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Leveduras Produtoras de Óleo como Alternativas Sustentáveis

Pesquisadores estão explorando levedura para substituir o óleo de palma de forma sustentável.

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Avanço na Produção deAvanço na Produção deÓleo de Levedopara óleo sustentável.Levedura engenheirada mostra potencial
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Óleos vegetais, como o óleo de palma, são usados em muitos produtos, tipo comida, cosméticos e itens de cuidados pessoais. Eles melhoram a textura, o sabor e a durabilidade desses produtos. Mas, a demanda crescente pelo óleo de palma trouxe problemas ambientais sérios. Muitas florestas na Ásia, América do Sul e África estão sendo substituídas por plantações de óleo de palma. Essa mudança prejudica o meio ambiente local e as pessoas que dependem dessas florestas pra viver, contribuindo para problemas como desmatamento e mudanças climáticas.

Pra lidar com essas questões, os pesquisadores estão buscando alternativas sustentáveis ao óleo de palma. Uma opção promissora é usar certos tipos de leveduras conhecidas como leveduras produtoras de óleo. Essas leveduras conseguem produzir óleos e podem ser um bom substituto para os óleos vegetais tradicionais.

Leveduras Produtoras de Óleo

Um tipo específico de levedura produtora de óleo chamada Cutaneotrichosporon oleaginosus mostrou um grande potencial. Ela pode acumular mais de 40% do seu peso em óleos em condições especiais. Isso acontece quando limitamos certos nutrientes, especialmente nitrogênio, fazendo com que a levedura converta açúcares em Lipídios ou gorduras.

C. oleaginosus pode se desenvolver em várias fontes de açúcar, incluindo resíduos de outras indústrias, o que a torna uma opção atrativa para a produção de óleo sustentável. Usando esses fluxos de resíduos, conseguimos produzir óleo enquanto também reduzimos o desperdício, tornando o processo mais amigo do meio ambiente.

Viabilidade Econômica

Apesar do potencial do C. oleaginosus, usar isso pra produção de óleo em larga escala ainda não é viável financeiramente. Pesquisas sugerem que pra ser economicamente viável, precisamos descobrir maneiras de aumentar a quantidade de óleo que a levedura produz. Alguns cientistas recomendam usar células inteiras da levedura pra produção e otimizar o processo pra torná-lo mais eficiente.

Pra melhorar a produção de óleo, os pesquisadores começaram a usar técnicas avançadas pra modificar o metabolismo e as condições de crescimento da levedura. Eles estudaram como diferentes fatores, como a razão entre carbono e nitrogênio no meio de crescimento e a temperatura, afetam a produção de óleo no C. oleaginosus.

Engenharia Metabólica

Estudos recentes mostraram que certas modificações genéticas podem aumentar a capacidade da levedura de produzir óleos. Por exemplo, pesquisadores conseguiram manipular Caminhos Metabólicos específicos pra aumentar a produção de ácidos graxos. Usando ferramentas modernas como CRISPR, os cientistas podem fazer alterações precisas nos genes da levedura pra melhorar seu desempenho.

Mas ainda há muitas lacunas no nosso conhecimento sobre como melhor engenheirar o C. oleaginosus para a produção de óleo. Novas técnicas e modelos estão ajudando pesquisadores a entender e otimizar os caminhos metabólicos da levedura pra uma melhor produção de óleo.

Abordagem de Pesquisa

Neste estudo, os pesquisadores usaram um método sistemático conhecido como abordagem Design-Construir-Testar-Aprender (DBTL). Esse método envolve passar por quatro etapas principais pra desenvolver uma plataforma de produção de óleo mais eficaz usando C. oleaginosus.

Fase de Design

Durante a fase de design, os pesquisadores analisaram os padrões de Expressão Gênica da levedura pra identificar quais genes estavam ativos durante a produção de óleo. Eles mapearam esses genes pra caminhos metabólicos pra descobrir quais processos eram afetados quando a produção de óleo estava alta. Essa análise ajudou a identificar genes chave pra um estudo mais aprofundado.

Fase de Construção

Na fase de construção, os pesquisadores tentaram modificar geneticamente a levedura. Eles introduziram novos genes na levedura pra ver como essas mudanças impactariam sua capacidade de produzir óleo. Esse processo incluiu co-transformar a levedura com genes que poderiam aumentar a produção de óleo.

