高温に適応した大腸菌
研究者たちは、適応型実験進化を使って大腸菌の耐熱性を向上させた。
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温度は細胞の生活において重要な役割を果たしてるんだ。温度の変化は細胞の成長や生存に影響を与えることがあるんだよ。例えば、細胞には成長できる温度範囲があって、その中には耐えられる最低温度と最高温度が含まれている。一部の生物は、暑い温度や寒い温度といった極端な温度に対処する方法を進化させてきたんだ。細胞が温度変化にどのように適応するかをもっと知ることは重要で、特に気候変動が進む中では大切なことだよ。この知識は、科学者が暖かい条件でもうまく生きられる生物を作る手助けになるかもしれない。例えば、サンゴやその微生物を使って、気温上昇からサンゴ礁を守るための研究が進められているんだ。
適応型実験室進化
実験室では、研究者が進化を模倣する条件を作ることができるんだ。その方法の一つが、適応型実験室進化(ALE)って呼ばれるものなんだ。ALEでは、科学者が特定の条件で細胞を選んで育てて、適応を促すんだ。プロセスの中で最も成績の良い系統を選ぶことで、ランダムな変異を待つ代わりに、細胞の変化を早めることができるんだ。これは、微生物の変異率を上げることで進めることができるよ。成長条件を変えたり、特定の遺伝子を変更したりするいくつかの方法が使われる。
微生物はすぐに増殖できるから、ALEには理想的なんだ。この実験では、細胞を繰り返し挑戦的な条件で育てるんだ。実験が進むにつれて、ストレスのレベルが上がるんだよ。例えば、E. coliを使った研究では、温度を少しずつ上げていき、細胞に大きなストレスを与えたことがあった。科学者がDNAを分析したとき、ストレスや成長を管理する重要な遺伝子に変化が見つかることが多かったんだ。
方法論
この研究では、特別なプラスミドMP6を使って高温でのE. coliのALEを向上させたんだ。このプラスミドは変異率を上げて、進化を早めることができた。研究者たちは150日間実験を行い、最終系統、初期系統、そして2つの中間系統を全ゲノムをシーケンシングして分析したんだ。
彼らの研究を通じて、進化した系統が高温で成長できるようになり、エタノールに対する耐性を得たことを観察したんだ。この耐熱系統で発生した変異は、以前には記録されていなかった進化の道筋を示していたんだ。細胞の重要な機能に関連する特定の遺伝子が、以前の研究と比べて独特な変化を示したんだよ。
実験デザイン
研究者たちは、MP6プラスミドを持つE. coli系統DH10Bから始めたんだ。彼らは細胞が育成される温度を徐々に上げていき、43.5 °Cから46.9 °Cまで達したんだ。実験中に、時々MP6プラスミドを外して新しいコピーを再導入して、安定した変異率を保つようにしたんだ。進化した細胞はHE_Xでマークされていて、Xは24時間の成長サイクルの数を示してる。
成長分析
研究者がアガープレート上のさまざまな系統の成長を見たとき、はっきりとした違いが見つかったんだ。元々のDH10B系統は45 °Cでコロニーを形成できたが、進化した系統の中にはそれよりもさらに高い温度で成長できるものもあったんだ。具体的には、最終的に進化した系統HE_150は、初期系統より約2 °C高い温度で成長できたんだよ。
また、彼らは液体培養における異なる温度での成長の良さも測定したんだ。元の系統は45.3 °C以上で育つのが難しかったが、進化した系統はより良く成長し、より高い光密度に達して、ストレス下でもうまく生きられることを示していたんだ。
エタノールへの適応
温度の耐性に加えて、進化した系統は一般的な溶媒であるエタノールに対する耐性も向上していたんだ。進化した3つの系統は4%のエタノールの存在下でもうまく成長したが、元の系統はその条件では生き残れなかったんだ。これは、高温に適応することが、他の環境ストレス要因、例えば溶媒に耐性を持つことにつながることを示唆しているよ。
遺伝子シーケンシング
この進化の過程で起こった遺伝的変化をより良く理解するために、研究者たちは元のDH10B系統と進化した系統の染色体DNAをシーケンシングしたんだ。彼らは数百万もの遺伝的変化、主に一塩基多型(SNP)を見つけたんだ。これらの変化は、細胞が時間とともにどのように適応してきたかについての洞察を提供しているんだよ。
彼らの分析では、さまざまな機能において重要とされる遺伝子、特に熱ショック応答に関連する遺伝子に注目したんだ。これらの遺伝子の変化は、細胞が温度の変化に対してより強靭になる理由を説明するかもしれないね。
全ゲノムシーケンシングからの観察
研究者たちは、進化プロセスの過程で発生した数百の遺伝的変異を見つけたんだ。また、後の系統で失われた変異も見られたんだ。平均して、進化した系統は実験の間に毎日いくつかの変異を獲得していたんだ。これらの変化の大部分は小さなもので、一塩基の変化だったんだよ。
興味深いことに、進化した系統は細胞機能と安定性を維持するために重要な遺伝子に変異を持っていたんだ。それに加えて、細胞がストレスのある条件で生き残るのを助ける熱ショック遺伝子の変異も見つけたんだ。これらの結果は、系統がランダムな変異だけでなく、熱ストレス下での生存に追加の利益をもたらす変化を通して適応した可能性を示唆しているよ。
蛋白質発現の変化
観察された遺伝的変化が蛋白質レベルにどのように影響を与えたかを知るために、研究者はプロテオミクス分析を行ったんだ。彼らは、親系統と進化した系統の蛋白質発現を異なる温度で比較したんだ。彼らは、発現が変化した多くの蛋白質を特定し、遺伝子の変異がどれだけの蛋白質が生成されたかに影響を与えたことを示しているんだ。
