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レトロンを使ったDNAアプタマーの進展

研究は、生細胞でのDNAアプタマー生成におけるレトロンの可能性を示している。

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レトロンを使ったDNAアプレトロンを使ったDNAアプタマーが明らかになったの手法が診断に希望をもたらしてるよ。新しいレトロンを利用したDNAアプタマー
目次

アプタマーは特定の分子にしっかりと結合するために形を変えられる短い遺伝子の断片なんだ。抗体みたいに機能して、体が外部の物質を認識して攻撃するために使うタンパク質だよ。アプタマーの面白いところは、DNAやRNAの基本的な構成要素である核酸から作られているってこと。だから、ラボで簡単かつ安価に生産できるんだ。

蛍光ライトアップアプタマーって何?

アプタマーに関するエキサイティングな進展の一つが、蛍光ライトアップアプタマー(FLAPs)だよ。この特別なアプタマーは、特定の蛍光色素に結合して、特定の条件下で光ることができる。これのおかげで、アプタマーがどのように折りたたまれて機能するかを研究するのにとても役立つんだ。FLAPsの中には、スピナッチやブロッコリーなどがあって、これらは科学者たちが生きた細胞内のRNAを可視化したり追跡したりするのに役立つんだ。

DNAアプタマーの利点

RNAアプタマーも役に立つけど、DNAアプタマーにはいくつかの利点があるよ。一般的に、もっと安定していて作るのが簡単だからね。DNAアプタマーを生産するのが安価な場合も多くて、新しい医療テストや治療法の開発にとって大事なんだ。例えば、レタスというDNA FLAPは、特定の色素に結合すると光るタンパク質の模倣なんだ。これが、病原体の検出や癌細胞の認識に使える可能性があるんだ。

生きた細胞内でのDNAアプタマーの課題

その可能性にも関わらず、DNAアプタマーに関する多くの研究は、実際の生きた細胞ではなく、ラボ環境での作成とテストに焦点を当てている。ひとつの大きな課題は、生きた細胞内でこれらのDNAアプタマーをどうやって作るかだよ。研究者たちは、細胞にDNAを導入する方法を模索してきたけど、複雑だったり、あまり効果的でなかったりすることもあるんだ。

リトロンって何?

この課題を克服するためのひとつのアプローチがリトロンって呼ばれるもの。リトロンは細菌に見られる自然の構成要素で、ウイルスに対抗するために役立つんだ。特有な形のRNAを生成して、それを単鎖DNAに変換することで、さまざまな目的に使えるようになるんだ。このリトロンは、RNA配列、RNAからDNAを作成するのを助ける逆転写酵素、そしてそれらと共に働くタンパク質から成り立っているよ。

リトロンがDNAを作る仕組み

リトロンのRNAは特定の形を形成できるように構造ができている。逆転写酵素がこの形を認識すると、RNAからDNAを作り始めるんだ。このDNAは細胞内のタンパク質や他の分子と相互作用できる。だからリトロンは、細胞内でDNAアプタマーを作るのに興味深いんだ。

新しい方法の必要性

リトロンはDNAアプタマーを作るために大きな可能性を示しているけど、生きた細胞内で機能的なDNAアプタマーを成功裏に作れるかどうかを証明するための研究はあまり行われていない。リトロンを使って細胞内でDNA分子を生成できることは分かっているけど、その活動を制御して正しく機能させる方法はまだ明らかではないんだ。

Eco2リトロンに関する研究

この研究では、研究者たちがEco2という特定のリトロンを使って、レタスというDNA FLAPを生成することに焦点を当てたよ。Eco2は他のリトロンよりもシンプルだから、DNAアプタマーを効果的に作るのに助けになるかもしれないんだ。Eco2の重要な特徴の一つは、細胞内で扱うのが難しい特別な酵素を必要としないところなんだ。

細胞内でのアプタマーのテスト

レタスアプタマーがEco2リトロンを使って機能するかどうかを調べるために、研究者たちは実験をデザインして、細菌細胞内でどれだけうまく生成されるかを確認したんだ。彼らは、細胞内で独立して複製できる円形のDNAである特別なプラスミドを使って、レタスアプタマーをEco2システムに統合する手助けをしたんだ。