Fase de Teste

Depois que a levedura foi modificada, o próximo passo foi testar como ela se saiu. Os pesquisadores cultivaram tanto as cepas modificadas quanto as não-modificadas da levedura em diferentes condições nutricionais pra ver quais condições levariam a maiores produções de óleo. Eles usaram experimentos controlados pra confirmar os efeitos de suas modificações.

Fase de Aprendizado

A fase final envolveu analisar os resultados. Os pesquisadores compararam os níveis de produção de óleo das cepas modificadas com as não-modificadas pra identificar melhorias. Eles usaram ferramentas estatísticas pra avaliar como as mudanças feitas pela modificação genética afetaram o crescimento e a produção de óleo da levedura.

Análise da Expressão Gênica

Os pesquisadores examinaram três cepas de C. oleaginosus, prestando atenção especial a como elas respondiam a diferentes condições nutricionais. Eles descobriram que cultivar a levedura em condições de deficiência nutricional levava a uma maior acumulação de óleo. Ao analisar a expressão gênica, identificaram 806 genes em uma cepa que estavam upregulados (mais ativos) em condições de alto lipídio, e 816 genes que estavam downregulados (menos ativos).

Essa análise ajudou a identificar quais genes eram críticos para a produção de lipídios (gordura). Os pesquisadores analisaram de perto os caminhos metabólicos envolvidos na produção de energia e síntese de gordura pra entender melhor como aumentar a produção de óleo.

Análise de Caminhos

Eles construíram um mapa metabólico pra visualizar os caminhos-chave relacionados à produção de energia e síntese de óleo em C. oleaginosus. A análise revelou que certas enzimas dentro desses caminhos eram mais ativas durante a produção de lipídios. Isso incluiu enzimas responsáveis por converter açúcares em ácidos graxos e lipídios.

As descobertas indicaram que fornecer quantidades adequadas de NADPH, uma molécula crucial pra síntese de lipídios, é essencial pra aumentar a produção de óleo. Portanto, planejar como melhorar o fornecimento dessa molécula poderia ser benéfico pra aumentar os rendimentos de lipídios.

Análise de Ontologia Gênica

Os pesquisadores também realizaram uma análise de Ontologia Gênica pra classificar os genes diferencialmente expressos e identificar quais processos biológicos eles estavam envolvidos. Eles encontraram que genes ligados ao metabolismo de carboidratos, biossíntese de lipídios e produção de vitaminas estavam significativamente representados entre aqueles que foram upregulados durante a acumulação de lipídios.

Esses resultados destacaram áreas críticas para potenciais melhorias no meio de crescimento pra aumentar a produção de óleo. As descobertas levaram a sugestões pra suplementar vitaminas e aminoácidos específicos no meio de crescimento.

Análise de Amostragem de Fluxo

Eles empregaram um modelo computacional de C. oleaginosus pra simular diferentes cenários metabólicos, como maximizar crescimento ou produção de lipídios. Essa modelagem ajudou a identificar quais reações metabólicas tiveram o maior impacto na produção de óleo.

A análise gerou uma lista de alvos para modificação genética. Isso destacou enzimas específicas que poderiam ser superexpressas pra impulsionar a produção de óleo. Essa abordagem focada permitiu que os pesquisadores se concentrassem nas modificações genéticas mais promissoras.

Validação Experimental

Depois de identificar potenciais alvos genéticos e suplementos pro meio de crescimento, os pesquisadores realizaram experimentos pra validar suas previsões. Eles testaram os efeitos de adicionar nutrientes específicos, como vitaminas e aminoácidos, no meio de crescimento pra ver como essas intervenções impactavam a produção de lipídios.

Os resultados mostraram que a adição de biotina e treonina aumentou significativamente o conteúdo de lipídios na levedura. Essas descobertas forneceram evidências fortes da importância de nutrientes específicos na melhoria da produção de óleo.

Caracterização de Cepas Modificadas

Em seguida, os pesquisadores caracterizaram as cepas modificadas pra avaliar seu desempenho em diferentes condições nutricionais. Ao avaliar como as cepas engenheiradas responderam em vários ambientes, conseguiram determinar as condições ideais para a acumulação de lipídios.

Os resultados indicaram que modificações específicas levaram não apenas a um maior conteúdo de lipídios, mas também a um crescimento melhor da levedura. Isso destacou o potencial de usar C. oleaginosus geneticamente modificada pra produção industrial de óleo.

