Revelando el mundo oculto de las células
Nuevas técnicas de imagen dan luz al comportamiento celular en los tejidos.
Naomi Martin, Paul Olsen, Jacob Quon, Jazmin Campos, Nasmil Valera Cuevas, Josh Nagra, Marshall VanNess, Zoe Maltzer, Emily C Gelfand, Alana Oyama, Amanda Gary, Yimin Wang, Angela Alaya, Augustin Ruiz, Cade Reynoldson, Cameron Bielstein, Christina Alice Pom, Cindy Huang, Cliff Slaughterbeck, Elizabeth Liang, Jason Alexander, Jeanelle Ariza, Jocelin Malone, Jose Melchor, Kaity Colbert, Krissy Brouner, Lyudmila Shulga, Melissa Reding, Patrick Latimer, Raymond Sanchez, Stuard Barta, Tom Egdorf, Zachary Madigan, Chelsea M Pagan, Jennie L Close, Brian Long, Michael Kunst, Ed S Lein, Hongkui Zeng, Delissa McMillen, Jack Waters
― 10 minilectura
Tabla de contenidos
- La emoción del descubrimiento
- La necesidad de Control de Calidad
- Caracterizando imperfecciones
- Problemas de preparación de muestras
- Evaluando la calidad del tejido
- Entendiendo la densidad de transcritos
- El impacto de la Eficiencia de Detección
- Variabilidad a través de sesiones de imagen
- Frustraciones por pérdida de datos
- Variabilidad entre plataformas
- El papel del software de control de calidad
- Aplicaciones en el mundo real
- Conclusión: El futuro de la imagenología molecular espacial
- Fuente original
- Enlaces de referencia
La imagenología molecular espacial es un método potente que se usa para estudiar cómo se organizan y comportan las células en su entorno natural, específicamente dentro de los tejidos. Piensa en esto como encontrar tesoros escondidos en un jardín grande, donde cada planta representa un tipo diferente de célula. Esta tecnología permite a los científicos ver cómo estas "plantas" están creciendo, cómo se comunican entre sí y dónde están ubicadas, todo sin desenterrarlas.
Usando estas técnicas de imagen modernas, los investigadores han podido crear mapas detallados de varios tipos de tejidos, incluyendo el corazón y el cerebro humanos. Así como un mapa turístico resalta los lugares clave, estos mapas destacan características importantes de los tipos de células y sus relaciones.
La emoción del descubrimiento
Los científicos siempre están buscando nuevas formas de aprender sobre el complejo mundo de las células. Con los avances en imagenología espacial, han podido recopilar una gran cantidad de información sobre cómo se expresan los genes en los tejidos. Esto es como abrir un cofre del tesoro lleno de diferentes gemas, cada una representando información valiosa sobre cómo funciona el cuerpo.
Los investigadores se han concentrado especialmente en el cerebro, que alberga una gran cantidad de tipos celulares. Al combinar métodos de imagen, han podido producir atlas, como mapas ilustrados, que muestran dónde se encuentra cada tipo de célula. Esta información es crucial para entender no solo el funcionamiento normal sino también enfermedades como el Alzheimer.
Control de Calidad
La necesidad dePor emocionante que sea esta tecnología, no está exenta de desafíos. Imagina intentar leer un mapa que está borroso y es difícil de descifrar. En la investigación científica, pueden surgir imperfecciones durante el proceso de imagen, llevando a conclusiones incorrectas. Estos errores pueden ocurrir en múltiples etapas, incluyendo la preparación de muestras, los procesos químicos usados para la imagen y la imagen en sí.
Para abordar estos problemas, los investigadores necesitan evaluar la calidad de su conjunto de datos, asegurándose de que la información que interpretan sea precisa. Así como los viajeros revisan sus mapas para verificar la exactitud antes de salir de viaje, los científicos deben confirmar la fiabilidad de sus datos.
Caracterizando imperfecciones
Para resaltar la importancia del control de calidad, los investigadores han desarrollado herramientas para identificar y entender errores en los resultados de la imagen. Piensa en ello como un inspector de calidad revisando un envío de manzanas por cualquier mancha.
Una de estas herramientas se centra en un método de imagen popular llamado MERFISH, que significa Hibridación In Situ de Fluorescencia Multiplexada y Robusta. Este método permite a los científicos visualizar moléculas de ARN individuales dentro de las células. Al recopilar datos de numerosas muestras de tejido, los investigadores pueden encontrar errores comunes que ocurren durante el proceso de imagen.
Problemas de preparación de muestras
Una fuente importante de errores proviene de la fase de preparación de muestras. ¡Imagina intentar hornear un pastel y dejar caer la mitad de los ingredientes en el suelo! En el caso de las muestras de tejido, puede ocurrir daño o despegue de la superficie subyacente, resultando en información faltante.
Cuando los tejidos no se manejan adecuadamente, partes de ellos pueden no ser capturadas por el proceso de imagen. Esto es como intentar tomar una foto grupal pero tener a algunas personas escondidas detrás de otras. Para lidiar con esto, los científicos desarrollaron un sistema que clasifica los píxeles de sus imágenes en diferentes categorías, ayudándoles a identificar qué áreas son utilizables y cuáles no.
