Métodos para Imortalizar Células de Camundongos

Cultivar células por um longo tempo é importante na pesquisa científica. A maioria das células normais para de crescer depois de um tempo, o que faz com que seja necessário encontrar maneiras de mantê-las vivas. Métodos para manter as células vivas, conhecidos como imortalização, são cruciais quando os cientistas querem criar linhagens celulares permanentes a partir de tecidos vivos. Enquanto algumas técnicas envolvem mudar a genética das células para que elas continuem crescendo, isso muitas vezes resulta em mudanças indesejadas semelhantes às células cancerígenas.

#Métodos de Imortalização Celular

Um método comum para fazer as células viverem mais é adicionar uma parte chamada Telomerase a elas. Essa parte ajuda as células a manter as extremidades sem desgastar, o que é essencial para o crescimento a longo prazo. Esse método funciona bem para células humanas, mas não é tão eficaz em células de camundongo. As tentativas de usar esse método em células de camundongo não têm sido muito bem-sucedidas.

Outra forma de criar células imortais é por meio de uma técnica conhecida como o "método 3T3". Isso envolve começar com um tipo específico de células de camundongo, chamadas fibroblastos embrionários primários de camundongo (MEFs), e cultivá-las de um jeito específico até que algumas se tornem imortais. Esse método leva bastante tempo e nem sempre é eficaz porque depende de mudanças naturais que acontecem durante o processo de crescimento celular.

Os cientistas observaram que células de camundongo feitas com o método 3T3 frequentemente têm alterações em um gene conhecido como TP53. Esse gene é importante para parar o crescimento celular quando deveria cessar. Quando esse gene é alterado, ele geralmente ajuda as células a continuarem crescendo indefinidamente.

#Criando Fibroblastos Embrionários de Camundongo Imortalizados (iMEFs)

Pesquisadores descobriram que, ao remover o gene Tp53 das células usando uma técnica chamada CRISPR, podem criar células que vivem muito tempo. O processo pode levar menos de duas semanas, começando com apenas algumas células. Essas novas células podem ser usadas para muitos experimentos científicos diferentes.

#Materiais Necessários

Para fazer essas células imortalizadas, os pesquisadores precisam de vários materiais:

• Camundongos prenhes com embriões
• Várias soluções químicas para ajudar as células a crescer
• Ferramentas para o trabalho de laboratório, como seringas e placas de Petri
• Plasmídeos especiais que ajudam na mudança genética das células

#Preparando Fibroblastos Embrionários Primários de Camundongo

Primeiro, os pesquisadores precisam obter as células primárias dos embriões de camundongo. Para isso, eles vão remover cuidadosamente os embriões da mãe. É importante manter tudo limpo para evitar contaminação. Os embriões são dissecados, e os tecidos são processados para obter as células fibroblastos, que podem ser cultivadas em um laboratório.

#Passos para Preparar MEFs

1. Verificar se há camundongos prenhes e eutanasiá-los de forma segura.
2. Usar métodos de esterilização para garantir um ambiente limpo.
3. Dissecar cuidadosamente os embriões e remover os tecidos necessários para isolar os MEFs.
4. Colocar essas células em uma placa especial com meio de crescimento para mantê-las vivas.

Depois disso, as células são monitoradas para garantir que estão saudáveis e crescendo.

#Imortalização dos MEFs

Uma vez que as células primárias são preparadas, elas podem ser tornadas imortais. Isso envolve a eletroporação, um método que usa campos elétricos para introduzir novo material genético nas células. Isso permite que os cientistas adicionem a ferramenta CRISPR e visem o gene Tp53.

1. Preparar as células, ajustando-as para uma densidade saudável.
2. Usar as configurações elétricas adequadas para uma eletroporação eficaz.
3. Misturar as células com um DNA especial que ajuda na alteração das células.
4. Passar a mistura por um sistema de eletroporação.

A eletroporação pode, às vezes, fazer com que algumas células morram; no entanto, espera-se que células saudáveis comecem a se multiplicar após um certo período.

#Monitoramento e Congelamento de iMEFs

Após a transfeição, os cientistas observam as células para ver se ainda estão crescendo. O objetivo é verificar se as células que tiveram o gene Tp53 removido continuam a crescer, ao contrário das células de controle que deveriam morrer. Uma vez que as linhagens celulares desejadas são estabelecidas, elas podem ser congeladas para experimentos futuros ou usadas imediatamente em novos estudos.

#Conclusão

A capacidade de criar células imortais é vital para muitos estudos científicos. Técnicas como o CRISPR oferecem uma maneira de manter as células de camundongo vivas muito mais tempo do que elas durariam naturalmente. Embora preparar e mudar essas células possa levar tempo e cuidado, os resultados permitem que os pesquisadores realizem uma ampla gama de experimentos sem precisar começar do zero toda vez. Isso pode levar a novas descobertas em biologia, medicina e outras áreas.

Criar linhagens celulares imortalizadas como os iMEFs abre muitas possibilidades para pesquisa. Seja estudando doenças, testando novos medicamentos ou entendendo a biologia básica, essas células oferecem uma plataforma estável para experimentação. No geral, técnicas eficazes para imortalização contribuem significativamente para o avanço do conhecimento científico e do progresso médico.