Uma Nova Maneira de Estudar Estruturas Celulares
Explorando os benefícios da microscopia ExAPC para observação celular.
Takafumi Miyamoto, L. N. Sari, T. Nishimura, K. Kainoh, N. Onodera, M. Kano, M. Masuda, Y. Tamura, Y. Hayashi, Y. Yamamoto, S.-I. Takahashi, Y. Mishima, Y. Yoneyama, Y. Takeuchi, H. Ohno, Y. Ohashi, M. Sekiya, T. Matsuzaka, H. Shimano
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Índice
- A Importância de Ver a Organização Celular
- Um Olhar Mais Próximo na Imagem Sem Marcadores
- Visualizando Células Vivas com a Microcopia ExAPC
- Observando Comportamentos Celulares
- Condensados biomoleculares e Seu Papel nas Células
- Gotículas Lipídicas: Outro Componente Chave
- Dinâmica Mitocondrial e Sua Importância
- O Futuro da Imagem e Pesquisa Celular
- Fonte original
Células são os blocos básicos da vida. Dentro dessas células, tem umas partes especiais chamadas organelas. Cada organela tem sua função e, juntas, ajudam a célula a funcionar direitinho. A forma, o arranjo e a quantidade dessas organelas numa célula ajudam a definir como a célula é e como se comporta.
A Importância de Ver a Organização Celular
Pra entender como as células funcionam, é essencial ver como essas organelas estão organizadas. Um jeito que os cientistas visualizam essa organização é através de um método chamado imagem por fluorescência. Essa técnica usa luz que pode fazer certas partes da célula brilharem, permitindo que os pesquisadores vejam as formas e locais de diferentes organelas.
A imagem por fluorescência tem várias vantagens; é rápida, específica e pode ser usada em muitos tipos diferentes de células. Mas essa técnica tem seus problemas também. Por exemplo, a luz forte pode danificar as células ou fazer as partes brilhantes desvanecerem. Por causa desses problemas, os cientistas estão pesquisando outros métodos, como a imagem sem marcadores, que permite observar as células sem adicionar substâncias que podem interferir no estado natural delas.
Um Olhar Mais Próximo na Imagem Sem Marcadores
Os métodos de imagem sem marcadores oferecem uma maneira de estudar células sem precisar de marcadores fluorescentes. Um método interessante é chamado de microcopia ExAPC. Nesse processo, a luz passa por uma placa especial que ajuda a criar imagens mais claras reduzindo os efeitos indesejados da dispersão da luz.
Usando a microcopia ExAPC, os pesquisadores podem olhar várias organelas ao mesmo tempo. Isso é importante porque ajuda a capturar imagens detalhadas que podem mostrar como as organelas trabalham juntas dentro da célula. Apesar de promissora, a microcopia ExAPC ainda está sendo testada pra estabelecer totalmente sua eficácia em observar células sem rótulos.
Visualizando Células Vivas com a Microcopia ExAPC
Pesquisas mostraram que a microcopia ExAPC pode visualizar efetivamente o funcionamento interno de células vivas. Por exemplo, foi usada pra ver as formas e comportamentos de células de câncer de pulmão A549. As imagens tiradas com essa técnica revelam estruturas chave nessas células, como o núcleo e as Mitocôndrias, oferecendo insights sobre sua organização.
Mas distinguir entre várias organelas só a partir dessas imagens pode ser difícil. Cientistas descobriram que certas organelas podem ser identificadas com base em suas propriedades únicas, como o índice de refração, que é como elas dobram a luz. O núcleo, o nucleolo e as mitocôndrias estão entre aquelas que podem ser vistas claramente com a microcopia ExAPC.
Os pesquisadores observaram que, quando as células foram vistas ao longo do tempo, puderam ver como as estruturas mudavam e interagiam durante diferentes processos como divisão celular e morte celular programada.
Observando Comportamentos Celulares
Usando a microcopia ExAPC, os cientistas conseguiram estudar vários comportamentos das células. Eles analisaram como as células se dividem e como estruturas específicas dentro delas se comportam durante esse processo. Por exemplo, durante a divisão das células HeLa (um tipo de linhagem celular humana), os pesquisadores conseguiram capturar mudanças na organização dessas células em tempo real.
Além da divisão celular, os pesquisadores também observaram como as células passam por apoptose, um processo de morte celular programada, e um fenômeno chamado entose, onde uma célula engole outra. Essas observações são importantes porque ajudam os cientistas a entender como as células vivem e morrem, e como interagem com o ambiente.
Condensados biomoleculares e Seu Papel nas Células
Um foco específico da pesquisa é nos condensados biomoleculares, que são aglomerados densos de proteínas e outras moléculas dentro das células. Esses condensados desempenham papéis importantes em ajudar a organizar várias reações bioquímicas. Cientistas usaram microcopia ExAPC para identificar essas estruturas em células vivas, o que trouxe insights sobre como podem afetar as funções celulares.
