La Danza del DNA: Come l'Ambiente Influenza le Sue Mosse
Scopri come diverse sostanze influenzano il comportamento del DNA dentro le cellule.
Parth Rakesh Desai, John F. Marko
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Indice
- Cos'è il Supercoiling del DNA?
- L'Ambiente Caotico delle Cellule
- Glicerolo: Il Performer Subdolo
- Glicole Etilenico: L'Osservatore Silenzioso
- Polietilenglicole (PEG): Il Trasformatore
- Come Studiano Questo gli Scienziati?
- I Risultati: Risultati Sorprendenti
- Applicazioni Nella Vita Reale
- Il Grande Quadro
- Fonte originale
Il DNA, la famosa molecola che contiene il nostro codice genetico, non è solo in giro per conto suo. Nelle cellule viventi, è influenzato da molte altre molecole, che possono cambiare il modo in cui si comporta. Immagina il DNA come un noodle di spaghetti che si attorciglia e si contorce, ma quando butti dentro qualche ingrediente extra in pentola, cambia forma e come reagisce al tuo modo di cucinare. In questo caso, quegli ingredienti sono vari composti chimici che si trovano nelle cellule.
Cos'è il Supercoiling del DNA?
Il supercoiling del DNA è un termine fancoso per indicare il DNA che è attorcigliato stretto. Pensalo come se stessi attorcigliando un elastico. Quando lo giri troppo, inizia a ripiegarsi su se stesso, creando anelli o nodi. Il supercoiling è importante per la capacità del DNA di adattarsi all'infinitesimale spazio di una cellula e aiuta in processi come la replicazione del DNA e l'espressione genica.
Ora, il DNA può essere supercoils positivo, dove è attorcigliato in una direzione, o supercoils negativo, dove è attorcigliato dall'altra parte. Proprio come decidere se girare il tuo elastico in senso orario o antiorario, queste due forme hanno effetti diversi su come funziona il DNA.
L'Ambiente Caotico delle Cellule
Dentro una cellula, il DNA non fluttua da solo; ha un sacco di compagni. Ci sono proteine, sali e altre molecole organiche che affollano l'ambiente del DNA, rendendolo piuttosto affollato. Questa folla può influenzare come si comporta il DNA, proprio come se ci fossero troppi cuochi in cucina che possono rovinare il brodo.
Un tipo importante di molecola che influisce sul DNA sono i soluti. Questi possono essere pensati come ingredienti che possono aiutare o ostacolare le prestazioni del DNA. Ad esempio, quando aggiungiamo Glicerolo o Glicole Etilenico a una soluzione contenente DNA, può cambiare il modo in cui il DNA si attorciglia e si contorce.
Glicerolo: Il Performer Subdolo
Il glicerolo è una sostanza comune che viene spesso usata nei laboratori per aiutare a mantenere il DNA stabile. Tuttavia, può effettivamente rendere il DNA meno stabile quando si tratta di cambiamenti di temperatura. In termini più semplici, il glicerolo può far sì che il DNA sia più propenso ad aprirsi e separare i suoi filamenti quando le cose si scaldano. Ma quando si tratta di stress meccanico—come essere attorcigliato—il glicerolo ha anche la capacità di aumentare la separazione dei filamenti nel DNA, il che significa che può far sì che il DNA si sfili più facilmente.
Immagina di cercare di attorcigliare un elastico, ma il tuo amico (glicerolo) continua a allentarlo. Quindi mentre cerchi di supercoilare il tuo elastico, non collaborerà bene come prima.
Glicole Etilenico: L'Osservatore Silenzioso
Poi abbiamo il glicole etilenico, un cugino stretto del glicerolo. La cosa interessante del glicole etilenico è che, mentre può anche cambiare la temperatura di fusione del DNA, non ha gli stessi effetti quando si tratta di causare la separazione dei filamenti. Sotto stress meccanico, il glicole etilenico non influisce significativamente sul supercoiling del DNA. È come un amico che ti guarda semplicemente mentre attorcigli quell'elastico senza cercare di aiutare o ostacolare.
Polietilenglicole (PEG): Il Trasformatore
Ora, parliamo del polietilenglicole, o PEG in breve. Il PEG può a volte far sì che il DNA diventi compatto, proprio come quando metti troppi vestiti in una valigia che rende difficile chiuderla. Quando usiamo PEG di peso molecolare più elevato, genera una risposta unica nel DNA. Invece di far separare il DNA, il PEG può effettivamente sopprimere la separazione locale dei filamenti nel DNA supercoils negativo.
Questo significa che quando il PEG è intorno, il DNA può essere meno propenso ad aprire i suoi filamenti, rendendolo più stabile. È come se il PEG fosse il buttafuori alla porta di un club, mantenendo le cose in ordine e prevenendo la separazione indesiderata dei filamenti.
Come Studiano Questo gli Scienziati?
Per capirlo, gli scienziati usano una tecnica chiamata pinzette magnetiche a singola molecola. Questo potrebbe sembrare qualcosa uscito da un film di fantascienza, ma è un modo ingegnoso per studiare il DNA. Le pinzette possono allungare e attorcigliare una singola molecola di DNA mentre misurano come reagisce.