実験の成功の測定

実験を行った後、研究者たちは細胞内で生成されたDNAの量を測定したよ。彼らは、レタスアプタマーが存在することで、標準のEco2リトロン単体と比較して生成されたDNAの量が減少したことを発見したんだ。それでも、蛍光信号を検出できる程度のDNAは十分に観察できたから、システムはまだ機能することが分かった。

生体内条件がアプタマーに与える影響

研究者たちは、レタスアプタマーが細胞条件下で蛍光色素DFHBI-1Tにどれだけしっかり結合できるかも調べたんだ。彼らは、Eco2構造内でのアプタマーの位置が、正しく折りたたまれる能力や機能に影響を与える可能性があると考えていたんだ。

バクテリア内での蛍光観察

バクテリア内でアプタマーが蛍光を発する能力をテストしたとき、折りたたみのための最高の位置にあるバージョン(4LE-v4と呼ばれる)が最も顕著な蛍光の増加を示したんだ。これは、アプタマーが予想通りに色素に結合できたことを意味しているよ。他のバージョンはそれほど良くなかったけど、驚いたことにいくつかはまだ noteworthyな蛍光を示して、ある程度の活動があることを示していたんだ。

代替蛍光色素

研究者たちは、レタスアプタマーとどれだけうまく機能するかを確認するために、DFHOと呼ばれる別のタイプの染料も調べたよ。結果は似ていて、最高の結合位置にあるバージョンが強い蛍光信号を示したんだ。ただし、全体の信号は最初の色素よりもわずかに低かったけどね。

リトロンの使用に関する結論

この研究は、Eco2のようなリトロンが生きた細胞内で機能するDNAアプタマーを生成するのに役立つツールになり得ることを示しているよ。特定のDNA配列を簡単に発現させることができるし、細胞に問題を引き起こすこともないんだ。この研究結果は、実際の細胞条件でDNAアプタマーをテストすることの重要性を強調していて、ラボでうまくいくことが生きた生物内でも同じように機能するとは限らないんだ。

未来の方向性

研究者たちがリトロンを使ってDNAアプタマーを作る研究を続ける中で、診断や治療のために細胞内で機能する新しいセンサーやツールを開発する大きな可能性があるよ。これらのアプタマーのデザインや発現を改善することが、医療やバイオテクノロジーを含むさまざまな分野での成功した応用のために重要になるんだ。

最後の考え

全体として、DNAアプタマーの発現にリトロンを使用することは、遺伝子研究においてエキサイティングな一歩前進を示しているよ。これにより、かつては難しいか不可能だった方法でDNAの特異な特性を利用する新しい可能性が広がるんだ。さらなる研究が進むにつれて、これらのツールの革新的な利用法が期待できるね。

オリジナルソース

タイトル: Intracellular Expression of a Fluorogenic DNA Aptamer Using Retron Eco2

概要: DNA aptamers are short, single-stranded DNA molecules that bind specifically to a range of targets such as proteins, cells, and small molecules. Typically, they are utilized in the development of therapeutic agents, diagnostics, drug delivery systems, and biosensors. Although aptamers perform well in controlled extracellular environments, their intracellular use has been less explored due to challenges of expressing them in vivo. In this study, we employed the bacterial retron system Eco2, to express a DNA light-up aptamer in Escherichia coli. Both in vitro and in vivo assays confirm that structure-guided insertion of the aptamer domain into the non-coding region of the retron enables reverse transcription and folding of functional aptamer constructs in vivo. Notably, we find only a limited correlation between in vitro and in vivo aptamer performance, suggesting marked folding differences between the two environments. Our findings demonstrate that retrons can be used to effectively express short DNA aptamers within living cells, potentially broadening and optimizing their application in intracellular settings.

著者: Hannes Mutschler, M. A. Vibhute, C. Machatzke, K. Bigler, S. Krumpel, D. Summerer

最終更新: 2024-05-24 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.21.595248

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.21.595248.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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