調べた蛋白質の中には、温度や系統の種類に基づいて特異な発現パターンを示すものがたくさんあったんだ。進化した系統は高温でのいくつかの熱ショック蛋白質の量が増えている傾向があったんだ。これらの蛋白質は、細胞がストレスを管理し、適切な機能を維持するのに重要な役割を果たすんだよ。
独自の進化の道筋
進化した系統で見られた変異は、以前の研究とは異なる独自の進化の道筋を示しているんだ。温度適応に関する研究で一般的な変異もあるけど、この研究での特定の組み合わせやその蓄積の速度は前例がなかったんだ。
研究者たちは、これらの進化プロセスを研究することの重要性を強調しているんだ。なぜなら、それが生物が変化する環境に適応する方法の理解に貢献するからなんだ。遺伝子や蛋白質レベルの変化を探ることで、急速な適応を可能にするメカニズムについての洞察を提供するんだよ。
結論
ALEとMP6プラスミドを使うことで、研究者はE. coliの進化を成功裏に高温に耐えられるようにしたんだ。この発見は、環境ストレスに応じて遺伝的変化がどれほど早く発生するかや、熱耐性の進化に関わる複雑さを強調しているんだ。
変異や蛋白質発現の変化に焦点を当てることで、この研究は気候変動や他の環境的な課題に直面する微生物の適応力についての洞察を提供するんだ。この研究は微生物学の分野の理解を深めるだけでなく、将来的に極端な条件に耐える生物を設計することにもつながるかもしれないんだ。
要するに、これらの適応は多くの生物の生存にとって重要で、特に地球の気温が上昇し続ける中で重要なんだ。
タイトル: Genomic analysis of laboratory-evolved, heat-adapted Escherichia coli strains
概要: Adaptive laboratory evolution to high incubation temperatures represents a complex evolutionary problem, and each study to date performed in Escherichia coli has resulted in a different set of mutations. We performed adaptive laboratory evolution of E. coli to heat by passaging a culture at elevated temperatures for 150 days. Throughout the adaptive evolution we expressed a set of genes that induce hyper-mutagenesis. These growth conditions yielded a strain with a maximum growth temperature approximately 2 {degrees}C above that of the parental strain. We preserved evolved isolates weekly and obtained and analyzed whole-genome sequencing data for three isolates from different time points. We identified hundreds of mutations, including mutations in components of the RNA polymerase (RpoB, RpoC and RpoD), Rho, and the heat shock proteins GroES, GroEL, DnaK, ClpB, IbpA and HslU. We compared the proteomes of the starting strain and final strain grown at 37 {degrees}C and 42.5 {degrees}C and identified changes in abundance between samples for GroESL, HslVU, DnaK, ClpB and other important proteins. This study details a distinct evolutionary route towards enhanced thermotolerance, contributes to our understanding of adaptation to heat in Escherichia coli and may provide insights into heat adaptation in other organisms.
著者: Bailey E McGuire, F. E. Nano
最終更新: 2024-10-03 00:00:00
言語: English
ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.01.616104
ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.01.616104.full.pdf
ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。
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