新しい方法が神経接続研究を強化する
パッチウォーキング法が脳のつながりの研究効率を向上させる。
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目次
科学者たちは、脳の活動を見て、私たちがどう考え、記憶し、選択するかを研究してるんだ。これは、情報を処理するのに役立つネットワークを形成するためにお互いにコミュニケーションをとるニューロンという小さな細胞を調べることを含むんだ。このつながりはシナプスと呼ばれていて、私たちの脳がどう機能するかにおいて重要な役割を果たしているよ。科学者たちは、ニューロンの間で交換される信号の強さと性質を測定して、これらのつながりについてもっと学ぼうとしてる。でも、これらのつながりを研究するのは大変で、時間がかかるから、十分なデータを集めるのが難しいんだ。
パッチクランプ技術
個々のニューロンとそのつながりを調べる最良の方法の一つは、パッチクランプ記録という手法を使うことなんだ。この技術は、ニューロン内の電気信号を非常に詳細に測定できるんだ。研究者たちは、正常な脳の機能や脳に影響を与える病気の変化を理解するためにこれを使ってきたんだ。でも、パッチクランプ記録は高品質なデータを提供する一方で、時間がかかり、労力が必要なんだ。
従来のパッチクランプ実験では、科学者たちはガラス製のパイペットとニューロンの間に強い接続を作らなきゃいけない。もしパイペットを外しちゃうと、残ったニューロンの部分が別のニューロンと早く接続するのを難しくすることがあるんだ。その上、脳のスライスを使うときは、近くの細胞や組織を傷つけないように気をつけなきゃいけなくて、これが一日に研究できる細胞の数に制限をかけることになる。
オートメーションによるスループット向上
最近、パッチクランプ実験の進め方に進展があったんだ。パイペットがどれくらい早く洗浄して動くかを自動化することで、作業をスピードアップできたんだ。これらの改善により、研究者たちは人間の監視なしでパッチクランプ実験を実行できるロボットシステムを作り上げたんだ。その一例が「パッチャーボット」というシステムで、複数のニューロンに同時に接続できる成果を上げてるよ。
科学者たちはより洗練された方法を作りながら、以前よりもずっと早く脳内の多くのつながりを調べられるようになったんだ。あるラボでは、自動化システムを使って二万以上のつながりを研究することができたんだ。この技術は素晴らしいけど、特別な機器が必要で、全てのラボがアクセスできるわけじゃないんだ。
二パイペットアプローチ:パッチウォーキング
従来のパッチクランプ実験の課題と自動化の進展を考慮して、「パッチウォーキング」という新しい方法が提案されたんだ。各記録の後にパイペットを全部ニューロンから外す代わりに、一つのパイペットを再利用し、他のパイペットはそのままにしておくんだ。この方法で、研究者たちは短時間でさらに多くのつながりを調べることができるんだ。
パッチウォーキングを使うことで、科学者たちは脳のスライス上で一つのパイペットを動かしながら、他のパイペットはそのままにしてデータを集めることができるんだ。この方法では、毎回全プロセスを最初から始める必要がなくて、同時に複数のニューロンからデータを取得できるんだ。この技術を採用することで、研究者たちは調べるつながりの数を大幅に増やせることを示しているよ。
パッチウォーキング実験の方法と結果
パッチウォーキングの効果を試すために、科学者たちはこの方法を実行できる自動化システムをセットアップしたんだ。二つのパイペットを使って、脳のスライス内のニューロンから系統的に記録したんだ。試行中、彼らは多くのニューロンから使用できるデータを取得するのに高い成功率を得られたんだ。
実験では、多くのニューロンから成功裏に記録ができ、接続を形成する成功率も良かったよ。記録を得るのにかかった時間は従来の方法と同程度だったけど、データをより多く集められるという追加のメリットがあったんだ。
実験は、この新しいアプローチがデータ収集プロセスを早めただけでなく、調べるつながりも増えたことを示しているんだ。例えば、従来の方法を使うと研究者は約35のつながりしか調べられなかったのに、パッチウォーキングの方法では発見が増えたんだ。
接続テスト
ニューロンのペアから信号を記録した後、科学者たちは一つのニューロンを刺激し、もう一つの応答を観察して、接続されているかを確認するんだ。これでニューロンがシナプス接続を共有しているかを確認できるんだ。ニューロンの近接性に基づいて接続を成功させた例もあったけど、ニューロンの動作の自然なバリエーションのために期待より低い結果もあったんだ。
パッチウォーキングの利点
パッチウォーキングメソッドにはいくつかの利点があるんだ。まず、時間が短縮され、脳組織へのダメージが少なくなるんだ。なぜなら、一度に一つのパイペットしか動かさないからで、まだ接続が残っているかもしれないものを乱すリスクを減らせるんだ。次に、この方法では細胞死が起こる前にニューロンからデータを取得できるから、貴重なサンプルや珍しい組織タイプで作業する際には特に重要なんだ。
また、このアプローチは、洗練されたセットアップを持っていない研究者にも、実験に複数のパイペットを組み込むのを簡単にしているんだ。その結果、より多くのラボがこの技術を使って高品質の研究を行う機会を得ているんだ。
制限と今後の方向性
パッチウォーキングは大きな可能性を持ってるけど、まだ制限もあるんだ。一部の試行で見つかった接続の数が予測より少なかったことは、ニューロンのバリエーションが原因かもしれないんだ。この方法がより多くのパイペットを含むようになると、脳のスライス内での繊細なガラス製パイペットの衝突を避けるために、注意深い計画が必要になるんだ。
