冷却イメージング技術の進展
新しい方法で寒冷適応生物の画像化が改善された。
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すべての生き物は基本的な化学的および物理的プロセスに依存してるんだ。これらのプロセスには、物質の移動、混合、反応が含まれ、温度によって大きく影響を受ける。小さな分子から大きな細胞まで、さまざまな生物は生存できる特定の温度範囲を持ってる。もしこの範囲を超える温度になると、死んじゃうこともあるんだ。
例えば、人間の正常な体温は約37℃だけど、寒冷環境に住んでる他の生物の通常の温度はもっと低くて、2℃から5℃の範囲かもしれない。この範囲を下回ると、重要な化学反応の速度が遅くなって、細胞分裂やタンパク質の折りたたみといった生命に必要なプロセスに悪影響を及ぼす。
寒冷適応に関する研究はすごく重要なんだ。例えば、海の大部分はとても深くて冷たくて、温度は約4℃。陸とは違って、太陽光がすぐに物を温めることはないから、水はもっと安定した温度を保ってるんだ。これは多くの冷たい環境に生息する海洋種が独自の生存戦略を発展させてきたことを意味してるんだけど、既存の研究ツールは低温では効果的じゃないから、あまり理解されてないんだ。
寒冷画像化の課題
低温での生物研究の大きな問題の一つは、科学者が使う典型的なツール、例えば顕微鏡が寒冷環境でうまく機能しないことなんだ。低温でこれらのツールを使うと、画像がぼやけがちで、必要な低温を保ちながらサンプルを傷めずに保持するのが難しいんだ。
顕微鏡を冷却してサンプルを冷たく保つことには独自の課題がある。例えば、冷却中に氷ができたり、顕微鏡の部品が結露で濡れたりすることがある。これがメンテナンス中や温度を変える際にさらに問題を引き起こす。さらに、液体状のサンプルを使うと、露出した表面に凍る湿気を引き起こすこともある。
熱の移動の仕方も、周囲の空気よりもずっと冷たいサンプルの画像を取るときに問題を引き起こす。例えば、顕微鏡を温かく保ちながらサンプルが冷たいと、空気中の水分がレンズに結露することがある。顕微鏡も冷却されていると、氷ができるリスクがあって、画像化プロセスが複雑になるんだ。
サンプルを完全にチャンバーで覆う以前の方法は、画像が低解像度になったり、冷却している間の高品質の画像が取れなかったりするから、クリアな画像を提供できないことが多いんだ。これが、サンプルを冷たく保ちながら画像品質を犠牲にしない新しい方法とデザインの必要性につながっている。
新しい解決策
これらの課題に対処するために、冷たいサンプルの画像化のための新しい方法が開発された。このデザインは、科学者がサンプルを約0℃に保ちながらクリアな画像を取れる冷却チャンバーを作ることを含む。このアプローチは、通常寒冷サンプルを扱う際に発生する結露や熱伝達の問題を解決する。
冷却チャンバーのデザイン
冷却チャンバーのデザインには、顕微鏡のレンズを冷却しながらサンプルを適切な温度に保つ特別なカラーが含まれてる。アイデアはレンズを熱シンクとして使うこと。つまり、レンズが冷却されるとき、サンプルから熱を引き離すことで、サンプルが望ましい低温を持続できるってわけ。
実際のところ、これにより科学者は熱によってサンプルを傷めるリスクなしに生きている細胞を観察できる。冷却カラーは顕微鏡のレンズの上に取り付けるように設計されていて、画像を取る際に結露を防ぐために乾燥したガスが使用される。
このデザインは、より良い冷却を目指すだけでなく、サンプルとレンズの間に充填される液体の種類も考慮されている。画像化に使われる従来の液体は、冷たくなると厚くなりすぎてクリアな画像には適さなくなることがある。10%エタノールを含む混合物が最良の選択肢として証明された。この混合物はクリアで、冷却画像に役立つ十分に低い凍結点を持っている。
方法のテスト
冷却チャンバーのデザインが確立されたら、その効果をテストすることが重要だった。さまざまな温度で取得した画像の質を評価した。これには、冷たいサンプルから得られた画像の明瞭さと解像度を、暖かい温度で得られた画像と比較することが含まれてる。
テストの結果、この新しいアプローチが温度が冷たいから室温近くまで変わっても高品質な画像を可能にすることがわかった。異なる温度での画像の解像度に大きな変化は見られず、システムが信頼性があり効果的であることを示している。
さらにこの方法を確認するために、南極の水に住む魚の細胞を含むさまざまな生物サンプルを使ったテストが実施された。これらの魚は寒い条件に適応して生きていて、自然な温度で研究されることが重要なんだ。以前、この細胞を研究しようとしたとき、高い温度にさらされることでストレスや損傷が起きることがわかった。
南極魚サンプルからの結果
南極の魚の細胞に関する実験では、自然な冷たい温度の2℃で画像化されたグループと、1時間20℃に温度を上げられたグループが比較された。結果は、ほんの短い温度上昇でも細胞に損傷を与えたことを示していて、これらの寒冷適応生物が温度変化にどれだけ敏感かを示している。
彼らは細胞内のエネルギー産生に必須な小器官であるミトコンドリアの構造に顕著な変化を示した。これにより、寒冷環境に自然に存在する生物を研究するために適切な機器を使うことがいかに重要かがさらに示された。
結論
新しい冷却システムは、寒冷適応生物の研究において大きな進展を提供する。0℃近くでサンプルの高解像度画像化を可能にすることで、研究者たちはこれらの独特な環境で起こる生物学的プロセスについて洞察を得ることができ、研究されている生物にストレスや損傷を与えることなく進められる。
この方法を使えば、今後の研究では冷水生物の適応を探ったり、温度変化に対する反応を理解したり、気候変動に直面して彼らを守るための適切な解決策を模索したりできるようになる。この研究の影響は海洋生物学にとどまらず、バイオテクノロジーや食品保存などさまざまな分野に広がり、温度と生体系への影響の重要性を際立たせるんだ。