Usando questa tecnica, gli scienziati possono misurare come il DNA risponde ai cambiamenti nel suo ambiente, come la presenza di agenti affollanti o disidratanti come glicerolo, glicole etilenico o PEG. Possono vedere se il DNA diventa più lungo o più corto, quanto si attorciglia o quando forma anelli.
I Risultati: Risultati Sorprendenti
La parte divertente di tutta questa esplorazione è ciò che hanno trovato gli scienziati. Il glicerolo, di cui già sappiamo che aiuta con la stabilità termica, allenta anche le cose sotto stress meccanico. Quando è presente il glicerolo, aumenta la separazione locale dei filamenti sia nel DNA supercoils positivo che negativo. Questo mostra quanto influenza questo composto sul nostro amato DNA.
D'altra parte, il glicole etilenico è stato un po' noioso. Non ha influenzato significativamente il supercoiling del DNA sotto stress. Si è comportato come quel tuo amico che non contribuisce realmente al divertimento di un'uscita di gruppo.
Al contrario, il PEG è stato la stella dello spettacolo. Ha soppressato la separazione locale dei filamenti nel DNA supercoils negativo e ha reso più facile per il DNA mantenere la sua struttura. Questo dimostra che diversi agenti hanno ruoli unici quando si tratta dell'ambiente del DNA.
Applicazioni Nella Vita Reale
Capire come i co-soluti influenzano il DNA è importante per diverse ragioni. Innanzitutto, può aiutare gli scienziati a comprendere meglio come si comporta il DNA negli organismi viventi. Poiché le cellule viventi sono affollate da molti tipi diversi di molecole, ciò che vediamo nei test di laboratorio con il DNA potrebbe non sempre applicarsi a ciò che succede nella vita reale.
Per i ricercatori, i risultati possono aiutare a migliorare esperimenti coinvolgenti DNA e proteine. Se il DNA si comporta in modo diverso in condizioni affollate, allora gli scienziati devono tenerne conto quando utilizzano studi in vitro (in provette) per fare previsioni su ciò che accade in vivo (negli organismi viventi).
Il Grande Quadro
Alla fine, lo studio di come diverse sostanze influenzano il supercoiling del DNA evidenzia la complessità della biologia molecolare. Il DNA è influenzato non solo da se stesso, ma dal suo intero ambiente circostante. Queste interazioni e dinamiche sono importanti per una corretta comprensione di come funziona il DNA e come interagisce con altre molecole.
Quindi, la prossima volta che pensi al DNA, non pensarlo solo come una semplice doppia elica. Pensalo come un ballerino in una stanza affollata, che risponde alle melodie suonate dai suoi vari compagni. Con la giusta quantità di glicerolo o PEG, la performance può essere fluida o goffa, a seconda del momento. E questo è ciò che rende lo studio del DNA così entusiasmante!
Fonte originale
Titolo: Molecular Crowding Suppresses Mechanical Stress-Driven DNA Strand Separation
Estratto: Molecular crowding influences DNA mechanics and DNA - protein interactions and is ubiquitous in living cells. Quantifying the effects of molecular crowding on DNA supercoiling is essential to relating in-vitro experiments to in-vivo DNA supercoiling. We use single molecule magnetic tweezers to study DNA supercoiling in the presence of dehydrating or crowding co-solutes. To study DNA supercoiling, we apply a stretching force of 0.8 pN to the DNA and then rotate one end of the DNA to induce supercoiling. In a 200 mM NaCl buffer without co-solutes, negatively supercoiled DNA absorbs some of the tortional stress by forming locally melted DNA regions. The base-pairs in these locally melted regions are believed to adopt a configuration where nucleotide base pairing is disrupted. We find that the presence of dehydrating co-solutes like glycerol and ethylene glycol results in further destabilization of base-pairs in negatively supercoiled DNA. The presence of polyethylene glycol, commonly used as crowding agents, suppresses local strand separation and results in plectoneme formation even when DNA is negatively supercoiled. The results presented in this letter suggest many further directions for studies of DNA supercoiling and supercoiled DNA - protein interactions in molecular conditions that approximate in-vivo molecular composition. SIGNIFICANCEAccurate modelling of DNA mechanics is central to interpreting results of single molecule studies of DNA mechanics and DNA-protein interactions. While the effect of molecular conditions on short and relaxed DNA has been studied, the influence of molecular conditions on DNA supercoiling has not been explored. We present the first single molecule study of DNA supercoiling in presence of crowding and dehydrating co-solutes. We observe that co-solutes can increase or completely suppress stress-driven local strand separation in negatively supercoiled DNA. This change of DNA supercoiling is likely to significantly affect the function of DNA-binding proteins. Our results motivate the need for systematic exploration of DNA supercoiling in presence of co-solutes to accurately relate in-vitro DNA-protein interactions to in-vivo DNA-protein interactions.
Autori: Parth Rakesh Desai, John F. Marko
Ultimo aggiornamento: 2024-12-12 00:00:00
Lingua: English
URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.11.628023
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.11.628023.full.pdf
Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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