将来の研究では、光感受性タンパク質などの技術を組み込んで、脳内のより大きなネットワークをより効果的にマッピングできる可能性があるよ。それに、機械学習を使って特定の細胞タイプを見つけたり、特定のつながりをターゲットにしたりして、全体の研究プロセスを強化できるかもしれないんだ。
結論
要するに、脳はつながったニューロンの複雑なネットワークで、これらのつながりを理解することは、私たちがどう考え、記憶し、決定を下すかを把握するために重要なんだ。パッチクランプ技術はこの研究において長年価値のあるツールだったけど、進捗を遅らせる挑戦があるんだ。革新的なパッチウォーキングアプローチは、パッチクランプメソッドの可能性を最大化する方法を提供し、神経接続の探索をより迅速かつ効率的にできるようにしているんだ。進行中の進歩とアクセスの向上により、この技術は神経科学のさらなる発見の道を開いているんだ。
タイトル: Patch-walking: Coordinated multi-pipette patch clamp for efficiently finding synaptic connections
概要: Significant technical challenges exist when measuring synaptic connections between neurons in living brain tissue. The patch clamping technique, when used to probe for synaptic connections, is manually laborious and time-consuming. To improve its efficiency, we pursued another approach: instead of retracting all patch clamping electrodes after each recording attempt, we cleaned just one of them and reused it to obtain another recording while maintaining the others. With one new patch clamp recording attempt, many new connections can be probed. By placing one pipette in front of the others in this way, one can "walk" across the tissue, termed "patch-walking." We performed 136 patch clamp attempts for two pipettes, achieving 71 successful whole cell recordings (52.2%). Of these, we probed 29 pairs (i.e., 58 bidirectional probed connections) averaging 91 {micro}m intersomatic distance, finding 3 connections. Patch-walking yields 80-92% more probed connections, for experiments with 10-100 cells than the traditional synaptic connection searching method. MotivationRecognizing the manual labor and time-intensive nature of patch clamping when trying to find synaptic connections, we aim to improve its efficiency. We introduce a novel approach, termed "patch-walking," where one patch clamping electrode is cleaned and reused, enabling the exploration of numerous connections with a single recording attempt and improving the efficiency of identifying synaptic connections.
著者: Mighten C. Yip, M. M. Gonzalez, C. F. Lewallen, C. R. Landry, I. Kolb, B. Yang, W. M. Stoy, M.-f. Fong, M. J. Rowan, E. S. Boyden, C. R. Forest
最終更新: 2024-08-15 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.30.587445
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.30.587445.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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