connessioni nervose e la rigenerazione.

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Gli axolotli sono un tipo unico di salamandra noti per la loro capacità di rigenerare parti del corpo perse. Queste creature, native del Messico, possono curare lesioni nei loro nervi, rendendoli interessanti per gli scienziati che studiano come si formano e si riparano le connessioni nervose. I ricercatori sono particolarmente interessati a come gli axolotli possono rigenerare il midollo spinale e il cervello, dando loro il potenziale di insegnarci di più sulla rigenerazione nervosa in generale.

Comprendere i circuiti neuronali

Per studiare come i Neuroni si connettono e lavorano insieme, gli scienziati hanno usato varie tecniche. I metodi tradizionali includono la colorazione dei neuroni per vedere i loro percorsi, ma questi metodi hanno delle limitazioni. C'è bisogno di strumenti più efficaci per studiare come i neuroni negli axolotli si connettono e funzionano.

Metodi di consegna genica

Esistono vari metodi per inserire geni nelle cellule degli axolotli, compreso l'uso di virus. Alcuni virus, come il lentivirus e i virus associati ad adenovettori (AAV), sono stati usati per consegnare materiale genetico nei neuroni di altri animali. Tuttavia, usare questi metodi negli axolotli è stato complicato. L'uso del lentivirus negli axolotli non ha mostrato risultati forti. D'altra parte, gli AAV sono opzioni attraenti perché sono meno dannosi per le cellule, hanno minori possibilità di causare reazioni immunitarie e possono funzionare a lungo termine.

Scegliere il virus giusto

Gli scienziati hanno testato diversi tipi di AAV per vedere quali potessero infettare efficacemente il cervello e la Retina degli axolotli. Hanno esaminato sette diversi tipi di AAV e hanno scoperto che AAV8, AAV9, AAVRG e AAVPHP.eB erano particolarmente bravi a infettare i neuroni cerebrali. Nel frattempo, AAV9 si è rivelato la scelta migliore per infettare le cellule retiniche e studiare le connessioni tra la retina e il cervello.

Come ha funzionato il test

Per vedere quali AAV funzionassero meglio, i ricercatori hanno iniettato virus nei cervelli di piccoli axolotli. Hanno monitorato l'espressione di una proteina fluorescente per determinare quanto efficacemente gli AAV infettassero le cellule. I risultati hanno mostrato che AAV8, AAV9 e AAVPHP.eB erano i più efficaci, con AAV9 come scelta principale per le cellule retiniche. Sorprendentemente, i ricercatori hanno identificato un gruppo di cellule precedentemente sconosciuto che collega il cervello alla retina, suggerendo che questa connessione potrebbe essere importante per capire come queste creature vedono.

Analisi approfondita delle prestazioni degli AAV

Per capire quanto bene si siano comportati gli AAV, gli scienziati hanno guardato i tipi di cellule infettate e quante erano etichettate. Hanno usato marcatori specifici per vedere se la proteina fluorescente fosse presente nei neuroni rispetto alle cellule gliali (cellule di supporto nel sistema nervoso). I risultati hanno confermato che AAV8, AAV9 e AAVPHP.eB hanno principalmente preso di mira i neuroni piuttosto che le cellule gliali.

Risposta immunitaria e sicurezza

Quando si usano virus per la consegna genica, è fondamentale considerare la risposta immunitaria del corpo. Gli scienziati hanno esaminato se l'uso degli AAV causasse infiammazione o attivazione delle cellule immunitarie nei cervelli degli axolotli. La maggior parte dei tipi di AAV non ha innescato una risposta immunitaria significativa, ma AAVPHP.eB ha portato a un aumento evidente della presenza di cellule immunitarie. Questa scoperta è essenziale per il lavoro futuro, poiché i ricercatori devono garantire che qualsiasi metodo di consegna genica rimanga sicuro ed efficace.

