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# La biologia # Ecologia

Rivoluzionare la ricerca sulla biodiversità con l'eDNA

Un nuovo database migliora gli studi sulla biodiversità analizzando il DNA ambientale.

Rubén González-Miguéns, Alex Gàlvez-Morante, Margarita Skamnelou, Meritxell Antó, Elena Casacuberta, Daniel J. Richter, Daniel Vaulot, Javier del Campo, Iñaki Ruiz-Trillo

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Il database di eDNA Il database di eDNA potenzia le informazioni sulla biodiversità della vita sulla Terra. Nuova database eKOI trasforma lo studio
Indice

Il Metabarcoding è un metodo moderno usato per studiare la biodiversità, in particolare la varietà di vita presente in vari habitat. Negli ultimi vent'anni, è diventato uno strumento preferito dai ricercatori perché consente di raccogliere dati senza i pregiudizi che i metodi tradizionali possono introdurre. Il campionamento tradizionale spesso prevede la raccolta fisica di campioni, il che può far perdere molti organismi, specialmente quelli minuscoli. Il metabarcoding permette agli scienziati di raccogliere e analizzare il DNA ambientale (eDNA), il che significa che possono rilevare organismi semplicemente campionando l'ambiente invece di doverli catturare prima.

Questa innovazione è un po' come riuscire a scoprire cosa c'è in una scatola senza aprirla. Basta guardare la polvere sopra per capire cosa c'era dentro. In questo caso, invece di polvere, gli scienziati stanno esaminando materiale genetico che fluttua nel suolo o nell'acqua.

Perché l'eDNA è Importante?

Il DNA ambientale è il materiale genetico che gli organismi lasciano intorno a loro. Può essere cellule della pelle, peli, feci o anche solo pezzi di DNA sparsi nell'ambiente. I ricercatori possono raccogliere campioni da posti come fiumi, laghi o suolo forestale e poi analizzare questo DNA per capire quali specie sono presenti. Questo metodo è particolarmente utile per creature difficili da trovare come insetti o microrganismi, che potrebbero essere trascurati dai metodi di campionamento tradizionali.

Immagina di contare tutti i pesci in un grande lago pescandoli uno a uno. Ci vorrebbe un'eternità, e probabilmente ti perderesti molti pesci che nuotano via. Ma se potessi semplicemente prendere un campione d'acqua e cercare il DNA dei pesci, otterresti un quadro molto più chiaro di cosa c'è lì dentro.

Geni Ribosomali e il Loro Ruolo

Uno dei metodi popolari per analizzare l'eDNA è quello di guardare ai geni ribosomali come il gene 18S rRNA. Questi geni si trovano in tutti gli esseri viventi e sono fondamentali per il funzionamento delle cellule. Il gene 18S è particolarmente utile perché ha regioni molto simili tra le specie, così come regioni più variate, aiutando gli scienziati a identificare le relazioni tra diversi tipi di organismi.

Tuttavia, il gene 18S ha anche dei lati negativi. Può essere un po' troppo "sicuro" quando si tratta di identificare specie strettamente correlate. Pensalo come cercare di distinguere due gemelli identici: a volte, semplicemente non riesci a farlo. Per aggirare questo problema, gli scienziati si sono rivolti ad altre regioni dei geni ribosomali o addirittura a diversi tipi di geni che potrebbero fornire distinzioni più chiare tra le specie.

Alla Ricerca di Marcatori Migliori

Un'alternativa al gene 18S è la regione del trascritto interno (ITS) dei geni ribosomali o geni come il citocromo ossidasi subunità I (COI). Il Gene COI è diventato abbastanza popolare come "codice a barre" per identificare gli animali, specialmente animali di grande importanza, come pesci o insetti.

Ci sono molti database che raccolgono questi "codici a barre" genetici per assistere i ricercatori. Tuttavia, molti di questi database si concentrano principalmente su determinati gruppi, come gli animali, e potrebbero trascurare altri gruppi importanti, come funghi o piccole creature marine.

Immagina di entrare in una biblioteca dove la maggior parte dei libri parla di gatti, e tu stai cercando una storia sulle rane. Saresti sfortunato! La stessa cosa succede quando i ricercatori cercano dati genetici per alcuni gruppi di organismi: può essere difficile quando i database non sono completi.

La Necessità di un Nuovo Database

Riconoscendo le lacune nei database esistenti, i ricercatori hanno deciso di crearne uno nuovo focalizzato sul gene COI, che copre un'ampia gamma di organismi. Questo nuovo database mirava a includere una maggiore varietà di forme di vita, specialmente da gruppi che potrebbero non aver ricevuto abbastanza attenzione nella ricerca precedente.