Em experimentos, os pesquisadores descobriram estruturas esféricas no citoplasma das células HeLa, conhecidas como estruturas semelhantes a condensados biomoleculares (BCLs). Essas estruturas foram vistas sendo fundidas e agindo de maneiras dinâmicas, mudando de forma e tamanho. Experimentos que alteraram as condições nas células, como adicionar certos químicos, mostraram que esses BCLs poderiam aparecer ou desaparecer, destacando sua natureza dinâmica.
Gotículas Lipídicas: Outro Componente Chave
Outro tópico importante de estudo são as gotículas lipídicas (LDs), que são pequenos compartimentos de armazenamento de gorduras dentro das células. Essas gotículas são cruciais para o equilíbrio de energia e ajudam a proteger as células dos efeitos nocivos do excesso de gorduras. Assim como os condensados biomoleculares, as gotículas lipídicas também podem se formar e mudar em resposta a várias condições.
Usando microcopia ExAPC, os pesquisadores mapearam o crescimento e comportamento das gotículas lipídicas em células vivas. Por exemplo, investigaram como as gotículas lipídicas se formam quando as células são expostas a certos nutrientes. Observaram diferentes fases de crescimento dessas gotículas ao longo do tempo, ajudando a esclarecer como se desenvolvem e aumentam de tamanho.
Os pesquisadores descobriram que as gotículas lipídicas costumam interagir com outras organelas na célula, como as mitocôndrias. Essa interação é essencial pra entender como as células gerenciam energia e comunicação. Ao rastrear os movimentos das gotículas lipídicas, os cientistas conseguiram ver como migravam pra diferentes partes da célula.
Dinâmica Mitocondrial e Sua Importância
As mitocôndrias são conhecidas como a usina de energia da célula. Elas produzem a energia que as células precisam pra funcionar. As mitocôndrias não são estáticas; elas mudam de forma constantemente e podem se dividir ou se unir. Esse comportamento dinâmico é crucial pra muitos processos celulares, incluindo produção de energia e apoptose.
A microcopia ExAPC permitiu que os cientistas observassem de perto essas mudanças nas mitocôndrias sem usar rótulos prejudiciais. Os pesquisadores conseguiram identificar pontos específicos onde as mitocôndrias se dividem e se juntam. Notaram que mitocôndrias de tamanhos semelhantes tendem a se unir durante eventos de fusão, o que ilumina os processos que regulam seus comportamentos.
Quando as células passam por estresse, como exposição a drogas que impactam a produção de energia, as mitocôndrias podem mudar dramaticamente sua estrutura. Pesquisadores que usaram a microcopia ExAPC notaram que, após o tratamento com uma dessas drogas, a forma das mitocôndrias mudava rapidamente de longas para formas globulares, o que é crítico pra entender o impacto do estresse na saúde celular.
O Futuro da Imagem e Pesquisa Celular
A pesquisa em torno da microcopia ExAPC está apenas começando, mas mostra grande potencial pro futuro da biologia celular. Essa técnica permite que os cientistas vejam detalhes sobre estruturas e comportamentos celulares sem a necessidade de corantes fluorescentes, potencialmente levando a observações mais precisas e prolongadas de células vivas.
À medida que essa tecnologia avança, pode levar a novas descobertas sobre como os componentes celulares funcionam e interagem sob diferentes condições. O entendimento dos condensados biomoleculares, gotículas lipídicas e mitocôndrias vai oferecer insights valiosos sobre várias doenças e os princípios fundamentais da vida.
Resumindo, examinar como as células estão organizadas e como funcionam é crucial pra entender a vida no nível celular. Conforme os cientistas desenvolvem técnicas de imagem melhores, como a microcopia ExAPC, eles poderão explorar comportamentos e interações celulares mais complexas, ajudando na busca contínua pra entender como a vida funciona.
Fonte original
Título: Label-free imaging of intracellular structures in living mammalian cells via external apodization phase-contrast microscopy
Resumo: Developing techniques to visualize intracellular structures, which influence the spatiotemporal functionality of biomolecules, is essential for elucidating mechanisms governing cellular behavior. In this study, we demonstrate that label-free external apodization phase-contrast (ExAPC) microscopy serves as a valuable tool for the simultaneous observation of various intracellular structures with high spatiotemporal resolution, while successfully mitigating halo artifacts. Additionally, through quantitative analysis of images obtained by combining ExAPC microscopy with fluorescence microscopy, we identified distinct heterogeneities in biomolecular condensates, lipid droplets, and mitochondria. Our findings highlight the potential of ExAPC microscopy to provide detailed insights into alterations in intracellular structures associated with diverse cellular processes, corroborating the existing knowledge and potentially contributing to the discovery of novel cellular mechanisms.
Autores: Takafumi Miyamoto, L. N. Sari, T. Nishimura, K. Kainoh, N. Onodera, M. Kano, M. Masuda, Y. Tamura, Y. Hayashi, Y. Yamamoto, S.-I. Takahashi, Y. Mishima, Y. Yoneyama, Y. Takeuchi, H. Ohno, Y. Ohashi, M. Sekiya, T. Matsuzaka, H. Shimano
Última atualização: 2024-12-27 00:00:00
Idioma: English
Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.01.582671
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.01.582671.full.pdf
Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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