Conclusão

Esse estudo implementou com sucesso uma abordagem sistemática pra melhorar as capacidades produtoras de óleo do C. oleaginosus. Ao analisar a expressão gênica e utilizar modelos computacionais, os pesquisadores identificaram genes e nutrientes chave que poderiam aumentar a produção de lipídios.

As descobertas sugerem que leveduras produtoras de óleo como C. oleaginosus têm um potencial significativo como alternativas sustentáveis ao óleo de palma. Avanços contínuos na engenharia genética e modelagem metabólica vão fortalecer ainda mais os esforços pra tornar a produção microbiana de óleo mais viável economicamente e amigável ao meio ambiente.

Enquanto o mundo busca opções mais sustentáveis pra óleos, pesquisas como essa são um passo crítico rumo a soluções que beneficiem tanto a indústria quanto o meio ambiente.

Fonte original

Título: Model-driven engineering of Cutaneotrichosporon oleaginosus ATCC 20509 for improved microbial oil production

Resumo: Consumption of plant-based oils, especially palm oil, is increasing at an alarming rate. This boosted demand for palm oil has drastic effects on the ecosystem as its production is not sustainable. C. oleaginosus is an oleaginous yeast with great potential as a source for microbial-based oil production which is a sustainable alternative to palm oil. However, microbial processes are not yet economically feasible to replace palm oil, unto a large extent due to limited lipid accumulation in the microbe, which limits titers and productivity. Therefore, obtaining enhanced lipid accumulation is essential to render this process commercially viable. Herein we deployed a systematic, iterative Design-Build-Test-Learn (DBTL) approach to establish C. oleaginosus as an efficient fatty acid production platform. In the design step, we identified genes and medium supplements that improved lipid content. To this end, we compared its transcriptional landscape in conditions with high and low amounts of lipid production. A metabolic map was reconstructed and integrated with the expression data. Finally, the genome-scale metabolic model of C. oleaginosus was used to explore metabolism under maximal growth and maximal production conditions. The combination of these four analyses led to the selection of four overexpression targets (ATP-citrate lyase (ACL1), acetyl-CoA carboxylase (ACC), threonine synthase (TS), and hydroxymethylglutaryl-CoA synthase (HMGS)) and five media supplements (biotin, thiamine, threonine, serine, and aspartate). We established an electroporation-based co-transformation method to implement selected genetic interventions. These findings were experimentally validated in the build and test steps of the DBTL approach by adding supplements into the medium and overexpressing the identified genes. Characterization of ACL, ACC, and TS at various C/N ratios, and the addition of medium supplements provided up to 56% (w/w) lipid content, and a 2.5-fold increase in total lipid in the glycerol and urea-based defined medium. In the learn step, quadratic models identified the optimum C/N ratios shifted towards around C/N240. These results firmly confirm C. oleaginous as a sustainable alternative to replace palm as an oil source. HighlightsO_LITranscriptional profile and metabolic model analyzed, predicting genetic targets and medium supplements. C_LIO_LIGenetic targets and medium supplements for improved oil production. C_LIO_LIThe genetic toolbox for C. oleaginosus was expanded (co-transformation method, promoters, genes, and terminators). C_LIO_LIExperimental validations showed that biotin, and threonine increased lipid content. C_LIO_LIOverexpression of ACL1, ACC, and TS in C. oleaginosus provided higher oil content. C_LI Graphical Abstract O_FIG O_LINKSMALLFIG WIDTH=200 HEIGHT=76 SRC="FIGDIR/small/585731v1_ufig1.gif" ALT="Figure 1"> View larger version (21K): [email protected]@65d016org.highwire.dtl.DTLVardef@40952eorg.highwire.dtl.DTLVardef@22724_HPS_FORMAT_FIGEXP M_FIG C_FIG

Autores: Maria Suarez-Diez, Z. E. Duman-Özdamar, M. K. Julsing, J. A. C. Verbokkem, E. Wolbert, V. A. P. Martins dos Santos, J. Hugenholtz

Última atualização: 2024-03-19 00:00:00

Idioma: English

Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.19.585731

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.19.585731.full.pdf

Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Alterações: Este resumo foi elaborado com a assistência da AI e pode conter imprecisões. Para obter informações exactas, consulte os documentos originais ligados aqui.

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