CRISPR/Cas9 : L'avenir de l'édition génétique
Découvre comment CRISPR/Cas9 transforme l'édition génétique et l'ingénierie microbienne.
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Table des matières
- Comment ça marche CRISPR/Cas9
- Importance de l'Édition génétique en ingénierie microbienne
- Défis d'utilisation de CRISPR/Cas9
- Utiliser l'apprentissage profond pour améliorer la conception des sgRNA
- Tester les sgRNA générés
- Réaliser de grandes suppressions dans l'ADN
- Édition génétique multiplex
- Affiner l'expression des gènes avec CRISPRi
- Conclusion
- Source originale
CRISPR/Cas9 est un outil que les scientifiques utilisent pour changer l'ADN des organismes vivants. Ce système vient des bactéries et les aide à se défendre contre les virus. Les chercheurs ont trouvé ça super utile pour modifier des gènes, rendant plus facile de changer des traits chez les plantes, les animaux, et même les humains.
Comment ça marche CRISPR/Cas9
Les parties principales du système CRISPR/Cas9 incluent la protéine Cas9 et des molécules d'ARN appelées crRNA et tracrRNA. Cas9 est la partie qui coupe l'ADN, tandis que l'ARN l'emmène au bon endroit dans l'ADN. Quand les scientifiques veulent modifier un gène, ils créent un ARN spécial qui correspond à la séquence d'ADN cible. Cet ARN aide Cas9 à trouver le bon endroit pour faire une coupure dans l'ADN.
Pour simplifier le truc, les chercheurs ont combiné le crRNA et le tracrRNA en un seul morceau appelé ARN guide unique (sgRNA). Ce nouveau sgRNA peut diriger Cas9 pour couper l'ADN de manière efficace.
Édition génétique en ingénierie microbienne
Importance de l'Contrôler comment les gènes fonctionnent est super important dans des domaines comme l'ingénierie microbienne. Par exemple, les scientifiques essaient de créer des microbes capables de produire des biocarburants ou d'autres substances précieuses. Pour ça, ils doivent souvent éditer plusieurs gènes en même temps pour optimiser l'utilisation des nutriments par les microbes.
Avec CRISPR/Cas9, les chercheurs ont pu modifier plusieurs gènes à la fois, améliorant l'efficacité des microbes dans l'utilisation de différents sucres. Ça a conduit à de grosses augmentations des taux de production de certains produits.
Défis d'utilisation de CRISPR/Cas9
Un des principaux défis avec CRISPR/Cas9, c'est que le système peut être compliqué. Créer plusieurs sgRNA pour cibler différents gènes peut poser des problèmes. Si les sgRNA sont similaires, ça peut créer des soucis quand on essaie de joindre les morceaux d'ADN. Ça peut causer des mutations et rendre l'ADN instable.
De plus, contrôler combien un gène est exprimé peut être difficile. Les chercheurs veulent contrôler précisément l'activité des gènes pour équilibrer croissance et production chez les microbes.
Certaines études se sont concentrées sur la création de sgRNA qui n'ont pas de séquences répétées. Ça réduit les problèmes liés à l'utilisation de séquences d'ADN similaires et augmente les chances de succès dans l'édition génétique.
Utiliser l'apprentissage profond pour améliorer la conception des sgRNA
Pour créer de meilleurs sgRNA, les chercheurs se tournent vers la technologie informatique. Ils utilisent l'apprentissage profond, un type d'intelligence artificielle, pour concevoir des sgRNA qui sont divers et efficaces.
En entraînant un modèle informatique sur une grande base de données de séquences d'ARN, les scientifiques peuvent générer de nouveaux sgRNA qui ont de fortes chances de bien fonctionner. Le but, c’est de créer des sgRNA uniques et efficaces pour cibler des gènes spécifiques.
Tester les sgRNA générés
Une fois que les sgRNA sont créés, il faut les tester pour voir s'ils fonctionnent. Les chercheurs utilisent des bactéries comme hôtes pour vérifier à quel point ces sgRNA peuvent couper l'ADN. En ciblant des gènes spécifiques, les scientifiques peuvent voir combien les sgRNA font leur boulot efficacement.
Beaucoup des sgRNA créés par apprentissage profond ont montré qu'ils fonctionnaient bien. Les chercheurs ont trouvé que certains avaient une activité très élevée, tandis que d'autres étaient moins efficaces.