タイトル: A high-resolution microscopy system for biological studies of cold-adapted species under physiological conditions
概要: The fundamental processes governing life are sensitively dependent on temperature. Whilst much is known about the constraints on how proteins operate at 37{degrees}C, little knowledge exists about how biological function is maintained sub-zero temperature conditions, where proteins are less stable and oxidative damage is high. However, almost 90% of habitable environments on Earth are permanently below 5{degrees}C (i.e. the deep sea and polar regions). This means that we do not understand how a large and diverse proportion of the global biome functions. To address this question at the cellular level, tools are required for imaging biological systems at high resolution under physiological conditions. This poses severe technical challenges that cannot be addressed with traditional optical microscopy techniques. High-resolution imaging objectives require short working distances and the use of immersion media, which lead to rapid heat transfer from the microscope to the sample. This affects the viability of live specimens and the interpretability of the results when the sample function optimally at low temperatures. Condensation and temperature-induced shrinking of components pose further challenges, reducing image resolution and contrast. Here, we address these issues and provide a method for high-fidelity imaging of live biological samples at temperatures of around, or below, 0{degrees}C. Our method is compatible with different microscopy modalities, including super-resolution imaging. It relies on hardware additions to traditional microscopy systems that can be straightforwardly implemented, namely, a cooling collar, 10% ethanol as an immersion medium, and nitrogen flow to mitigate condensation. We demonstrate the method in live cell cultures derived from Antarctic fish species and highlight the need to maintain physiological conditions for these fragile biological samples. Future applications are diverse and include evolutionary biology and the study of cold-adapted organisms, as well as cellular biophysics and several applications in biotechnology.
著者: Clemens F Kaminski, A.-P. M. Marty, E. N. Ward, J. R. Lamb, F. W. van Tartwijk, L. S. Peck, M. S. Clark
最終更新: 2024-09-20 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.17.613460
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.17.613460.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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