Si sono rimboccati le maniche e hanno raccolto tutti i dati COI disponibili da varie fonti. Questi dati provenivano da database ad accesso aperto e richiedevano un meticoloso processo di pulizia per garantire che tutto fosse accurato. Il risultato è stata una collezione ben organizzata di informazioni che avrebbe permesso agli scienziati di identificare un numero maggiore di specie utilizzando il metabarcoding.

Pulire i Dati

Costruire un database non è semplice come gettare tutti i dati in un grande pentolone e mescolare. È necessaria una cura meticolosa per un risultato di successo. Mentre compilavano i dati, i ricercatori dovevano rimuovere i duplicati, eliminare le sequenze che erano troppo corte o troppo lunghe e assicurarsi che le informazioni fossero il più pulite e precise possibile.

Era come fare un frullato ben mixato; se accidentalmente butti dentro una buccia di banana vecchia o pezzi di ghiaccio che non si sono mai amalgamati, non vorresti servirlo ai tuoi ospiti, giusto? Lo stesso principio si applica a un database scientifico. Ogni sequenza è stata controllata e ricontrollata per assicurarsi che fosse utile per studi tassonomici.

Aggiungere Altri Ingredienti

Dopo aver curato le sequenze del gene COI, i ricercatori le hanno unite a dati genetici provenienti da genomi mitocondriali completi. I genomi mitocondriali sono fondamentalmente le centrali energetiche delle cellule e ospitano DNA vitale che informa molti aspetti della biologia di un organismo. I ricercatori hanno garantito che tutto fosse etichettato correttamente. Non è stato affatto facile, specialmente visto che alcune sequenze avevano parti erratamente etichettate o persino contaminazioni di altri organismi.

Per verificare l'integrità delle sequenze raccolte, hanno condotto esperimenti utilizzando la Reazione a Catena della Polimerasi (PCR). Questo è un metodo che consente agli scienziati di amplificare piccole quantità di DNA, rendendo più facile lavorarci. Proprio come prendere un'eco di un suono per ascoltarlo più chiaramente, la PCR aiuta a rendere frammenti di DNA piccoli e difficili da rilevare molto più evidenti.

Creare un Database Facile da Usare

Con i dati puliti e organizzati, il passo successivo è stato presentarli in modo facile da usare. Hanno sviluppato un nuovo database tassonomico che consentisse ai ricercatori di trovare, accedere e utilizzare facilmente le informazioni. Questo è stato fatto creando categorie standardizzate che aiutassero a garantire che ogni pezzo di dato si adattasse bene al suo posto designato, proprio come una dispensa ben organizzata.

Creare una tassonomia standardizzata è vitale perché permette ai ricercatori di comunicare efficacemente riguardo ai loro risultati. Ad esempio, se una persona dice "mela rossa" e un'altra dice "mela che è rossa", si riferiscono entrambe alla stessa cosa, ma le parole potrebbero confondere le discussioni. Avere uno standard fisso garantisce che tutti siano sulla stessa lunghezza d'onda.

Testare il Database

Una volta che tutto era impostato, era tempo di testare l'efficacia del database. I ricercatori hanno esaminato 15 studi diversi che utilizzavano il metabarcoding COI, analizzando quanto bene il nuovo database potesse identificare organismi dai campioni di eDNA.

Capire questa enorme quantità di dati non è stato facile. Per visualizzare i risultati, hanno creato alberi filogenetici per aiutare a illustrare le relazioni tra le diverse specie identificate attraverso il loro lavoro. Questo era un modo per vedere come il DNA si traducesse in quali organismi erano presenti in ogni studio, un po' come tracciare un albero genealogico.

Cosa Hanno Trovato?

Quando i ricercatori si sono immersi nei loro dati e hanno applicato il nuovo database, hanno ricevuto un'entusiasmante gamma di scoperte. Utilizzando il database eKOI aggiornato, sono stati in grado di identificare molti organismi, inclusi alcuni che erano stati trascurati in precedenza.

Tra le scoperte c'erano gruppi precedentemente sottorappresentati come i coanoflagellati e i Picozoa. In parole povere, questi erano piccoli protisti che erano scivolati attraverso le crepe degli studi precedenti. Avere un database più ampio ha aiutato i ricercatori a far luce su questi organismi trascurati, dipingendo un quadro più chiaro della diversità ecologica che c'è nel mondo.

