Lutter contre la rage : De nouvelles méthodes de test à l'horizon
Des techniques innovantes pourraient améliorer la détection et le contrôle de la rage dans le monde entier.
Daria L. Manalo, Jude Karlo G. Bolivar, Jeromir G. Bondoc, Blanca J. Nagataki, Leilanie B. Nacion, Mark Joseph M. Espino, Chun-Ho Park, Satoshi Inoue
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Table des matières
- L'Importance de la Détection Précoce
- Avancées dans les Tests de Rage
- Collecte d'Échantillons pour les Tests
- Extraction de l'ARN pour les Tests
- Mise en Place du Test RT-qPCR
- Validation du Test pour la Précision
- Résultats des Tests
- Le Chemin à Suivre pour le Contrôle de la Rage
- Conclusion
- Source originale
La rage, c'est une maladie grave causée par un virus qui affecte le système nerveux central et qui peut mener à la mort si on ne la traite pas rapidement. La majorité des cas de rage chez l'homme viennent de chiens infectés, représentant environ 99%. Le virus se propage surtout par les morsures. On peut aussi l'attraper par des égratignures ou des plaies ouvertes qui entrent en contact avec la salive d'un animal infecté. Même si on peut prévenir la rage avec un vaccin, ça reste un problème de santé inquiétant, surtout dans les pays avec peu de ressources.
Chaque année, plus de 59 000 personnes meurent de la rage dans le monde, ce qui représente une perte économique considérable, estimée à environ 8,6 milliards de dollars. Les Philippines sont un des principaux foyers de rage, avec environ 200 à 300 cas signalés chaque année. Pour répondre à ce problème persistant, le gouvernement a mis en place la loi anti-rage en 2007. Malheureusement, malgré ces efforts, le nombre de cas de rage n'a pas vraiment diminué entre 2006 et 2015.
L'Importance de la Détection Précoce
La détection et le traitement précoces sont super importants pour réduire les chances de mourir de la rage. La méthode la plus utilisée pour détecter la rage chez les animaux s'appelle le test d'anticorps fluorescents directs (dFAT). Ce test nécessite un échantillon de Tissu cérébral pour trouver le virus de la rage. Bien qu'il soit rapide et précis, son efficacité diminue quand le tissu cérébral se décompose, ce qui est un gros souci dans des climats chauds comme aux Philippines.
Dans des conditions tropicales, les Échantillons de cerveau peuvent se gâter rapidement, ce qui les rend inutilisables pour les tests. Des recherches montrent que quand le tissu cérébral est conservé à des températures élevées, la capacité à détecter le virus diminue rapidement. Cependant, l'ARN viable des échantillons de cerveau peut être identifié pendant une période plus longue même à des températures élevées.
Avancées dans les Tests de Rage
Pour améliorer les tests de rage, les scientifiques explorent de nouvelles méthodes qui offrent une meilleure sensibilité et rapidité. Une approche prometteuse est l'utilisation de la réaction de transcription inverse par polymérase (RT-PCR). Cette technique peut détecter le virus de la rage dans des tissus qui pourraient avoir des niveaux bas du virus, comme la salive ou des biopsies cutanées.
Bien que les méthodes traditionnelles de RT-PCR puissent parfois donner des faux positifs à cause de la contamination, les versions plus récentes de ce test ont une précision accrue. L'essai LN34 Pan-Lyssavirus est une méthode RT-PCR populaire qui détecte une large gamme de virus de la rage et montre une grande sensibilité.
Collecte d'Échantillons pour les Tests
Pour mener des recherches sur la rage, les scientifiques doivent collecter des échantillons. Pour cela, ils prennent du tissu cérébral, ainsi que d'autres tissus comme la peau du nez et les follicules cutanés des chiens. Ces échantillons sont ensuite conservés à des températures de congélation jusqu'à ce qu'ils soient prêts pour l'analyse.
Collecter des échantillons de cerveau implique un processus détaillé. Ça commence par retirer soigneusement le crâne pour accéder au cerveau. Les chercheurs prennent des échantillons de zones spécifiques du cerveau connues pour avoir des quantités plus élevées du virus.
D'autres échantillons, comme les complexes de sinus folliculaires et le planum nasal, nécessitent des techniques différentes. Pour ces échantillons, de petites incisions sont faites pour collecter le tissu.
Extraction de l'ARN pour les Tests
Une fois les échantillons collectés, les chercheurs doivent extraire l'ARN, qui est une copie du matériel génétique du virus. Ça implique de décomposer le tissu et d'utiliser des kits spéciaux pour isoler l'ARN. L'ARN extrait est ensuite conservé à des températures ultra-basses jusqu'à ce qu'il soit nécessaire pour les tests.
En utilisant l'ARN extrait des échantillons de cerveau positifs, les scientifiques effectuent des tests RT-qPCR pour détecter le virus de la rage. Des échantillons de contrôle positifs sont utilisés pour s'assurer que les tests fonctionnent correctement.