Réaliser de grandes suppressions dans l'ADN
Une autre application importante de CRISPR/Cas9 est de supprimer de grandes sections d'ADN. Les chercheurs ont testé leurs sgRNA sur de longs morceaux d'ADN et ont trouvé qu'ils pouvaient réussir à éliminer ces sections avec une bonne efficacité.
Cette capacité à supprimer de gros fragments peut aider les chercheurs à simplifier les génomes microbiens en enlevant des gènes inutiles qui interfèrent avec les voies de production.
Édition génétique multiplex
L’édition génétique multiplex, c’est cibler plusieurs gènes à la fois pour les modifier. Ça peut vraiment accélérer le travail nécessaire pour créer une souche microbienne avec des traits spécifiques.
En testant, les scientifiques ont réussi à cibler plusieurs gènes en même temps avec les sgRNA conçus par apprentissage profond. Cette capacité signifie que des changements complexes peuvent être effectués en une seule fois, réduisant le temps et l’effort nécessaires.
CRISPRi
Affiner l'expression des gènes avecParfois, les scientifiques ne veulent pas complètement éteindre un gène, mais juste ajuster son niveau d'activité. C’est là qu’un système appelé interférence CRISPR (CRISPRi) entre en jeu. Avec CRISPRi, les chercheurs peuvent utiliser des sgRNA spécialement conçus pour diminuer l'activité des gènes au lieu de les couper.
Grâce à des expériences, les chercheurs ont découvert qu'ils pouvaient obtenir différents niveaux de répression des gènes en utilisant différents sgRNA. Ce contrôle offre plus de flexibilité en ingénierie métabolique, aidant à équilibrer croissance et production sans arrêter complètement le gène.
Conclusion
La technologie CRISPR/Cas9 représente une avancée majeure dans l'édition génétique. Les scientifiques peuvent maintenant modifier l'ADN avec une grande précision, et en utilisant l'apprentissage profond, ils peuvent créer de meilleurs sgRNA pour leur travail.
Ces développements ouvrent de nouvelles possibilités dans des domaines comme l'ingénierie microbienne, où optimiser la fonction des gènes peut mener à une meilleure production de composés précieux. La capacité d'éditer plusieurs gènes à la fois et d'affiner l'expression des gènes donne aux chercheurs des outils puissants pour relever des défis biologiques complexes.
Dans l'ensemble, l'avenir de l'édition génétique semble prometteur, avec des recherches en cours pour améliorer les techniques et élargir leurs applications en biologie synthétique et au-delà.
Titre: Design nonrepetitive and diverse activity single-guide RNA by deep learning
Résumé: Multiplex and precise control of the gene expression based on CRISPR/Cas9 is important to metabolic regulation in synthetic biology. However, employing single guide RNAs (sgRNAs) that possess repetitive DNA sequences and exhibit uniform activity could detrimentally affect the editing process, undermining both its stability and regulatory potential. In this study, we developed a deep generative model based on a decoder-only Transformer architecture (sgRNAGen) for the de novo generation of a series of nonrepetitive and diverse sgRNAs with activity. To assess the quality of sgRNAs generated by sgRNAGen, we evaluated their activity by targeting essential genes, with the results indicating that 98% of the generated sgRNAs were active in Bacillus subtilis. The generated sgRNAs were further validated for applications in single-gene editing, large fragment knockouts, and multiplex editing. Notably, the efficiency of knocking out long fragments up to 169.5 kb reached 100%, and targeting multiple sites allowed for the creation of strains with various combinations of mutations in a single editing. Furthermore, we developed a CRISPRi system utilizing the designed sgRNAs to regulate gene expression with desired strength and high precision. SgRNAGen offers a method for devising nonrepetitive and diverse activity sgRNAs, enhancing metabolic control and advancing applications within synthetic biology. TOC O_FIG O_LINKSMALLFIG WIDTH=200 HEIGHT=112 SRC="FIGDIR/small/596019v1_ufig1.gif" ALT="Figure 1"> View larger version (30K): [email protected]@151f5e2org.highwire.dtl.DTLVardef@1e5cb28org.highwire.dtl.DTLVardef@17cd3f8_HPS_FORMAT_FIGEXP M_FIG C_FIG
Auteurs: Shuyuan Guo, Y. Xia, Z. Liang, X. Du, D. Cao, J. Li, L. Sun, Y.-X. Huo
Dernière mise à jour: 2024-05-31 00:00:00
Langue: English
Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.30.596019
Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.30.596019.full.pdf
Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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