Evaluando la calidad del tejido
Una vez que los tejidos están preparados e imaged, los científicos necesitan evaluar la calidad de las imágenes que reciben. La calidad de las imágenes es crucial para asegurar que los datos obtenidos sean fiables. Esto es como verificar la claridad de una fotografía antes de compartirla con amigos.
Un enfoque implica analizar cuántas áreas del tejido son realmente visibles frente a cuántas están dañadas o desprendidas. Con la ayuda de programas de computadora, los investigadores pueden clasificar estas áreas en categorías específicas, permitiéndoles filtrar imágenes incompletas o de baja calidad.
Entendiendo la densidad de transcritos
Un aspecto importante de la imagenología espacial es la densidad de transcritos, que se refiere a cuánto material genético se puede encontrar en un área determinada. Esto es un poco como contar cuántas manzanas hay en una canasta. Idealmente, los investigadores esperarían que la densidad varíe según los tipos de células presentes en el tejido.
Sin embargo, fluctuaciones inesperadas en la densidad de transcritos pueden llevar a confusiones sobre lo que realmente significan los datos. Por ejemplo, si algunas secciones de tejido tienen una densidad inusualmente baja, podría indicar un problema con la preparación del tejido o la imagen. Este nivel de variabilidad complica el análisis, requiriendo que los científicos examinen de cerca sus resultados, como un detective ensamblando pistas en una escena del crimen.
Eficiencia de Detección
El impacto de laOtro factor clave en la imagenología molecular espacial es la eficiencia de detección. Esto se refiere a qué tan bien el método de imagen puede captar la presencia de moléculas de ARN. Si la detección es inconsistente en diferentes áreas, los investigadores pueden terminar con datos incompletos o sesgados. Es como intentar pescar en un estanque pero solo poder hacerlo en ciertas áreas.
En un mundo ideal, cada parte del tejido tendría la misma posibilidad de ser imaged con precisión. Desafortunadamente, esto rara vez ocurre. Algunas áreas pueden generar datos mucho más precisos mientras que otras se quedan cortas. Esta desigualdad puede llevar a grandes discrepancias en los resultados, haciendo que sea un desafío extraer conclusiones significativas.
Variabilidad a través de sesiones de imagen
Con el tiempo, se ha observado que puede ocurrir variabilidad entre diferentes sesiones de imagen. Esto es similar a cómo puede cambiar el clima de un día a otro. A veces, una sesión puede generar resultados más claros que otra, impactando la consistencia de los datos recopilados.
A medida que los científicos continúan trabajando con estas tecnologías de imagen, han notado patrones en la variabilidad, lo que les ha llevado a establecer pautas para mejores prácticas. Al refinar sus métodos y estandarizar protocolos, los investigadores pueden trabajar para minimizar las discrepancias que surgen.
Frustraciones por pérdida de datos
Al igual que una asistente de mago desapareciendo del escenario, la pérdida de datos puede ser un obstáculo molesto en la imagenología espacial. Cuando se pierden datos, puede ser un desafío determinar exactamente qué salió mal. Los investigadores desarrollaron algoritmos para identificar áreas donde los datos parecen faltar, permitiéndoles marcar estas discrepancias antes de pasar a los siguientes pasos de su análisis.
Sin embargo, no se trata solo de encontrar las piezas faltantes. También se debe examinar el impacto de esa pérdida de datos en los resultados generales. Si un número significativo de genes se ha perdido del análisis, es probable que las conclusiones extraídas sean bastante diferentes de la verdad. Esto hace que el control de calidad sea aún más vital en el proceso de imagen.
Variabilidad entre plataformas
La tecnología utilizada en la imagenología molecular espacial varía entre plataformas, cada una con sus fortalezas y debilidades. Es como un buffet donde cada plato tiene su propio sabor único-algunas veces delicioso, otras misteriosamente medio cocido. Al comparar conjuntos de datos de diferentes tecnologías de imagen, los investigadores pueden obtener información sobre cómo se desempeñan estas plataformas bajo condiciones similares.
Sin embargo, esta comparación no es tan sencilla como parece. La variabilidad entre experimentos individuales puede dificultar discernir qué resultados son fiables. Al estandarizar métodos y documentar hallazgos, los científicos pueden trabajar hacia entender la eficiencia de cada plataforma y generar una imagen más clara del panorama general de la imagenología espacial.
El papel del software de control de calidad
Para ayudar a navegar este laberinto de datos, se ha desarrollado un software especializado para ayudar a los investigadores a buscar imperfecciones y evaluar la calidad. Mucho como un GPS de confianza guía a viajeros perdidos, este software puede identificar anomalías en los datos, ayudando a los científicos a averiguar qué partes de sus conjuntos de datos son fiables y cuáles pueden ser sospechosas.
Al centrarse en los problemas más comunes, el software permite chequeos rápidos, asegurando que los investigadores no pierdan tiempo en datos defectuosos. Les da confianza de que los resultados que interpretan son lo más precisos posible, permitiendo conclusiones informadas sobre el comportamiento celular y la expresión génica.