Mise en Place du Test RT-qPCR
Les tests RT-qPCR nécessitent des conditions spécifiques. Ça inclut de trouver la bonne température pour le test, ainsi que la quantité correcte de primers et de sondes nécessaires pour détecter le virus. Les chercheurs expérimentent avec différentes températures et concentrations pour trouver la configuration optimale pour le test.
Pendant ce processus, ils examinent l'efficacité de l'essai en créant une courbe de référence. Cette courbe aide à déterminer à quel point l'essai peut détecter le virus à différentes concentrations.
Validation du Test pour la Précision
La validation est cruciale dans le test de nouvelles méthodes. Pendant ce processus, l'essai est testé contre des échantillons connus comme positifs et négatifs pour mesurer sa précision. Les tests visent à s'assurer que l'essai identifie correctement la rage et ne la confond pas avec d'autres virus canins.
Les chercheurs doivent aussi vérifier que l'essai peut donner des résultats similaires quand il est réalisé par différentes personnes ou avec différentes machines. Des résultats cohérents aident à confirmer la fiabilité du test.
Résultats des Tests
Après une validation approfondie, l'essai RT-qPCR optimisé a montré des résultats prometteurs. Il a démontré la capacité à détecter l'ARN du virus de la rage dans des échantillons de cerveau positifs et d'autres échantillons non cérébraux. En fait, tous les échantillons testés ont montré des résultats fiables, ce qui est une bonne nouvelle pour les efforts de surveillance de la rage en cours.
Cependant, quelques défis ont été identifiés. Certains échantillons précédemment étiquetés comme négatifs ont donné des résultats positifs. Cette différence pourrait survenir à cause de niveaux bas du virus qui étaient indétectables par d'autres méthodes de test, ce qui soulève le besoin d'améliorer continuellement la précision des tests.
Le Chemin à Suivre pour le Contrôle de la Rage
Les organisations de santé publique dans le monde entier travaillent pour éliminer la rage, avec pour objectif d'atteindre zéro décès dus à la rage médiée par les chiens d'ici 2030. Améliorer les méthodes de diagnostic est une partie clé de cet objectif. L'essai RT-qPCR récemment développé peut aider à accélérer les tests et améliorer les efforts de surveillance de la rage.
Cependant, l'essai actuel est quelque peu limité à des types d'échantillons spécifiques. Les recherches futures doivent explorer d'autres sources potentielles d'échantillons pour les tests de rage. De plus, de nouvelles méthodes de test devraient être développées pour réduire les coûts afin de les rendre plus accessibles.
Conclusion
La rage représente une menace significative pour la santé publique, surtout dans les endroits où les morsures de chien sont fréquentes. Bien qu'il y ait des vaccins disponibles, la rage continue de faire des milliers de victimes chaque année. Des méthodes de test améliorées, comme le nouvel essai RT-qPCR, représentent une voie à suivre. Ce test peut aider à une détection plus rapide et plus efficace de la rage, contribuant finalement à une meilleure gestion et contrôle de la maladie.
Alors qu'on aspire à un monde sans rage, la recherche continue et l'innovation seront essentielles pour surmonter les défis à venir. Après tout, on pourrait tous bénéficier d'un monde où on peut se balader avec nos amis à fourrure sans s'inquiéter de la rage.
Source originale
Titre: Development and validation of a real-time PCR assay for the diagnosis of rabies virus Philippine strain in non-brain samples
Résumé: Rabies is a fatal neurotropic and zoonotic disease responsible for thousands of deaths yearly. Direct fluorescent antibody test (dFAT), the gold standard in routine rabies diagnosis, requires dog brain samples, and takes 5-7 hours to obtain results. Brain specimen degradation due to inappropriate transport and storage conditions most of the time leads to false negative results, hence the need for an alternative diagnostic method that can also utilize non-brain specimens. In this study, an RT-qPCR assay was developed to specifically target the N gene of the Philippine rabies isolate. The assay was optimized using RNA from dFAT-positive dog brain tissues as templates. In-silico and in vitro evaluations both showed 100% specificity to rabies RNA, with a detection limit of 1 copy per microliter. Validation of the assay was done using dFAT-tested brain samples and potential brain specimen-alternates, specifically the dog nasal planum (NP) and follicle sinus complex (FSC). One hundred percent of the NP and FSC samples showed concordance with the respective dFAT-positive brain samples. Only 97% concordance was observed with the dFAT-negative brain samples. These results collectively validate the efficiency, sensitivity and specificity of the assay developed, indicating its potential utilization for in rabies diagnosis using clinical samples besides the brain tissues.
Auteurs: Daria L. Manalo, Jude Karlo G. Bolivar, Jeromir G. Bondoc, Blanca J. Nagataki, Leilanie B. Nacion, Mark Joseph M. Espino, Chun-Ho Park, Satoshi Inoue
Dernière mise à jour: 2024-12-05 00:00:00
Langue: English
Source URL: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.12.04.24318476
Source PDF: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.12.04.24318476.full.pdf
Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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