Rintracciare le connessioni nel sistema nervoso

Un aspetto entusiasmante dell'uso degli AAV è la loro capacità di tracciare come i neuroni comunicano tra loro. Gli AAV possono viaggiare lungo il neurone e mostrare dove si formano o si rompono le connessioni. Questo metodo ha permesso ai ricercatori di esplorare le connessioni tra la retina e il cervello degli axolotli. Hanno iniettato AAV negli tetti ottici e hanno scoperto che AAV9 poteva etichettare efficacemente le cellule gangliari retiniche, che inviano segnali visivi dalla retina al cervello.

Scoprire nuovi percorsi neurali

Nella loro esplorazione, gli scienziati hanno scoperto che AAV9 poteva stabilire connessioni dal cervello alla retina, cosa che non era mai stata documentata negli axolotli prima. Tali scoperte migliorano la nostra comprensione di come le informazioni visive vengono elaborate in questi animali e sottolineano il potenziale per scoprire di più sui percorsi neurali in altre specie.

Esaminare le infezioni retiniche

Per valutare quanto bene gli AAV potessero infettare le cellule retiniche, i ricercatori le hanno iniettate direttamente nel vitreo (la sostanza chiara simile a gel all'interno dell'occhio). Hanno testato AAV8, AAV9 e AAVRG per la loro capacità di infettare le cellule retiniche. I dati hanno mostrato che AAV9 era il più efficace nel etichettare diversi tipi di cellule retiniche. In particolare, AAV9 ha etichettato non solo le cellule gangliari, ma anche altre cellule importanti della retina responsabili dell'elaborazione dei segnali visivi.

Conclusione

Questa ricerca sugli axolotli e gli AAV apre molte possibilità entusiasmanti. Utilizzando gli AAV per capire le connessioni tra retina e cervello, gli scienziati possono ottenere spunti su come funzionano questi sistemi. I risultati non solo contribuiscono alla nostra conoscenza della biologia degli axolotli, ma hanno anche implicazioni per studi più ampi sulla rigenerazione nervosa e sulla funzione dei circuiti in altri animali.

Direzioni future

Andando avanti, i ricercatori pianificano di utilizzare gli AAV per studiare il recupero dei circuiti neurali dopo un infortunio. Osservando come questi circuiti si ristabiliscono, gli scienziati possono saperne di più sul potenziale per la rigenerazione nervosa in altre specie, compresi gli esseri umani. Gli AAV sono anche uno strumento promettente per indagare questioni più complesse, come come creare trattamenti più efficaci per le lesioni nervose.

In generale, il lavoro svolto con gli axolotli e gli AAV evidenzia un'area di ricerca entusiasmante nelle neuroscienze che potrebbe portare a significativi progressi nella scienza medica e nella nostra comprensione del cervello e del sistema nervoso.

Fonte originale

Titolo: Adeno-associated viruses for efficient gene expression in the axolotl nervous system

Estratto: Axolotls are models for studying nervous system evolution, development, and regeneration. Tools to visualize and manipulate cells of the axolotl nervous system with high efficiency, spatial and temporal precision are therefore greatly required. Recombinant adeno-associated viruses (AAVs) are frequently used for in vivo gene transfer of the nervous system but virus-mediated gene delivery to the axolotl nervous system has not yet been described. Here, we demonstrate the use of AAVs for efficient gene transfer within the axolotl brain and the retina. We show that serotypes AAV8, AAV9, AAVRG and AAVPHP.eB are suitable viral vectors to infect both excitatory and inhibitory neuronal populations of the axolotl brain. We further use AAV9 to trace retrograde and anterograde projections between the retina and the brain and identify a cell population projecting from the brain to the retina. Together, our work establishes AAVs as a powerful tool to interrogate neuronal organization in the axolotl.

Autori: Katharina Lust, E. M. Tanaka

Ultimo aggiornamento: 2024-02-15 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.15.580426

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.15.580426.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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