I Vantaggi dell'eKOI

Il database eKOI si distingue perché migliora la ricerca sugli organismi eucarioti. Con sequenze curate più accuratamente, i ricercatori possono fare migliori assegnazioni tassonomiche, specialmente per gruppi che erano stati difficili da identificare correttamente.

Ecco un po' di umorismo per te: se questo database fosse un ristorante, potresti dire che offre un menu a buffet invece di solo hamburger. Puoi assaporare una varietà più ampia di piatti invece di dover accontentarti solo di una o due opzioni!

Colmando le lacune nei database esistenti e offrendo un approccio più inclusivo alla ricerca dell'eDNA, l'eKOI consente a più scienziati di studiare l'ampia gamma di forme di vita — specialmente quelle piccole, spesso ignorate.

Applicazioni Future

E adesso? Beh, il database eKOI apre molte possibilità per la ricerca futura. Può aiutare nello sviluppo di primer specifici mirati a diversi taxa, simile a quanto è stato fatto con i geni ribosomali. Questo significa che i ricercatori possono progettare nuovi strumenti per mirare a organismi specifici e andare ancora più a fondo nella loro comprensione.

Pensalo come impostare una trappola esca speciale per certi pesci invece di gettare una rete e sperare per il meglio. Il targeting specifico consente studi più precisi che possono fornire preziose intuizioni sull'ecosistema, comprese le modalità di interazione, evoluzione e risposta delle popolazioni ai cambiamenti ambientali.

Pensieri Finali

Il database eKOI contribuisce in modo significativo al campo della ricerca sulla biodiversità. Fornendo una risorsa robusta e completa per assegnazioni tassonomiche utilizzando il gene COI, i ricercatori possono superare le aspettative in termini di comprensione della diversità di vita che esiste nel nostro mondo.

In poche parole, pensa al database eKOI come a una guida fidata in una vasta foresta di biodiversità, aiutando gli scienziati a orientarsi attraverso sentieri sconosciuti e scoprire i tesori nascosti della vita eucariotica. Questo nuovo strumento può spingere i confini di come studiamo e comprendiamo la vita sulla Terra, guidando verso la scoperta dei misteri proprio sotto il nostro naso— o, meglio, sotto i laghi, nel suolo e nelle profondità dei nostri oceani!

Fonte originale

Titolo: A Novel Taxonomic Database for eukaryotic Mitochondrial Cytochrome Oxidase subunit I Gene (eKOI): Enhancing taxonomic resolution at community-level in metabarcoding analyses

Estratto: Metabarcoding has emerged as a robust method for understanding biodiversity patterns by retrieving environmental DNA (eDNA) directly from ecosystems. Its low cost and accessibility have extended its use across biological topics, from symbiosis to biogeography, and ecology. A successful metabarcoding application depends on accurate and comprehensive reference databases for proper taxonomic assignment. The 18S rRNA gene is the primary genetic marker used for general/broad eukaryotic metabarcoding due to its combination of conserved and hypervariable regions, and the availability of extensive taxonomically-informed reference databases like PR2 and SILVA. Despite its advantages, 18S rRNA has certain limitations at lower taxonomic levels, depending on the lineage. Alternative fast-evolving molecular markers, such as the mitochondrial cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, have been adopted as widely used "barcoding genes" for eukaryotes due to their resolution to the species level. However, the COI gene lacks a curated taxonomically-informed database covering all eukaryotes, including protists, comparable to those available for 18S rRNA. To address this gap, we introduce eKOI, a curated COI gene database aimed at enhancing the taxonomic annotation and primer design for COI-based metabarcoding at the community level. This database integrates COI gene data from GenBank and mitochondrial genomes that are publicly available, followed by rigorous manual curation to eliminate redundancies and contaminants and to correct taxonomic annotations. We validate using the eKOI database for taxonomic annotation of protists by re-annotating several COI-based metabarcoding studies, revealing previously unidentified biodiversity. Phylogenetic analyses confirmed the accuracy of the taxonomic annotations, highlighting the potential of eKOI to uncover new biodiversity in various eukaryotic lineages.

Autori: Rubén González-Miguéns, Alex Gàlvez-Morante, Margarita Skamnelou, Meritxell Antó, Elena Casacuberta, Daniel J. Richter, Daniel Vaulot, Javier del Campo, Iñaki Ruiz-Trillo

Ultimo aggiornamento: 2024-12-09 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.626972

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.626972.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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