Aplicaciones en el mundo real
La información recopilada a través de la imagenología molecular espacial tiene numerosas aplicaciones en el mundo real. Por ejemplo, puede ayudar a los neurocientíficos a comprender mejor trastornos como el Alzheimer, dándoles información sobre los cambios que ocurren en las células del cerebro a lo largo del tiempo. De esta manera, la imagenología espacial puede contribuir a nuestra comprensión de muchas enfermedades y condiciones.
Además, al mejorar las medidas de control de calidad, los investigadores pueden asegurarse de que están construyendo sobre bases sólidas de datos. Esto permite descubrimientos continuos en biología, allanando el camino para avances en medicina y opciones de tratamiento.
Conclusión: El futuro de la imagenología molecular espacial
A medida que las técnicas de imagenología molecular espacial continúan evolucionando, hay esperanza de una mayor precisión y fiabilidad en los datos recopilados. Los científicos están dedicados a refinar sus métodos, mejorar el control de calidad y desarrollar nuevas herramientas de software para aumentar la fiabilidad general de sus resultados.
Al formar un consenso en torno a las mejores prácticas y estandarizar metodologías, los investigadores buscan simplificar sus procesos y maximizar los conocimientos obtenidos de sus experimentos. El objetivo final es profundizar nuestra comprensión del intrincado mundo celular y desbloquear los secretos que se encuentran dentro de nuestros tejidos.
Así que, ya sea a través de la lente de un microscopio o el corazón de un sistema de imagen, la búsqueda de conocimiento en el ámbito de la imagenología molecular espacial continúa-¡un viaje interminable lleno de promesas y emociones!
Título: MerQuaCo: a computational tool for quality control in image-based spatial transcriptomics
Resumen: Image-based spatial transcriptomics platforms are powerful tools often used to identify cell populations and describe gene expression in intact tissue. Spatial experiments return large, high-dimension datasets and several open-source software packages are available to facilitate analysis and visualization. Spatial results are typically imperfect. For example, local variations in transcript detection probability are common. Software tools to characterize imperfections and their impact on downstream analyses are lacking so the data quality is assessed manually, a laborious and often a subjective process. Here we describe imperfections in a dataset of 641 fresh-frozen adult mouse brain sections collected using the Vizgen MERSCOPE. Common imperfections included the local loss of tissue from the section, tissue outside the imaging volume due to detachment from the coverslip, transcripts missing due to dropped images, varying detection probability through space, and differences in transcript detection probability between experiments. We describe the incidence of each imperfection and the likely impact on the accuracy of cell type labels. We develop MerQuaCo, open-source code that detects and quantifies imperfections without user input, facilitating the selection of sections for further analysis with existing packages. Together, our results and MerQuaCo facilitate rigorous, objective assessment of the quality of spatial transcriptomics results.
Autores: Naomi Martin, Paul Olsen, Jacob Quon, Jazmin Campos, Nasmil Valera Cuevas, Josh Nagra, Marshall VanNess, Zoe Maltzer, Emily C Gelfand, Alana Oyama, Amanda Gary, Yimin Wang, Angela Alaya, Augustin Ruiz, Cade Reynoldson, Cameron Bielstein, Christina Alice Pom, Cindy Huang, Cliff Slaughterbeck, Elizabeth Liang, Jason Alexander, Jeanelle Ariza, Jocelin Malone, Jose Melchor, Kaity Colbert, Krissy Brouner, Lyudmila Shulga, Melissa Reding, Patrick Latimer, Raymond Sanchez, Stuard Barta, Tom Egdorf, Zachary Madigan, Chelsea M Pagan, Jennie L Close, Brian Long, Michael Kunst, Ed S Lein, Hongkui Zeng, Delissa McMillen, Jack Waters
Última actualización: 2024-12-07 00:00:00
Idioma: English
Fuente URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.04.626766
Fuente PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.04.626766.full.pdf
Licencia: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
Cambios: Este resumen se ha elaborado con la ayuda de AI y puede contener imprecisiones. Para obtener información precisa, consulte los documentos originales enlazados aquí.
Gracias a biorxiv por el uso de su interoperabilidad de acceso abierto.
Enlaces de referencia
- https://vizgen.com/products/
- https://vizgen.com/resources/fresh-and-fixed-frozen-tissue-sample-preparation
- https://www.ilastik.org/
- https://info.vizgen.com/mouse-liver-access
- https://info.vizgen.com/mouse-brain-data
- https://www.10xgenomics.com/datasets/xenium-in-situ-analysis-of-alzheimers-disease-mouse-model-brain-coronal-sections-from-one-hemisphere-over-a-time-course-1-standard
- https://www.10xgenomics.com/datasets/fresh-frozen-mouse-brain-replicates-1-standard
- https://nanostring.com/products/cosmx-spatial-molecular-imager/ffpe-dataset/human-frontal-cortex-ffpe-dataset/
- https://resolvebiosciences.com/open-dataset/?dataset=mouse-brain-2021
- https://github.com/AllenInstitute/merquaco
- https://merquaco.readthedocs.io/en/latest
- https://portal.brain-map.org/atlases-and-data/bkp/abc-atlas